一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法
【專利摘要】本發明的目的在于提供一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法。該測定方法采用二甲亞砜溶解，高效液相色譜法測定雙氫青蒿素的含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中呈單一異構體，當溶液進入流動相時異構體開始轉化平衡，其色譜峰呈雙峰，因出峰時間（異構體轉化平衡時間）精確可控，雙峰峰面積之和穩定、重現性好，滿足測定精密度要求。本發明所述測定方法避免了雙氫青蒿素在其他溶劑中異構體轉化、雙峰峰面積之和不穩定不可控，從而導致的含量測定精密度較低的缺點，提高了雙氫青蒿素含量測定結果的準確性和可靠性，為雙氫青蒿素建立穩定、可靠、全面的質量控制方法提供科學依據。
【專利說明】一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物分析領域；更具體地，本發明涉及一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法。
【背景技術】
[0002]雙氫青蒿素作為青蒿素主要衍生物之一，由青蒿素經四氫硼鈉還原而成，是青蒿素類藥物在體內主要的活性形式之一，具有更好的水溶性、吸收快、排泄和代謝迅速、高效、低毒等優點。雙氫青蒿素在控制瘧疾癥狀、救治腦型瘧與抗氯喹原蟲耐藥株惡性瘧等方面具有較大的優勢。雙氫青蒿素含量測定常用方法為紫外分光光度法和高效液相色譜法，后者也是《中國藥典》收錄的含量測定方法。
[0003]紫外分光光度法測定含量的原理為:采用加入乙醇溶解后靜置，加入2%Na0H溶液，放入60°C水浴中恒溫反應0.5h，在238nm波長處測定吸光度計算含量。但是，雙氫青蒿素在乙醇溶液中是以a和0體平衡狀態存在，其平衡穩定時間、2%Na0H溶液加入量及在60°C水浴中恒溫反應時間、其他雜質在238nm波長處有吸收均會導致測定結果不準確。
[0004]現行法定標準(《中國藥典》2010年版二部)采用“乙腈-水(6: 4)做溶劑，高效液相色譜法測定雙氫青蒿素含量，雙氫青蒿素存在異構體(a-雙氫青蒿素與(6-雙氫青蒿素)轉化現象，雙氫青蒿素呈雙峰，雙峰間存在轉化和平衡的現象，峰面積之和不穩定(峰面積RSD為3.26%)，導致含量測定結果不夠準確可靠。
[0005]紫外分光光度法及現行高效液相色譜法中，雙氫青蒿素均存在異構體(a-雙氫青蒿素與P -雙氫青蒿素)轉化現象，雙氫青蒿素兩主峰面積或吸光度的比例會發生改變，且峰面積或吸光度之和不恒定，常溫下需2小時以上才能平衡；而若采用“置水浴中保溫”方法，可能產生其他降解雜質。
[0006]目前還沒有一種高效液相色譜準確測定雙氫青蒿素含量的方法。
【發明內容】
[0007]針對上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法。本方法采用二甲亞砜溶解，高效液相色譜法測定雙氫青蒿素的含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中呈單一異構體，當溶液進入流動相時異構體開始轉化平衡，其色譜峰呈雙峰，因出峰時間(異構體轉化平衡時間)精確可控，雙峰峰面積之和穩定、重現性好，保證了雙氫青蒿素含量測定結果的準確性。
[0008]為實現上述目的，本發明采取如下措施:
[0009]本發明所述雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法，包括如下步驟:
[0010](I)色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相，流速為0.6ml/min ;檢測波長為216nm ；
[0011](2)對照品溶液的制備:取雙氫青蒿素對照品適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3~5mg的溶液，作為對照品溶液；[0012](3)供試品溶液的制備:取雙氫青蒿素原料藥試樣適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為供試品溶液；
[0013](4)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?10iU，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定供試品溶液和對照品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積；根據對照品溶液雙氫青蒿素濃度及其色譜峰面積和供試品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積及試樣重量，用外標法計算試樣中雙氫青蒿素的含量，即得。
[0014]在上述雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法中，所述步驟(I)流動相中乙腈和水的體積之比為60: 40。
[0015]本發明的有益效果在于:本發明所述測定方法以二甲亞砜做溶劑檢驗雙氫青蒿素含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中為單一異構體，當溶液進入流動相時才開始異構體轉化平衡，由高效液相色譜儀控制的出峰時間(異構體轉化平衡時間)精確可控，測得的雙峰峰面積之和穩定、重現性好，可準確測定含量。避免了雙氫青蒿素用其他溶劑配成溶液后即開始發生異構體轉化、雙峰峰面積之和不穩定，從而導致的含量測定精密度低、結果不準確的缺點。本發明所述測定方法提高了雙氫青蒿素含量測定結果的準確性和可靠性，為雙氫青蒿素建立穩定、可靠、全面的質量控制方法提供科學依據。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]圖1是實施例1中乙腈-水作溶劑時于Omin進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0017]圖2是實施例1中乙腈-水作溶劑時于IOmin進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0018]圖3是實施例1中乙腈-水作溶劑時于20min進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0019]圖4是實施例2中二甲亞砜作溶劑時于Omin進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0020]圖5是實施例2中二甲亞砜作溶劑時于IOmin進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0021]圖6是實施例2中二甲亞砜作溶劑時于20min進樣雙氫青蒿素含量測定的高效液相色譜圖。
[0022]圖7是實施例6中二甲亞砜作溶劑時雙氫青蒿素對照品I含量測定的高效液相色譜圖。
[0023]圖8是實施例6中二甲亞砜作溶劑時雙氫青蒿素對照品2含量測定的高效液相色譜圖。
[0024]圖9是實施例6中二甲亞砜作溶劑時雙氫青蒿素供試品I含量測定的高效液相色譜圖。
[0025]圖10是實施例6中二甲亞砜作溶劑時雙氫青蒿素供試品2含量測定的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】[0026]下面結合【具體實施方式】對本發明的
【發明內容】
作進一步的詳細描述。應理解，本發明的實施例只用于說明本發明而非限制本發明，在不脫離本發明技術思想的情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段，做出的各種替換和變更，均應包括在本發明的范圍內。
[0027]實施例1
[0028]精密稱取雙氫青蒿素對照品25.22mg，置25ml量瓶中，加乙腈-水(60: 40)適量，超聲處理使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為測試溶液；精密量取20iU注入液相色譜儀，記錄色譜圖。用十八烷基硅烷鍵合硅膠(CAPCELL PAK C18MG II, IOOmmX 4.6mm, 3 u m)為填充劑；以乙腈-水(60: 40)為流動相；檢測波長為216nm ;流速為0.6ml/min。分別于0min、10min、20min進樣對雙氫青蒿素的色譜峰面積進行測定,高效液相色譜圖如圖1~3所示。雙氫青蒿素的色譜峰均呈雙峰。根據圖1~3計算色譜峰面積之和的RSD%以及色譜峰面積之比的RSD%，結果如表1所示。可知色譜峰面積之和的RSD%為3.26%,色譜峰面積之比的RSD%S 75.6%。表明以乙腈-水作溶劑時，雙氫青蒿素存在異構體(a -雙氫青蒿素與3 -雙氫青蒿素)轉化現象，雙峰間存在轉化和平衡的現象，峰面積之和不穩定，二峰面積之比亦不穩定，導致含量測定結果不夠準確可靠。
[0029]表1實施例1RSD%的計算結果
[0030]
【權利要求】
1.一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測定方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相，流速為0.6ml/min ;檢測波長為216nm ； (2)對照品溶液的制備:取雙氫青蒿素對照品適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為對照品溶液； (3)供試品溶液的制備:取雙氫青蒿素原料藥試樣適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為供試品溶液； (4)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?10iil，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定供試品溶液和對照品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積；根據對照品溶液雙氫青蒿素濃度及其色譜峰面積和供試品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積及試樣重量，用外標法計算試樣中雙氫青蒿素的含量，即得。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(I)流動相中乙腈和水的體積之比為60: 40。
【文檔編號】G01N30/02GK103760265SQ201410019299
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月15日 優先權日:2014年1月15日
【發明者】王白露, 曾令高, 梁靜, 張偉 申請人:重慶市食品藥品檢驗所