快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法
【專利摘要】一種快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法。首先制備對照品和供試品溶液，然后分別吸取對照品溶液，供試品溶液，點于同一塊硅膠薄層板上，以展開劑上行展開，取出晾干，分別置紫外光燈下觀察薄層色譜，再噴上硫酸乙醇溶液，并置于烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈下觀察薄層色譜，若與對照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點、熒光斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性。顯然，本發(fā)明操作簡便，快速，成本低，既解決了其中的假“陽性”干擾的問題，也避免了傳統(tǒng)采用紅外光譜、HPLC-MS等測定所產(chǎn)生的昂貴費用和大量時間，使有效監(jiān)控中成藥小活絡丸內(nèi)是否非法添加化學藥品成為可能。
【專利說明】快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥質量檢測領域，具體涉及一種快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法。
【背景技術】
[0002]小活絡丸是由膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)共6味中藥飲片組成的中藥制劑。主要功效是祛風散寒，化痰除濕，活血止痛。用于風寒濕邪閉阻、痰瘀阻絡所致的痹病，癥見肢體關節(jié)疼痛，或冷痛，或刺痛，或疼痛夜甚、關節(jié)屈伸不利、麻木拘攣。其制備方法是將膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)分別粉碎成細粉，過篩，混勻，每IOOg細粉加煉蜜120?130g制成大蜜丸。該中藥制劑成分復雜，臨床用于治療風濕性關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎及骨質增生所致的腰痛、腿痛、頸痛、上肢痛等痹證，坐骨神經(jīng)痛，十二指腸壅積癥等。屬抗風濕類中成藥。為了追求經(jīng)濟利益，一些不法分子在小活絡丸中非法添加具有解熱、抗炎、止痛作用的廉價化學藥品，以達到快速顯效的效果。而患者在不知情的情況下過多攝入這些化學藥品后，會對身體造成極大的危害。
[0003]抗風濕類中成藥內(nèi)非法添加化學藥品主要有兩大類:解熱鎮(zhèn)痛類和糖皮質激素類。目前，檢測抗風濕類中成藥內(nèi)非法添加化學藥品的方法均為不限定中成藥具體種類的通用方法。該通用方法涉及所有抗風濕類中成藥，范圍廣，但抗風濕類中成藥種類繁多，而每一種中成藥的組方都各不相同，極易產(chǎn)生假“陽性”干擾，無法明確地判定結果，因此通用方法僅能做到粗篩。而且由于假“陽性”的干擾，所檢測的化學藥品僅限于解熱鎮(zhèn)痛類或糖皮質激素類中有限的幾種。如張鶴等“關于抗風濕類中藥制劑中非法添加化學藥品的檢測方法研究”(亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥.2010.6 (6):31-32)先采用薄層色譜法進行粗篩，而后必須再進一步對其中的陽性樣品采用紅外光譜或高效液相色譜法進行驗證。但由于紅外光譜儀、HPLC-MS、GC-MS儀器昂貴，且必須由專業(yè)的技術人員操控，維護費用也極高，無法實現(xiàn)快速篩查達到監(jiān)控的目的。顯然，完全針對小活絡丸內(nèi)非法添加多種化學藥品構建起能進行快速篩查的方法是非常必要的。因此，為了使在小活絡丸內(nèi)非法添加化學藥品的違法行為得到有效扼制，保障人民群眾用藥安全有效，亟需建立小活絡丸內(nèi)非法添加化學藥品的快速篩查方法。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法，以克服現(xiàn)有技術的不足。
[0005]本發(fā)明的另一目的是排除小活絡丸和非法添加化學藥品的假“陽性”干擾，實現(xiàn)多種非法添加化學藥品的快速篩查，達到監(jiān)控的普及可行。
[0006]小活絡丸是一個中藥制劑，雖然組方藥味不多，但化學成分十分復雜，加之非法添加化學藥品，測定時極易出現(xiàn)假“陽性”干擾。通常假“陽性”干擾必須采用紅外光譜儀、HPLC-MS,GC-MS進行成分確證。研究發(fā)現(xiàn)，由于小活絡丸中所需篩查的10種化學藥品成分均有溶于甲醇的性質，且甲醇對大蜜丸中的煉蜜溶解度低，因此利用該性質，選用甲醇作為提取溶劑?？紤]到小活絡丸是大蜜丸，如不進行分散，該提取溶劑無法滲入到樣品中，不能充分提取待測的化學藥品。因此取小活絡丸一丸(3g)，剪碎后，加硅藻土研磨，即可將大蜜丸充分分散。再加入甲醇，將樣品全部浸泡，并采用超聲處理，以有效地將這10種成分提取出來。既可避免小活絡丸中煉蜜的溶出，便于點樣，又可大大減少小活絡丸中其他成分對測定的干擾。又因非法添加的化學藥品在薄層板上吸附能力上的不同，再分別以展開劑篩查出中成藥小活絡丸中是否非法添加了 10種分為2組的化學藥品。
[0007]本發(fā)明的快速篩查方法如下
[0008](I)對照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液B。
[0009](2)供試品溶液的制備:取小活絡丸3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0010](3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液Al μ 1，供試品溶液5 μ 1，點于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈(波長254nm)和紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點、熒光斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性。
[0011]另分別吸取對照品溶液BI μ I,供試品溶液5 μ I,點于同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性。
[0012]上述的展開劑I為正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: I (體積比)。
[0013]上述的展開劑II為三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1 (體積比)。
[0014]上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0015]該方法從對照品溶液的制備到對樣品結果進行判定，全過程僅需I小時，而且能在同一塊硅膠GF254薄層板上篩查多個廠家的產(chǎn)品。顯然，本發(fā)明方法操作簡便，快速，成本低，既解決了小活絡丸成藥因成分復雜所導致的假“陽性”干擾的問題，也避免了采用紅外光譜、HPLC-MS、GC-MS測定所產(chǎn)生的昂貴費用和大量時間，因此是有效監(jiān)控中成藥小活絡丸內(nèi)是否非法添加化學藥品成為可能。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]圖1:本發(fā)明的小活絡丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對照品在展開劑I及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液A (斑點a:醋酸潑尼松；斑點b:醋酸地塞米松；斑點c:D引哚美辛；斑點d:萘普生；斑點e:雙氯芬酸鈉)。
[0017]圖2:本發(fā)明的小活絡丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對照品在展開劑I及紫外光燈(波長365nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液A (斑點d:萘普生)。
[0018]圖3:本發(fā)明的小活絡丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對照品在展開劑I及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液A(斑點a:醋酸潑尼松；斑點b:醋酸地塞米松；斑點c 引哚美辛；斑點d:萘普生；斑點e:雙氯芬酸鈉)。
[0019]上述的圖1、圖2、圖3中的小活絡丸陰性樣品的供試品溶液為不含醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。小活絡丸陽性樣品的供試品溶液為含有醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。
[0020]圖4:本發(fā)明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑II及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液B (斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0021]圖5:本發(fā)明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑II及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；
2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液B (斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0022]上述的圖4、圖5中的小活絡丸陰性樣品的供試品溶液為不含潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。小活絡丸陽性樣品的供試品溶液為含有潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。
【具體實施方式】
[0023]下面給出詳細的實施例。
[0024]本發(fā)明采用:儀器與試藥:SartorisBP211D 電子天平；AUT0 SCIENCE AS10200BT型超聲波清洗器；P/G2007型恒溫烘箱；薄層板:硅膠GF254薄層板(德國MERCK批號:HX929689規(guī)格:20X20cm);試劑均為分析純；醋酸潑尼松對照品(批號:100012-200706)、醋酸地塞米松對照品(批號:100122-201206)、吲哚美辛對照品(批號:100258-200904)、萘普生對照品(批號:100198-201205)、雙氯芬酸鈉對照品(批號:100334_200302)、潑尼松龍對照品(批號:100153-201004)、氫化可的松對照品(批號:100152-200206)、潑尼松對照品(批號:100199-201002)、曲安奈德對照品(批號:100055-201103)、醋酸氫化可的松對照品(批號:100013-200607),以上對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供；小活絡丸(標不批號:130110、20130715、130401、120801、20121201、120012、2111105)。
[0025]色譜條件:展開劑1:正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: 1(體積比)；展開劑I1:三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1 (體積比)；展開條件:溫度:230C ;相對濕度:59% ;展距:10cm。
[0026]對照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液B0
[0027]供試品溶液的制備:取小活絡丸成品3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇10ml，進行超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0028]上述的超聲處理條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0029]進行篩查測定:分別吸取對照品溶液Al μ 1，供試品溶液5 μ 1，點于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈(波長254nm)和紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點、熒光斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性。檢出了 5種化學藥品是醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉。對應的色譜圖如圖1、圖2、圖3。
[0030]另分別吸取對照品溶液BI μ I,供試品溶液5 μ I,點于同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性。又檢出了 5種化學藥品是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。對應的色譜圖如圖4、圖5。
[0031]結果表明，2組混合對照品分離效果良好，小活絡丸自身的所有成分對測定無干擾，即供試品在對照品相同比移值處無干擾成分存在。
[0032]綜上，本發(fā)明所建立的薄層色譜法可快速檢測小活絡丸中是否非法添加了醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉、潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松這10種化學藥品，具有操作簡便，快速，低成本的特點，可以作為小活絡丸中成藥質量監(jiān)控的普及方法。
【權利要求】
1.一種快速篩查小活絡丸內(nèi)10種非法添加化學藥品的方法，其特征是首先分別制備各對照品溶液(I)和供試品溶液(2 )，然后進行篩查測定(3 ): (1)對照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液B ; (2)供試品溶液的制備:取小活絡丸一丸，剪碎，加硅藻土，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液； (3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液A，供試品溶液，點樣于同一塊硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸作為展開劑上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈254nm和365nm下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點、熒光斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性，檢出了 5種化學藥品是醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉； 另，分別吸取對照品溶液B，供試品溶液，點樣于同一塊硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液作為展開劑上行展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下觀察薄層色譜，再噴以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現(xiàn)，則可判定樣品結果為陽性，又檢出了 5種化學藥品是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。
2.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述展開劑正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸的體積比為15: 5:1。
3.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液的體積比為18: 6: 2: 0.1。
4.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述硅藻土重量為2g。
5.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述權利要求1中的(2)的甲醇體積為 IOmlo
6.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述各對照品溶液的點樣體積為I μ I。
7.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述供試品溶液的點樣體積為5μ I。
8.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率 50kHz。
【文檔編號】G01N1/28GK103760293SQ201410042299
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月28日 優(yōu)先權日:2014年1月28日
【發(fā)明者】焦琦, 吳愛英, 張春輝 申請人:焦琦