基于s-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的制作方法

基于s-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的制作方法
【專利摘要】本發明首次將炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EA1與甲基對硫磷水解酶MPH融合表達，通過體外自組裝技術，獲得了一種全新的基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料。該材料制備步驟包括重組載體PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH的構建，融合蛋白的表達與純化，融合蛋白的體外自組裝。本發明具備明顯的生物學功能，能夠延長MPH的貯存時間，在有機磷農藥降解中充分、長期發揮作用，降低成本；具有抑菌、殺菌的應用前景；能夠顯著提高檢測靈敏度，用于發展高靈敏檢測元件。
【專利說明】基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物納米材料，特別是涉及一種基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料。
【背景技術】
[0002]生物、化學、材料等多種學科的交叉發展，開創了納米科學的新時代。如今，納米材料已經廣泛應用于超分子結構、裝置的制造，并在多個領域發揮重要作用，但是如何獲得具有精細結構、尺寸均一、功能化的納米材料仍然是個挑戰。由于經過數億年的生物進化，大自然中普遍存在著獨特的分子自組裝系統，控制超分子結構的合成。受此啟發，近年來研究者們開始利用分子自組裝系統開發理想的生物納米材料，以滿足電子、生物、工程等行業的需求，以“bottom-up”形式自組裝的 S-層蛋白(Surface layer protein, S-1ayer protein)也因此而矚目。
[0003]S-層蛋白是一種天然的生物納米材料。由文獻1(U.B.Sleytr, M.Sara, Trendsin biotechnology1997，15，20;T.Pavkov-Kellerj S.HoworkajW.Keller，Progress inmolecular biology and translational science2011，103，73.)可知:S_ 層蛋白是廣泛存在于古菌和細菌菌體表面，具有規則晶體結構的單分子層，它與位于其下方的細胞膜或者細胞壁以非共價形式連接，完整的包裹著菌體，構成了生物體與外界環境之間一道天然屏障。由文獻 1、文獻 2 (M.Saraj U.B.Sleytr, Progress in biophysics and molecularbiologyl996, 65，83 ;U.B.Sleytr, T.J.Beveridge, Trends in microbio logy 1999, 7，253.)和文獻 3 (B.Schuster，U.B.Sleytr，Methods Mol Biol2013，996，153)可知:大部分 S-層蛋白由單一蛋白質或糖蛋白組成，相對分子質量為40-230kDa之間，形成PU P2、P3、P4和P6多種結構(亞結構單元數目為1、2、3、4、6)，其亞單位的排列可呈現斜形(P1、P2)、正方形(P4)和六邊形(P3、P6)對稱。由文獻 4(U.B.Sleytr, C.Huber, N.1lk, D.Pum, B.Schuster, E.M.Ege I seer, FEMS microbiology letters2007, 267, 131.)可知:細菌的 S-層蛋白厚度通常約為5_20nm,古細菌的S-層蛋白厚度可達70nm。由文獻5(Μ.Sara, U.B.Sleytr, Journal ofbacteriology2000, 182, 859)可知:各形態單位的中心間距為2.5_35nm, S-層表面的孔洞直徑為 2_8nm,占據菌體表面的 70%。由文獻 6(U.B.Sleytr, B.Schuster, E.M.Egelseer, D.Pum, C.M.Horejs, R.Tscheliessnig, N.1lk, Progress in molecular biology andtranslational science2011, 103, 277.)和文獻 7 (D.Pum, J.L.Toca-Herrera, U.B.Sleytr, International journal of molecular sciences2013, 14，2484.)可知:S-層蛋白是地球上最多的生物分子之一，在具有S-層蛋白的生物體中，被用于合成S-層的蛋白通常占細胞總蛋白的10%。參見文獻7，對于一個中等大小的桿狀細菌而言，其完整的S-層蛋白需要5 X IO5個單體組成，在代時約為20-30min的細菌生長過程中，S-層蛋白的形成體現了完美的超分子結構組裝的動力學過程。
[0004]在過去的幾十年里，S-層蛋白在結構、化學、遺傳、形態發生和功能上蘊含的豐富信息充分體現了其潛在的應用價值。參見文獻3和文獻8(S.H.Shin, S.Chung, B.Sanii, L.R.Comolli, C.R.Bertozzi, J.J.De Yoreo, Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America2012, 109，12968.),重要的是,不管是分離自菌體表面還是體外重組表達的S-層蛋白都能夠在懸浮液、固相支持物、脂質膜等多種界面或者表面上重新自組裝成與天然結構相同或者相似的單分子晶格結構，因而奠定了S-層蛋白在作為生物納米材料的研究基礎。已有研究:參見文獻9 (B.Schuster, D.Pum, Μ.Sara, U.B.Sleytr, Mini reviews in medicinal chemistry2006, 6，909.),仿生學領域廣泛應用的基礎；參見文獻 10(C.Gobel, B.Schuster, D.Baurecht, U.B.Sleytr, D.Pum, Colloidsand surfaces.B, Biointerfaces2010, 75, 565.), S-層蛋白作為合成娃的模板；參見文獻 11 (D.Schuster, S.Kupcu, D.J.Belton, C.C.Perry, M.Stoger-Pollach, U.B.Sleytr, D.Pum, Acta biomaterialia2013, 9, 5689.),基于S-層蛋白制造新納米娃材料；參見文獻12(J.Liu, Y.Mao, E.Lan, D.R.Banatao, G.J.Forse, J.Lu, H.0.Blom, T.0.Yeates, B.Dunn, J.P.Chang, Journal of the American Chemical Society2008, 130, 16908.),用 S-層蛋白為模板制成氧化物納米材料；參見文獻13 (S.R.Scheicher, B.Kainz, S.Kostler, N.Reitinger, N.Steiner, H.Ditlbacher, A.Leitner, D.Pum, U.B.Sleytr, V.Ribitsch, Biosensors&bioelectronics2013, 40, 32.),以二維納米結構的S-層蛋白為固定模板的DNA微陣列等。由此可見，S-層蛋白作為納米材料近幾年已經成為一個新的研究熱點。但是現階段對于S-層蛋白的很多研究是針對于其理化性質，往往忽視了它們原本的生物學功能，這無形中縮小了 S-層蛋白作為生物納米材料的應用范圍。炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl為無毒蛋白，不僅具有潛在的體外自組裝能力，而且是炭疽芽孢桿菌重要抗原，并具有胞壁質水解酶的活性。甲基對硫磷水解酶MPH，不僅可高效降解有機磷農藥，而且可作為標記酶用于體外分析檢測。因此，本發明充分利用EAl和MPH兩種蛋白的生物學特性，首次開發了一種基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料，該材料可應用于多個領域。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是發明一種基于S-層蛋白EAl體外自組裝的多功能新型生物納米材料。該材料不具有炭疽芽孢桿菌的危害性，具有Pi對稱晶格的膜狀結構，具有胞壁質水解酶活性，可作為炭疽芽孢桿菌`重要抗原，高靈敏識別特異性抗體。
[0006]本發明的另一個目的是將上述自組裝材料進一步多功能化，使其能夠穩定甲基對硫磷水解酶的活力，用于有機磷農藥降解及體外特異性抗體分析檢測。
[0007]本發明解決其技術問題提供以下的技術方案:
[0008]本發明提供的多功能新型生物納米材料，是一種基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料，該材料由包括以下步驟的方法獲得:
[0009](I)重組載體 PQE30-MPH 和 PQE30-EA1-MPH 的制備:
[0010]擴增甲基對硫磷水解酶MPH基因和炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl基因，并克隆至商業化載體PQE30中，分別獲得重組載體PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH。
[0011]所述MPH基因的擴增引物是:
[0012]5，-ATATCTGCAGGCCGCACCGCAGGTG-3，，
[0013]5’ -GTGAAGCTTTTACTTGGGGTTGACGAC-3’ ；
[0014]所述EAl基因的擴增引物是:[0015]5 ’ -TGTAGGATCCGCAGGTAAATCATTC-3’，
[0016]5’ -GCCGAGCTCTAGATTTGGGTTATTA-3’ ；
[0017](2)融合蛋白的制備:
[0018]將重組載體PQE30-EA1-MPH通過常規CaCl2轉化法轉化至大腸桿菌Escherichiacoli M15 (E.coli M15)中，表達、純化融合蛋白:挑取單克隆于5ml LB培養基中(100 μ g/ml氨芐青霉素，50 μ g/ml卡那霉素)，37°C過夜培養16~20h，按1%的接種量轉接于LB培養基中(100 μ g/ml氨芐青霉素，50 μ g/ml卡那霉素)，37°C培養至OD值為0.6~0.8，此時加入ImM的IPTG誘導目的蛋白質的表達，表達條件為28°C，4~5h。表達后的菌體6000rpm，4°C收集，超聲破碎，用鎳柱親和純化目的蛋白，并用BCA試劑盒測濃度。
[0019](3)體外自組裝多功能新型生物納米材料:
[0020]將上述融合蛋白EA1-MPH30~100 μ g/ml置于pH9.0的組裝緩沖液(IOmM CaCl2、0.5mM Tris-HCl)中，室溫過夜組裝。電鏡觀察，確定其形成具有規則晶格結構的納米膜，該納米膜為所述多功能新型生物納米材料。
[0021]本發明多功能新型生物納米材料可以具有Pl對稱晶格的膜狀結構。
[0022]本發明多功能新型生物納米材料可以用于有機磷農藥降解。 [0023]本發明多功能新型生物納米材料可以穩定甲基對硫磷水解酶的活力，可以用于酶的長時間貯存。
[0024]本發明多功能新型生物納米材料可以具有胞壁質水解酶活性，可以用于抑制溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)。
[0025]本發明多功能新型生物納米材料可以作為炭疽芽孢桿菌抗體檢測的超靈敏元件。
[0026]所述超靈敏元件可以為:自組裝后的多功能新型生物納米材料。
[0027]本發明與現有技術相比，主要有以下優勢:
[0028]1.已有S-層蛋白自組裝材料研究均圍繞其自組裝特性展開，不具備明顯的生物學功能。本發明中基于EAl蛋白的生物納米膜則具有胞壁質水解酶活性、同時呈現炭疽芽孢桿菌抗原特性；本發明中基于融合蛋白EAl-MPH自組裝的多功能新型生物納米材料則兼有EAl和MPH共同特性。
[0029]2.有機磷農藥是病蟲害防治的常用農藥之一，對環境造成很大污染，有害于人和動物的健康。甲基對硫磷水解酶可以有效降解有機磷農藥。本研究表明，游離的MPH在4°C、37°C保存過程中，其活力損失遠遠大于自組裝成納米膜的EA1-MPH。因此，本發明涉及的多功能新型生物納米材料能夠延長MPH的貯存時間，在有機磷農藥降解中充分、長期發揮作用，降低成本。此外，當甲基對硫磷水解酶作為標記酶用于體外分析檢測時，本發明有利于穩定顯色信號，從而提高檢測靈敏度。
[0030]3.本發明涉及的多功能新型生物納米材料具有胞壁質水解酶的活性，可水解細菌細胞壁，因而具有抑菌、殺菌的應用前景。
[0031]4.本發明涉及的多功能新型生物納米材料能夠高靈敏特異性識別EAl抗體，其檢測靈敏度比游離的EAl提高200倍以上，可用于發展高靈敏檢測元件。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1為本發明檢測溶液中炭疽芽孢桿菌抗體的流程示意圖。【具體實施方式】
[0033]本發明涉及一種基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料。不同維度的生物納米材料是當今研究熱點。細菌S-層蛋白可在體外自組裝成具有天然S-層晶格結構的二維納米膜，因而被廣泛關注。然而，如何獲得具有精細結構、尺寸均一、功能化的二維生物納米材料仍然存在挑戰。本發明首次將炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl與甲基對硫磷水解酶MPH融合表達，通過體外自組裝技術，獲得了一種多功能新型生物納米材料:I)具有Pl對稱晶格的膜狀結構2)可用于有機磷農藥降解3)能夠穩定甲基對硫磷水解酶的活力，用于酶的長時間貯存4)具有胞壁質水解酶活性，可用于抑菌5)可作為炭疽芽孢桿菌抗體檢測的超靈敏元件。
[0034]下面結合過實施例及附圖對本發明作進一步說明，但不限定本發明。
[0035]實施例1.基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料
[0036]該多功能新型生物納米材料是采用以下方法獲得:
[0037]1.重組載體 PQE30-MPH 和 PQE30-EA1-MPH 的制備:
[0038]擴增甲基對硫磷水解酶MPH基因和炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl基因，并克隆至商業化載體PQE30中，分別獲得重組載體PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH。其中:MPH基因是從質粒中PCR獲得，該質粒為中國科學院一實驗室構建，參見文獻14(L.Sun, Y.Dong, Y.Zhou, Μ.Yang,C.Zhang, Z.RaojX.E.Zhang, Acta crystal1graphica.Section D，Biologicalcrystallography2004, 60, 954.)。EAl基因是從質粒中PCR獲得，該質粒為中國科學院一實驗室構建，參見文獻 15 (D.B.Wang, R.Yang, Z.P.Zhang, L.J.Bi, X.Y.You, H.P.Wei, Y.F.Zhou, Z.Yu, X.E.Zhang, PloS one2009, 4, e7810.)
[0039]所述MPH基因的擴增引物是:
[0040]5，-ATATCTGCAGGCCGCACCGCAGGTG-3，，
[0041]5’ -GTGAAGCTTTTACTTGGGGTTGACGAC-3’ ；
[0042]所述EAl基因的擴增引物是:
[0043]5，-TGTAGGATCCGCAGGTAAATCATTC-3，，
[0044]5’ -GCCGAGCTCTAGATTTGGGTTATTA-3’ ；
[0045]在擴增甲基對硫磷水解酶MPH基因過程中，其方法是常規PCR反應，即聚合酶鏈式反應:反應液中包含上游引物(20πιΜ，1μ 1)，下游引物(20πιΜ，1μ 1)，DNA模板(含有MPH基因的質粒，10ng)，4 種 dNTP 混合物(2.5mM,4y I), IOXProbest PCR 緩沖液(5ul)，ProbestDNA聚合酶(0.3 μ 1)，補超純水至50 μ I。將混勻的溶液置于PCR儀器上，設置條件為:94°C變性5min ;94°C變性30s，60。。退火30s，72。。延伸lmin，35個循環；最后72°C延伸IOmin0
[0046]在擴增炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl基因過程中，其方法是常規PCR反應，即聚合酶鏈式反應:反應液中包含上游引物(20πιΜ，1μ 1)，下游引物(20πιΜ，1μ 1)，DNA模板(含有EAl 基因的質粒，10ng)，4 種 dNTP 混合物(2.5mM，4 μ I), IOXProbest PCR 緩沖液(5ul)，Probest DNA聚合酶(0.3 μ 1)，補超純水至50 μ I。將混勻的溶液置于PCR儀器上，設置條件為:94°C變性5min ;94°C變性30s，53°C退火30s，72°C延伸160s，35個循環;最后72。。延伸 IOmin0
[0047]所述克隆至商業化載體PQE30中的方法是:將PCR所得基因經過雙酶切與同樣雙酶切后的載體相連接(MPH雙酶切位點為Pst I和Hind III，EAl的雙酶切位點為BamH I和Sac I )，CaC12轉化法轉化至大腸桿菌E.coli M15中，將獲得的克隆測序，得到序列正確的克隆。
[0048]2.融合蛋白的制備:
[0049]將重組載體PQE30-EA1-MPH通過常規CaC12轉化法轉化至大腸桿菌Escherichiacoli M15(E.coli M15)中，表達、純化融合蛋白:挑取單克隆于5ml LB培養基中(100 μ g/ml氨芐青霉素，50 μ g/ml卡那霉素)，37°C過夜培養16~20h，1%接種量轉接于LB( 100 μ g/ml氨芐青霉素，50 μ g/ml卡那霉素)，37°C培養至OD值為0.6~0.8，ImM的IPTG誘導，28°C培養4~5h。6000rpm4°C收集菌體lOmin，超聲破碎后，用鎳柱親和純化目的蛋白，用BCA試劑盒測濃度。
[0050]所述常規CaCl2轉化法是:將PCR所得基因經過雙酶切與同樣雙酶切后的載體相連接(MPH雙酶切位點為Pst I和Hind III，EAl的雙酶切位點為BamH I和Sac I )，將連接后的產物10 μ 1加入100μ I的Escherichia coli M15 (E.coli M15)感受態中，冰上放置30min后，42°C，90s熱激，熱激后的菌液立即放置冰上2min，加入900 μ I的LB培養基，置于37°C培養Ih后涂布LB固體培養平板(100 μ g/ml氨芐青霉素，50 μ g/ml卡那霉素)，37°C靜置培養16~20h。
[0051]所述IPTG誘導是:異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強的誘導劑，它可以誘導外源基因的表達，普遍應用于原核表達系統，使其表達量增高，產物穩定，具有易鑒定，易純化的優點。
[0052]3.體外自組裝多功能新型生物納米材料:
[0053]將上述融合蛋白EA1-MPH30~100 μ g/ml置于pH9.0的組裝緩沖液(IOmM CaCl2、0.5mM Tris-HCl)中，室溫過夜組裝。電鏡觀察，確定其形成具有規則晶格結構的納米膜。
[0054]經過上述步驟，得到所述多功能新型生物納米材料。
[0055]實施例2.基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的應用
[0056]由實施例1制備的多功能新型生物納米材料，其用于有機磷農藥降解。
[0057]在用于有機磷農藥降解過程中，將多功能新型生物納米材料加入含有有機磷農藥甲基對硫磷溶液中，充分反應后可以肉眼看見溶液變黃，且在OD4tl5nm處有特征吸收峰，說明有機磷農藥已被該多功能新型生物納米材料水解成對硝基苯酚(PNP)。
[0058]實施例3.基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的應用
[0059]由實施例1制備的多功能新型生物納米材料，其能夠穩定甲基對硫磷水解酶的活力，用于酶的長時間貯存。
[0060]在用于酶的長時間貯存的過程中，研究發現在4°C和37°C貯存時，多功能新型生物納米材料酶穩定性要明顯高于游離酶組。
[0061]實施例4.基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的應用
[0062]由實施例1制備的多功能新型生物納米材料，其具有胞壁質水解酶活性，用于抑制溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)。
[0063]實施例5.基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料的應用
[0064]由實施例1制備的多功能新型生物納米材料，其作為炭疽芽孢桿菌抗體檢測的超靈敏元件。該超靈敏元件無毒，可以在短時間內快速靈敏檢測溶液中的炭疽芽孢桿菌抗體。[0065]本發明提供的上述多功能新型生物納米材料，其性能可以通過下述方法檢測。
[0066]1.多功能新型生物納米材料的甲基對硫磷水解酶活及穩定性測定:
[0067]檢測方法是:等摩爾的游離MPH和本發明中的多功能新型生物納米材料分別在4°C和37°C貯存，結果發現:4°C貯存45天時，EAl-MPH組裝蛋白還保有70%的酶活，明顯高于非組裝條件下的EAl-MPH和游離MPH ;37°C貯存5天時，組裝的EAl-MPH同樣比對照組酶活要高。結論:本發明涉及的多功能新型生物納米材料能夠穩定甲基對硫磷水解酶的活力。
[0068]2.多功能新型生物納米材料的胞壁質水解酶功能測定:
[0069]配制分離膠為10%SDS_PAGE蛋白膠，膠中包含0.2%(w/v)溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus ATCC N0.4698 購買自 Sigma 公司)。純化的融合蛋白EAl-MPH煮沸3分鐘后進行SDS-PAGE分析。完整的蛋白膠于超純水中洗滌30min，然后復性于 l%Triton X_100，25mM Tris-HCl, ρΗ8.0 中，37 °C，16 ~20h。復性后的蛋白膠用超純水洗滌并用1%的亞甲基藍(溶于0.01%(w/v)K0H)室溫染色5min，超純水洗脫至目的蛋白條帶透明。此時，整塊蛋白膠因為混有能被亞甲基藍染色的溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)而呈現淡藍色，但是目的蛋白由于可以水解細胞壁所以呈現透明色。結論:本發明涉及的多功能新型生物納米材料有胞壁質水解酶的活力，可以降解細菌細胞壁。
[0070]3.多功能新型生物納米材料用于超靈敏檢測特異性抗體:
[0071](I)磁珠偶聯:
[0072]將100~300nm直徑的磁珠(購買自Ademtech公司)與EDC(購買自sigma公司)和sulfo-NHS (購買自sigma公司)于室溫混合2h ;加入羊抗小鼠IgG，37°C，孵育2h，使磁珠顆粒與羊抗小鼠IgG充分接觸；用5%BSA37°C封閉2h ；0.01M PBS洗滌數次，4°C儲存。
[0073](2)多功能新型生物納米材`料識別特異性抗體:
[0074]取一定量(例如20 μ I)的磁珠與1%的BSA混合，加入不同濃度的炭疽芽孢桿菌單克隆抗體，37°C，20min ;用PBST洗滌磁珠3次，加入等量自組裝的EAl-MPH (多功能新型生物納米材料)和游離的EAl-MPH，37°C，20min ;用四硼酸鈉溶液洗滌3次；加入100 μ 10.25mM甲基對硫磷，37°C，15min，顯色；取反應后的溶液100 μ I于OD4tl5nm下測試其吸光值。結論:本發明涉及的多功能新型生物納米材料可以超靈敏檢測特異性抗體，其檢測靈敏度比游離的蛋白高200倍以上。
【權利要求】
1.一種多功能新型生物納米材料，其特征是一種基于S-層蛋白體外自組裝的多功能新型生物納米材料，該材料由包括以下步驟的方法獲得: (1)重組載體PQE30-MPH 和 PQE30-EA1-MPH 的制備: 擴增甲基對硫磷水解酶MPH基因和炭疽芽孢桿菌S-層蛋白EAl基因，并克隆至商業化載體PQE30中，分別獲得重組載體PQE30-MPH和PQE30-EA1-MPH。 所述MPH基因的擴增引物是:
5’ -ATATCTGCAGGCCGCACCGCAGGTG-3’，
5’ -GTGAAGCTTTTACTTGGGGTTGACGAC-3’ ； 所述EAl基因的擴增引物是:
5’ -TGTAGGATCCGCAGGTAAATCATTC-3’，
5’ -GCCGAGCTCTAGATTTGGGTTATTA-3’ ； (2)融合蛋白的制備: 將重組載體PQE30-EA1-MPH通過常規CaCl2轉化法轉化至大腸桿菌Escherichia coliM15中，表達、純化融合蛋白:挑取單克隆于5ml雙抗性LB培養基中，37°C過夜培養16~20h，按1%的接種量轉接于雙抗性LB培養基中，37°C培養至OD值為0.6~0.8，此時加入ImM的IPTG誘導目的蛋白質的表達，表達條件為28°C，4~5h。表達后的菌體6000rpm，4°C收集，超聲破碎，用鎳柱親 和純化目的蛋白，并用BCA試劑盒測濃度；所述雙抗性LB培養基由胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化鈉10g/L, 100 μ g/ml氨節青霉素和50 μ g/ml卡那霉素組成。 (3)體外組裝多功能新型生物納米材料: 將上述融合蛋白EA1-MPH30~100 μ g/ml置于pH9.0的組裝緩沖液中，該組裝緩沖液為IOmM CaCl2、0.5mM Tris-HCl，室溫過夜組裝；電鏡觀察，確定其形成具有規則晶格結構的納米膜，該納米膜為所述多功能新型生物納米材料。
2.根據權利要求1所述的多功能新型生物納米材料，其特征是:具有Pl對稱晶格的膜狀結構。
3.根據權利要求1所述的多功能新型生物納米材料，其特征是:用于有機磷農藥降解。
4.根據權利要求1所述的多功能新型生物納米材料，其特征是:能夠穩定甲基對硫磷水解酶的活力，用于酶的長時間貯存。
5.根據權利要求1所述的多功能新型生物納米材料，其特征是:具有胞壁質水解酶活性，用于抑制溶壁微球菌。
6.根據權利要求1所述的多功能新型生物納米材料，其特征是:作為炭疽芽孢桿菌抗體檢測的超靈敏元件。
7.根據權利要求6所述的多功能新型生物納米材料，其特征是所述超靈敏元件為:自組裝后的多功能新型生物納米材料。
【文檔編號】G01N33/68GK103805580SQ201410052723
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月17日 優先權日:2014年2月17日
【發明者】張先恩, 王殿冰, 王旭穎, 張治平 申請人:中國科學院生物物理研究所