一種腫瘤細胞藥敏動態測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種腫瘤細胞藥敏動態測定方法，屬于檢測【技術領域】，其關鍵在于包括以下步驟：取對數生長期的細胞以1×105個/孔接種到96孔板，加入抗腫瘤藥物后培養48h，再加入終濃度為75--g/mL刃天青溶液持續培養72h后，經酶標儀動態測定熒光強度值計算比較，求得藥敏數值，判斷最適濃度和最佳時間。本發明簡單、快捷、靈敏度高、特異性好，并能同時測定抗腫瘤藥物作用的最適濃度和最佳時間，為臨床科學合理地用藥提供指導，為抗腫瘤藥物的篩選研發提供有效途徑。
【專利說明】一種腫瘤細胞藥敏動態測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及抗腫瘤藥物敏感性檢測【技術領域】，尤其是一種腫瘤細胞藥敏動態測定 方法。
【背景技術】
[0002] 癌癥嚴重威脅著人類的健康和生命，每年約新增800萬癌癥患者，600多萬人死于 癌癥，幾乎每6秒鐘就有一名癌癥患者死亡。在惡性腫瘤的療法中，藥物治療占有重要地 位。由于現有的化療藥物副作用大，易產生耐藥現象，因此，尋找更為有效、低毒的抗腫瘤藥 物仍是當前及今后一段時期內腫瘤治療的熱點。
[0003] 隨著抗腫瘤藥物體外敏感性試驗深入的研究，目前已發展了不少新的測試方法， 如MTT法、[3H] TdR法、51Cr釋放法、LDH法、XTT法、MTS法、CCK-8試劑盒等，但這些方法在 評價抗腫瘤藥物作用細胞的最佳作用時間時方面受到限制，如：[3H] TdR法、51Cr釋放法具 有放射性，操作繁瑣。后三種方法是類似MTT法原理的一種終點檢測法，只適于檢測藥物的 終點作用效果，而不能動態測試抗腫瘤藥物的作用最適濃度和最佳時間。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種腫瘤細胞藥敏動態測定方法，它能同時快 速、靈敏的測試抗腫瘤藥物作用最適濃度和最佳時間，以克服現有技術的不足。
[0005] 本發明是這樣實現的：腫瘤細胞藥敏動態測定方法，包括以下步驟：（1)取對數生 長期的腫瘤細胞計數，并制備細胞懸液，接種至細胞培養板；（2)向細胞培養板的對應孔中 加入抗腫瘤藥物，每種抗腫瘤藥物設置四個濃度梯度，五個重復；（3)將細胞培養板置于C0 2 培養箱中培養48h后，每孔加入刃天青溶液，繼續培養，并在培養過程的不同時間段內測量 熒光強度值；（4)將測量的熒光強度值帶入公式（1)計算藥物對細胞增殖抑制率；計算比 較，求得藥敏數值，判斷最適濃度和最佳時間；
【權利要求】
1. 一種腫瘤細胞藥敏動態測定方法，其特征在于：包括以下步驟：（1)取對數生長期的 腫瘤細胞計數，并制備細胞懸液，接種至細胞培養板；（2)向細胞培養板的對應孔中加入抗 腫瘤藥物，每種抗腫瘤藥物設置四個濃度梯度，五個重復；（3)將細胞培養板置于C0 2培養 箱中培養48h后，每孔加入刃天青溶液，繼續培養，并在培養過程的不同時間段內測量熒光 強度值；（4)將測量的熒光強度值帶入公式（1)計算藥物對細胞增殖抑制率；
公式（1)中，FLU表示熒光強度值。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，細胞接種量為1 X 105個/孔。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3)中，加入的刃天青溶液的濃度為 75--g/mL ;加入刃天青溶液后的反應作用時間為72h。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述細胞培養板為96孔板。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（4)中，熒光強度值測定激發波長為 571. 02nm，發射波長為 583. 97nm。
6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述腫瘤細胞為人慢性髓系白血病細胞 K562。
【文檔編號】G01N21/76GK104122254SQ201410031797
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年1月23日 優先權日:2014年1月23日
【發明者】周英, 俸婷婷, 李宙陽, 甄茹, 劉雄利, 王慧娟 申請人:貴州大學