一種從南極磷蝦中提取己烯雌酚的方法及高效薄層層析掃描檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種從南極磷蝦中提取己烯雌酚的方法及高效薄層層析掃描檢測方法，以南極磷蝦為原料，用甲醇提取，過濾后用旋蒸儀蒸干濾液，得到含己烯雌酚的粗提物。南極磷蝦己烯雌酚的檢測采用高效薄層層析掃描法，展開劑為體積比為四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：環己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：3d：2d的混合液，染色劑為10%硫酸乙醇溶液。用CAMAG薄層層析掃描儀-Ⅲ，以400nm吸收波長掃描檢測，通過檢測樣品和標準品的吸光度計算得到己烯雌酚的含量，該方法操作簡單、快速、準確、可靠。
【專利說明】一種從南極磷蝦中提取己烯雌酚的方法及高效薄層層析掃描檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種從南極磷蝦中提取己烯雌酚的方法及高效薄層層析掃描檢測方法。
【背景技術】
[0002]己烯雌酚分子式為C18H2tlO2,分子量為268.35道爾頓，又稱女性素、人造求偶素等，屬于雌激素類物質，與天然雌二醇具有相同藥理與治療作用，可用于治療婦科疾病、促進動物生長等。
[0003]南極磷奸(Euphausia superba),是一種生活在南極洲水域的磷奸，以群集方式生活，有時密度可達每立方米10000-30000只。它們以微小的浮游植物作為食物，身長大約6cm，重約2g，最長壽命可達6年。它們是南極生態系統的關鍵物種，若以生物質能來說，它們可能是地球上最成功的生物物種。因南極磷蝦蘊藏量巨大，加上群體的生活容易捕撈，所以吸引很多國家對它進行開發。目前，南極磷蝦最主要用途是作為魚飼料。而在挪威、加拿大等國則把南極磷蝦蝦油提取出來作為保健品，價格約2000元/kg。由于南極磷蝦含有大量氟(約2400mg kg—1)，不能直接食用。因而，以南極磷蝦為原料，開發天然藥物，對其綜合利用，具有廣闊的應用前景。
[0004]己烯雌酚的檢測主要采用酶聯免疫檢測、熒光免疫分析、放射性受體測定等免疫檢測的方法以及氣相色譜、高效液相色譜、生物分析法進行，但是這些檢測方法有如下的不足之處:檢測過程耗時長、費用高、可能會引起環境污染等。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單、快速、準確、可靠的南極磷蝦己烯雌酚的檢測方法。
[0006]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0007]—種分析己烯雌酚的高效薄層層析掃描檢測方法，步驟如下:
[0008](I)取待檢測的樣品液和1.0mg mL 1的標準液5 μ L點于同一塊GF254高效薄層娃膠板上，以體積比為四氯化碳:乙酸乙酯:丙酮:冰醋酸:甲苯:環己烷=78-80:9-11:9-11:2-4:3d:2d的展開劑,在展開缸內展開,展距為9.5cm,展完后晾干展板；
[0009](2)用10%硫酸乙醇溶液染色，然后置于100°C -110°C條件下烘烤5_10分鐘；
[0010](3)用CAMAG薄層掃描儀-1II掃描,掃描波長400nm,通過檢測樣品和標準品吸光度計算得到己烯雌酚的含量。
[0011]樣品液是通過將己烯雌酚粗提物溶于5mL甲醇中制的。
[0012]己烯雌酚粗提物的提取方法，包括以下步驟:
[0013](I)取干的南極磷蝦(W)和甲醇(V)以1:8-11的比例在35°C、350w、40kHz的條件下超聲提取，過濾提取液；[0014](2)將上述濾液置于旋蒸儀中蒸干，得到己烯雌酚的粗提物。
[0015]在展開缸內展開時，先將展開劑在室溫條件下預平衡35-45分鐘，再放入高效薄層板，繼續在室溫條件下展開，當展距達到4.5cm時，取出薄層板，室溫下晾干10分鐘，再將薄層板放入展開缸中，展開到展距為9.5cm。
[0016]制作標準曲線:
[0017](I)精密稱取1.0OOOmg己烯雌酚標準品(中國食品藥品檢定研究院)溶于1.0mL甲醇，得濃度為1.0mg mL—1的標準液；
[0018](2)取上述配置好的己烯雌酚標準品溶液2 μ L、3 μ L、4 μ L、7 μ L、8 μ L，點樣于同一 GF254高效薄層硅膠板，按己烯雌酚的高效薄層層析掃描檢測方法條件展開，晾干；
[0019](3)用10%硫酸乙醇溶液染色后，用CAMAG薄層掃描儀-1II，400nm吸收波長掃描，經薄層掃描儀軟件wincatsl.4.1統計得到回歸方程Y=_285.7233+643.4958Χ，相關性系數r=0.99946，RSD=2.57%。
[0020]本發明檢測己烯雌酚的高效薄層掃描檢測方法，其精密度、重復性、穩定性、回收率情況以及展開劑配方確定、染色時間及染色溫度的確定、檢測波長的確定如下:
[0021]1.精密度測定
[0022]精密吸取樣品液，在 同一塊高效薄層硅膠板上水平點樣5 μ 1，展開，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以400nm吸收波長掃描得峰面積分別為3234.1,3301.3,3256.4,3199.2,3260.1，RSD=L 15%。
[0023]2.重復性測定
[0024]精密吸取樣品液，在五塊高效薄層硅膠板上分別點樣5 μ 1，展開，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以400nm吸收波長掃描的峰面積分別為3234.1,3310.2,3320.3,3299.3,3298.5，RSD=L 03%。
[0025]3.穩定性測定
[0026]吸取樣品液5 μ L于高效薄層板上點樣，展開，晾干，10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以400nm吸收波長掃描，以后每隔10分鐘掃描一次，記錄每次的峰面積，計算相應RSD值，多次試驗證明，染色后20-60分鐘內比較穩定，平均RSD=L 64%。具體數據如表1所示:
[0027]表1
[0028]
【權利要求】
1.一種己烯雌酚的高效薄層層析掃描檢測方法，其特征在于，步驟如下: (O取待檢測的樣品液和1.0mg mL—1的標準液5 μ L點于同一塊GF254高效薄層娃膠板上，以體積比為四氯化碳:乙酸乙酯:丙酮:冰醋酸:甲苯:環己烷=78-80:9-11:9-11:2~4:3d:2d的混合液為展開劑,在展開缸內展開,展距為9.5cm,展完后晾干展板； (2)用10%硫酸乙醇溶液染色，然后置于100°C-110°C條件下下烘烤5-10分鐘； (3)用CAMAG薄層掃描儀-1II掃描，掃描波長400nm，通過檢測樣品和標準品的吸光度計算得到己烯雌酚的含量。
2.如權利要求1所述的己烯雌酚的高效薄層層析掃描檢測方法，其特征在于，所述樣品液是通過將己烯雌酚粗提物溶于5mL甲醇中制得。
3.如權利要求1所述的己烯雌酚的高效薄層層析掃描檢測方法，其特征在于，所述步驟I)中在展開缸內展開時，先將展開劑在室溫條件下預平衡35-45分鐘，再放入高效薄層板，繼續在室溫條件下展開，當展距達到4.5cm時，取出薄層板，室溫下晾干10分鐘，再將薄層板放入展開缸中，展開到展距為9.5cm。
4.一種從南極磷蝦中提取己烯雌酚的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取干的南極磷奸(w)和甲醇(V)以I:8-11的比例在35°C、350w、40kHz的條件下超聲提取，過濾提取液； (2)將上述濾液置于旋蒸儀中蒸干，得到己烯雌酚的粗提物。
【文檔編號】G01N30/90GK103808856SQ201410034888
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年1月24日 優先權日:2014年1月24日
【發明者】馬善利, 劉代成 申請人:山東師范大學