Cd30+癌癥的檢測和治療的制作方法
【專利摘要】本發明提供了診斷、預測、預防和治療CD30+癌癥的方法。
【專利說明】CD30+癌癥的檢測和治療
【背景技術】
[0001] CD30 為 120 千道爾頓（KD)的跨膜糖蛋白（可SM:Froeseetal.，1987，J. Immunol. 139:2081-87)，是腫瘤壞死因子受體（TNFR)超家族的成員。⑶30是霍奇金淋巴瘤 (HL)和間變性大細胞淋巴瘤（ALCL)內的惡性細胞成熟的標志。CD30最初是使用單克隆抗 體Ki_l在培養的H-R(Hodgkin's-Reed Steinberg)細胞中被鑒定的。
[0002] ⑶30在人體正常組織中表達有限。這使得⑶30成為有吸引力的癌癥治療目標。 但是，僅在少數癌癥中確定⑶30表達。此外，對于一些癌癥，⑶30表達的報告伴隨著具有非 CD30相關的交叉反應性的抗體，例如，Novocastra(-家英國公司）的NCL-L-CD30抗體，并 且是不可靠的。確定表達CD30的癌癥和能夠利用針對CD30的制劑進行治療的癌癥將是有 益的。本發明解決了這個需求和其他需求。
【發明內容】
[0003] 本發明尤其提供了卵巢癌（例如卵巢漿液性癌）、皮膚癌（例如黑色素瘤和皮膚鱗 狀細胞癌）、乳癌（例如三陰性乳腺癌）、甲狀腺癌（例如甲狀腺未分化癌）、胰腺癌（例如 未分化胰癌）、肺癌（例如小細胞和鱗狀上皮細胞肺癌）、肛門癌（例如肛門鱗狀細胞癌）、 胸腺癌、子宮內膜癌和原發不明癌的診斷、預后、預防、治療以及監測治療的方法。本發明還 提供了泌尿生殖鱗狀細胞癌、婦科癌肉瘤、尿道鱗狀細胞癌、子宮癌肉瘤、間質細胞瘤、支持 細胞瘤和胰腺癌的診斷、預后、預防、治療以及監測治療的方法。
[0004] 一方面，本發明提供了一種在患者的樣品中檢測⑶30表達的方法。該樣品可以來 自，例如，卵巢、皮膚、子宮內膜、肺、乳腺、甲狀腺、胰腺、肛門、胸腺或其他腫瘤部位（例如， 患者的婦科癌癥腫瘤部位或泌尿生殖道癌腫瘤部位）。在一些實施方案中，所述樣品是組織 樣品。一方面，所述組織被固定。一方面，所述固定的組織樣品與特異性結合CD30的抗體 接觸，并且該抗體與固定的組織樣品的結合被檢測，以確定CD30是否在樣本中被表達。固 定的組織樣品中⑶30的表達表明該患者具有表達0)30的癌癥（O)30expressing cancer)。 在一些實施方案中，所述樣品用福爾馬林固定并且用石蠟包埋。
[0005] 另一方面，本發明提供了一種對癌癥患者進行診斷、預后、確定治療方案或監測治 療的方法。一方面，患者具有原發性或轉移性卵巢癌（例如，原發性或轉移性卵巢漿液性 癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性皮膚癌（例如原發或轉移性黑色素瘤和/或皮膚 鱗狀細胞癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性乳腺癌（例如原發性或轉移性三陰性乳 腺癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性甲狀腺癌（例如原發性或轉移性甲狀腺未分化 癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性胰腺癌（例如原發性或轉移性的未分化胰癌或 腺癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性肺癌（例如原發性或轉移性小細胞或鱗狀細 胞肺癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性肛門癌（例如原發性或轉移性肛管鱗狀細 胞癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性胸腺腫瘤（例如原發性或轉移性胸腺癌）。另 一方面，患者具有原發性或轉移性子宮內膜癌。另一方面，患者具有未知原發性癌。另一方 面，患者具有原發性或轉移性尿道癌（例如尿道鱗狀細胞癌）。另一方面，患者具有原發性 或轉移性子宮癌肉瘤。所述方法包括在取自患者的腫瘤樣品細胞中檢測CD30的表達，其中 可檢測的CD30表達的存在被用于患者的診斷、預后、確定治療方案或監測治療。樣品可以 是福爾馬林固定并且石蠟包埋的樣品。如果測定步驟表明有可檢測水平的CD30,所述方法 還進一步包括給患者施用有效劑量方案的針對⑶30的制劑（例如，抗-⑶30抗體或抗⑶30 抗體藥物綴合物）。在一些方面，⑶30表達以一定水平存在將被作為一個臨界值，以確定患 者是否有可能受益于針對CD30的制劑。例如，一方面，10%的臨界值被將患者歸類到有可 能從針對⑶30的制劑中獲益的一員。因此，在這種實施方案中，如果取自患者的腫瘤樣品 具有至少10%的⑶30陽性的腫瘤細胞（例如，樣品中惡性和/或異型細胞的至少10%是 CD30陽性）時，患者被歸類為可能受益于針對CD30的制劑治療的病人。在一些實施方案 中，取自患者的腫瘤樣品將具有至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 60%、70%、75%、80%或85%的^30陽性的腫瘤細胞（8卩，樣品中惡性和/或異型細胞的 至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80%或85%是 CD30陽性）。在優選的實施方案中，當使用特異性結合于CD30的胞外結構域的抗體（例如 BerH2 抗體）作為檢測抗體時，至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 60 %、70 %、75 %、80 %或85 %的樣品中的腫瘤細胞表達⑶30。
[0006] 另一方面，本發明提供了一種識別能夠響應針對CD30的制劑治療的患者的方法； 提供了一種識別可能從針對CD30的制劑治療中受益的患者的方法；和/或提供了一種預測 患者對針對CD30的制劑的反應性的方法，其中，所述患者具有卵巢癌、皮膚癌、乳腺癌、甲 狀腺癌、胰腺癌、肺癌、肛門癌、胸腺癌、子宮內膜癌或未知原發性癌癥。所述癌癥可以是原 發性癌癥或轉移性癌癥。所有的這些方法包括：在取自患者的腫瘤樣品細胞中測定CD30表 達，其中可檢測的⑶30表達的存在被用于確定病人可能響應針對⑶30的制劑。在一些方面 中，具有較高CD30表達水平的患者被確定為具有更大可能性響應針對CD30的制劑的患者。 例如，如果取自患者的腫瘤樣品具有至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、 50%、60%、70%、75%、80%或85%的0)30+陽性的腫瘤細胞（8卩，樣品中惡性和/或異型 細胞的至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80% 或 85%是CD30陽性）時，表明患者有更大的可能性響應針對CD30的制劑。在優選的實施方 案中，當使用BerH2抗體或另一種特異性結合于CD30胞外結構域的抗體作為檢測抗體時， 樣品中至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80% 或 85%的腫瘤細胞表達⑶30。一方面，本發明提供了一種檢測患者組織樣品中⑶30表達的方 法。根據癌癥的類型，組織樣品可以來自，例如，病人的卵巢、皮膚、肺、乳腺、甲狀腺、胰腺、 子宮內膜、肛門、胸腺或其他腫瘤部位。在一些實施方案中，組織被固定。被固定的組織樣 品與特異性結合CD30的抗體接觸，檢測抗體與固定的組織樣品的結合，以確定樣品中CD30 是否被表達。固定的組織樣品內⑶30的表達表明該患者有表達⑶30的癌癥。在一些實施 方案中，所述樣品是用福爾馬林固定并且用石蠟包埋的。
[0007] 另一方面，本發明提供了一種識別適合針對⑶30的制劑的患者的方法。所述方法 包括：在取自患者的腫瘤樣品中測定⑶30的表達水平。一方面，腫瘤樣品中⑶30的存在足 以表明該患者適合針對CD30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少10%表達 ⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少15% 表達CD30時，表明患者適合針對CD30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少 20%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的 至少25%表達⑶30時，表明患者適合適合針對⑶30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異 型細胞的至少30 %表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一方面，當樣品中惡性 或異型細胞的至少35%表達CD30時，表明患者適合針對CD30的制劑。另一方面，當樣品中 惡性或異型細胞的至少45%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一方面，當樣 品中惡性或異型細胞的至少40%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一方面， 當樣品中惡性或異型細胞的至少50%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。另一 方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少60%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制劑。 另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少70%表達⑶30時，表明患者適合針對⑶30的制 齊U。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少75%表達CD30時，表明患者適合針對CD30 的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少80%表達CD30時，表明患者適合針對 ⑶30的制劑。另一方面，當樣品中惡性或異型細胞的至少85%表達⑶30時，表明患者適合 針對CD30的制劑。患者可以具有原發性或轉移性的卵巢癌、皮膚癌、乳腺癌、甲狀腺癌、胰 腺癌、肺癌、肛門癌、胸腺癌、子宮內膜癌以及未知原發性癌中的任意一種。在一些方面，患 者可具有原發性或轉移性泌尿生殖鱗狀細胞癌或婦科癌肉瘤中的任意一種。一方面，患者 具有尿道鱗狀細胞癌、子宮癌肉瘤、支持細胞瘤、間質細胞瘤或胰腺癌。例如，一方面，患者 具有卵巢原發或轉移性卵巢癌（例如，原發性或轉移性卵巢漿液性癌）。另一方面，患者具 有原發性或轉移性皮膚癌（例如，原發或轉移性黑色素瘤和皮膚鱗狀細胞癌）。另一方面， 患者具有原發性或轉移性乳腺癌（例如，原發性或轉移性三陰性乳腺癌）。另一方面，患者 具有原發性或轉移性甲狀腺癌（例如，原發性或轉移性甲狀腺未分化癌）。另一方面，患者 具有原發性或轉移性胰腺癌（例如，原發性或轉移性的未分化胰癌或腺癌）。另一方面，患 者具有原發性或轉移性肺癌（例如，原發性或轉移性小細胞肺癌或原發性或轉移性鱗狀細 胞癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性肛門癌（例如，原發性或轉移性肛管鱗狀細胞 癌）。另一方面，患者具有原發性或轉移性胸腺腫瘤（例如，原發性或轉移性胸腺癌）。另 一方面，患者具有原發性或轉移性子宮內膜癌。另一方面，患者具有未知原發性的癌。該方 法可能進一步包括使用針對CD30的制劑治療患者的步驟。
[0008] 另一方面，本發明提供了一種治療CD30陽性癌癥的方法。該方法包括給具有癌癥 和具有可檢測的⑶30表達的患者施用針對⑶30的制劑的有效治療方案。在某些實施方案 中，針對CD30的制劑是一種抗體或抗體藥物綴合物。該抗體可具有效應子功能。患者可能 先前已經接受手術、放療和/或使用不針對CD30且不能誘發癌癥緩解的藥劑的化療治療。 患者可能先前已經接受手術、放療和/或化療的治療，但此后復發。患者可能已被重新診斷 為癌癥。在一些實施方案中，所述抗體是嵌合、人源化或人類抗體。一方面，患者具有卵巢 原發或轉移性卵巢癌（例如，原發性或轉移性卵巢漿液性癌）。另一方面，患者具有原發性 或轉移性皮膚癌（例如，原發或轉移性黑色素瘤或皮膚鱗狀細胞癌）。另一方面，患者具有 原發性或轉移性乳腺癌（例如，原發性或轉移性三陰性乳腺癌）。另一方面，患者具有原發 性或轉移性甲狀腺癌（例如，原發性或轉移性甲狀腺未分化癌）。另一方面，患者具有原發 性或轉移性胰腺癌（例如，原發性或轉移性的未分化胰癌或腺癌）。另一方面，患者具有原 發性或轉移性肺癌（例如，原發性或轉移性小細胞或鱗狀細胞肺癌）。另一方面，患者具有 原發性或轉移性肛門癌（例如，原發性或轉移性肛管鱗狀細胞癌）。另一方面，患者具有原 發性或轉移性胸腺腫瘤（例如，原發性或轉移性胸腺癌）。另一方面，患者具有原發性或轉 移性子宮內膜癌。另一方面，患者具有未知原發性的癌。
[0009] 在一些優選的實施方案中，測定表達水平的分析在組織切片中進行，表達水平是 組織切片中CD30陽性的惡性和/或異型細胞的比例。
[0010] 通過參考以下示例性實施方案的詳細描述，結合附圖和表格將更好地理解本發明 的各方面。
[0011] 定義
[0012] 除非另有指明，本文中使用的下述術語和短語旨在具有下述含義。
[0013] 術語"抗體"指：(a)免疫球蛋白多肽和免疫球蛋白多肽的免疫活性部分，例如，免 疫球蛋白家族的多肽或其含有與特異性抗原（例如，CD30)免疫特異性結合的抗原結合位 點的片段；或（b)此類免疫球蛋白多肽或片段的保守取代衍生物，其能與抗原（例如，CD30) 免疫特異性結合。例如，Harlow&Lane, Antibodies :A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988)對抗體進行了一般性描述。除非上下文另有明顯指示，抗 體還包括抗體衍生物或藥物綴合物，將在下文中對其進行更詳細地描述。
[0014] "抗體衍生物"表示通過異源分子共價連接（例如，通過異源多肽連接）修飾的或 通過正常情況下不與抗體相關的糖基化、去糖基化、乙酞化或磷酸化等修飾的如上文定義 的抗體。
[0015] 術語"單克隆抗體"指源于單個細胞克隆（包括任何真核或原核細胞克隆或噬菌 體克隆）并且并非其生產方法的抗體。因此，術語"單克隆抗體"不限于通過雜交瘤技術生 產的抗體。
[0016] "抗原"是與抗體特異性結合的實體。
[0017] 術語"抑制"或"對……的抑制"表示降低了可測量的量，或者完全阻止測量。
[0018] 術語"試劑"表示元素、化合物或分子實體，包括，例如，藥物性、治療性或藥理性化 合物。試劑可以是天然的或合成的或其組合。"治療劑"是單獨或與另外的試劑組合（例 如，前藥轉化酶與前藥組合）對癌細胞發揮治療性（例如，有益的）效果的試劑。典型地， 可用于本文所述的方法和組合物的治療劑是具有細胞毒性效果的那些治療劑。
[0019] "細胞毒性劑"指對細胞具有細胞毒性效果，從而分別減少（cbpleting)或抑制細 胞群體中細胞生長的試劑。
[0020] 在⑶30抗體對表達⑶30的細胞的作用的上下文中，術語"減少（cbplete) "表示 表達⑶30的細胞的數目減少或消失。
[0021] 術語"治療"表示：通過在表達CD30的癌癥的臨床或診斷癥狀發作之后的任何臨 床階段向受試者施用針對CD30的制劑（例如，抗CD30的抗體或抗體藥物綴合物）來減慢、 停止或逆轉患者中表達CD30的癌癥的進程，如通過疾病的臨床或診斷癥狀的減少或消失 來證實。治療可能包括，例如，降低癥狀的嚴重性、癥狀的數目或復發頻率。
[0022] 術語"三陰性乳腺癌"是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體 2 (HER2/neu)的臨床檢測均為陰性的乳腺癌。
[0023] 術語"可藥用的"表示聯邦或州政府管理機構許可的或美國藥典或其它公認藥典 中列出的用于動物的（更特別地，用于人類的）。術語"藥物相容成分"表示與CD30抗體一 起施用的可藥用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。
[0024] 在施用藥物試劑的上下文中，術語"有效量"表示足以在患者中抑制表達⑶30的 癌癥的一種或多種臨床或診斷癥狀出現或減輕所述癥狀的試劑的量。根據本文所述的方 法，在"有效劑量方案"中施用試劑的有效量。術語"有效劑量方案"是足以實現對表達CD30 的癌癥的治療的試劑的量和給藥頻率的組合。
[0025] 術語"患者"包括接受診斷、預防或治療性治療的人和其它哺乳動物受試者。
[0026] 治療劑典型地可基本不含不想要的污染物。這意味著試劑典型地至少為大約50w/ w(重量/重量）的純度，以及基本上不含干擾性蛋白質和污染物。有時，試劑至少為大約 80% w/w的純度，更優選為至少90或大約95% w/w的純度。但是，使用常規的蛋白純化技 術，可獲得至少99% w/w的純度的同質肽。
【具體實施方式】
[0027] I. 一般件
[0028] 本發明尤其提供了卵巢癌（例如卵巢漿液性癌）、皮膚癌（例如黑色素瘤和皮膚鱗 狀細胞癌）、乳癌（例如三陰性乳腺癌）、甲狀腺癌（例如甲狀腺未分化癌）、胰腺癌（例如 未分化胰癌）、肺癌（例如小細胞和鱗狀上皮細胞肺癌）、肛門癌（例如肛門鱗狀細胞癌）、 胸腺癌、子宮內膜癌和原發不明癌的診斷、預后、預防、治療以及監測治療的方法。本發明尤 其提供了泌尿生殖鱗狀細胞癌、婦科癌肉瘤、尿道鱗狀細胞癌、子宮癌肉瘤、支持細胞瘤、間 質細胞瘤和胰腺癌的診斷、預后、預防、治療以及監測治療的方法。在一些方面，CD30的抗體 被用于診斷、預后、預防、治療以及監測治療的方法。這些方法部分基于實施例中所呈現的 結果的前提下，即CD30在某些癌癥中表達。在來自癌組織的福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE) 的樣品中，利用結合CD30的抗體檢測這種表達。
[0029] II.針對⑶30的抗體
[0030] 針對CD30的抗體可用于癌癥（例如，卵巢癌、皮膚癌、乳腺癌、甲狀腺癌、胰臟癌、 肺癌、肛門癌、胸腺癌、子宮內膜癌、原發不明癌）中CD30的檢測以及癌癥的治療。取決于 抗體的性質，某些抗體優選用于檢測，而其他抗體優選用于治療。
[0031] A.針對⑶30的抗體的一般性描述
[0032] 抗CD30的抗體包括單克隆、嵌合（具有人恒定區和小鼠可變區）、人源化、鑲飾 (veneered)或人抗體；單鏈抗體等等。免疫球蛋白分子可以是任何類型或類別（例如，IgG、 IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)的或亞類（例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)的。
[0033] 抗CD30的抗體可以是結合抗原的抗體片段，例如，Fab、F(ab'）、F(ab'）2、Fd鏈，單 鏈Fv (scFv)，單鏈抗體，二硫鍵連接的Fv (sdFv)，包含或VH結構域的片段，包括納米抗體 或來自駱駝、美洲駝（llamas)等的片段，或Fab表達文庫產生的片段，或上文所述的任何抗 體的CD30結合片段。結合抗原的抗體片段（包括單鏈抗體）可包含單獨的可變區或與下 述全部或部分組合的可變區：鉸鏈區、CH1，CH2，CH3和CL結構域。此外，結合抗原的片段還 可包含可變區與鉸鏈區、CH1，CH2, CH3和CL結構域的任何組合。
[0034] 抗體可以是單特異性、雙特異性、三特異性或更多特異性的。多特異性抗體 可以是對CD30不同的表位特異的，或者可以對CD30以及異源蛋白兩者均特異（可參 考，例如，W093/17715 ;W0 92/08802 ;W0 91/00360 ;W092/05793 ;Tutt et al.，1991，J. Immunol.l47:60-69;美國專利號 4,474,893;4,714,681;4,925,648;5,573,920 和 5,601，819;Kostelny et al·，1992, J. Immunol. 148:1547-1553)。可用于實施本文所述的 方法的多特異性抗體（包括雙特異性和三特異性抗體）是與CD30以及第二細胞表面受體 或受體復合物（例如，免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整聯蛋白、細胞因 子受體、趨化因子受體、主要組織相容性蛋白、凝集素（C型、S型或I型）或補體控制蛋白） 二者均免疫特異性結合的抗體。
[0035] 還可按照它們與 CD30 的結合親和力（10_7M, 5x10_8M, 10_8M, 5x10_9M, 10_9M, 5xlO_1QM, KT1CIM，5xl(TnM，l(TnM，5x1(T12M，KT 12M, 5x1(T13M，KT13M, 5x1(T14M，Hr1%, 5x1(T15M 或 1(T15M)來 描述抗⑶30抗體。
[0036] 抗CD30抗體可以是嵌合抗體。嵌合抗體是這樣一種分子，該抗體中的 不同部分源于不同的動物物種，例如，具有源于鼠單克隆抗體的可變區和人免疫 球蛋白恒定區的抗體。用于產生嵌合抗體的方法是本領域己知的（參考，例如， Morrison, Science, 1985, 229:1202 ；0i et al. , 1986, BioTechniques4:214 ；Gillies et al. , 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202 ;美國專利號 5, 807, 715 ;4, 816, 567 和 4, 816, 397)。
[0037] 抗⑶30抗體還可以是人源化抗體，包括鑲飾抗體。人源化抗體是這樣的一種抗 體分子，其結合所期望的抗原，并且具有來自非人物種的一個或多個互補決定區（CDRs)和 來自人免疫球蛋白分子的構架和恒定區。通常，人構架區中的構架殘基將被來自CDR供體 抗體的相應殘基取代，以改變，或優選以改善抗原結合。通過本領域公知的方法來鑒定這些 構架取代，例如，通過構建CDR和構架殘基的相互作用模型來鑒定對于抗原結合來說重要 的構架殘基，以及通過序列比較以鑒定出具體位置上的不尋常的構架殘基（可參考，例如 Queen etal·，美國專利號 5, 585, 089 ;Riecbmann et al·，1988, Nature 332:323)。可使用 本領域己知的多種技術來對抗體進行人源化，例如CDR移植（EP 0239400 ;W091/09967 ;美 國專利號55, 225, 539 ;5, 530, 101和5, 585, 089)，鑲飾或重塑表面（可參考EP 0592106; EP 0519596 ;Padlan，Molecular Immunology, 1991，28 (4/5):489-498 ;Studnicka et al., 1994,Protein Engineering 7 (6):805-814 ；Roguska et al., 1994,PNAS 91:969-973)，以及鏈改組（chain shuffling)(美國專利號5, 565, 332)(所有這些參考文 獻都通過引用并入本文）。
[0038] 抗⑶30抗體還可以是人抗體。可通過本領域己知的多種方法來制造人抗體， 例如噬菌體展示方法（見上文），其使用源于人免疫球蛋白序列的抗體文庫。還可參考， 例如，美國專利號 4, 444, 887 和 4, 716, 111 ;W0 98/46645, W0 98/50433, W0 98/24893， TO 98/16654, W0 96/34096, W0 96/33735 和 W0 91/10741。此外，可使用被稱為"引導選 擇（guided selection) "的技術來產生識別選擇的表位的人抗體，其中，使用選擇的非人 單克隆抗體，例如，小鼠抗體，來引導識別相同表位的完全人抗體的選擇（可參考，例如， Jespers et al·，1994, Biotechnology 12:899-903)。還可使用表達人免疫球蛋白基因的 轉基因小鼠來產生人抗體。可使用雜交瘤技術，從經免疫的轉基因小鼠獲得針對抗原的 單克隆抗體。關于產生人抗體的技術的綜述，參見Lonberg and Huszar，1995，Int. Rev. Immunol. 13:65-93。關于產生人抗體和人單克隆抗體的該技術以及用于產生此類抗體的方 案的詳細討論，參考，例如，PCT 公 W098/24893 ;W092/01047 ;W0 96/34096 ;W0 96/33735 ; 歐洲專利號 0598, 877 和美國專利號 5, 413, 923 ;5, 625, 126 ;5, 633, 425 ;5, 569, 825 ; 5, 661，016 ;5, 545, 806 ;5, 814, 318 ;5, 885, 793 ;5, 916, 771 ;和 5, 939, 598。
[0039] 可通過己知方法測定抗體與CD30的特異性結合，例如，競爭性和非競爭性免疫 測定系統，使用諸如蛋白質印跡、放射免疫測定、ELISA(酶聯免疫吸附測定）、"夾層"免 疫測定、免疫沉淀測定、沉淀素反應、凝膠擴散沉淀素反應、免疫擴散測定、凝集測定、補體 固定測定、免疫放射分析測定、熒光免疫測定、蛋白A免疫測定（可參考，例如，Ausubel et al. , eds. , Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc. , New York, 4th ed. 1999) ；Harlow & Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.，1999)〇
[0040] 此外，可通過競爭性結合測定法來測定抗體與⑶30的結合親和性以及抗體⑶30 相互作用的解離速率（off-rate)。競爭性結合測定的一個例子是放射免疫測定，包括：在 存在增加量的未經標記的⑶30的情況下，將經標記的⑶30 (例如，3H或1251)與目的抗體一 起孵育，并且檢測與經標記的⑶30結合的抗體。然后，可通過Scatchard作圖分析的數據 來確定抗體對CD30的親和性和結合解離速率。還可使用放射免疫測定來測定與第二抗體 的競爭。在這種情況下，在存在增加量的未經標記的第二抗體的情況下，將CD30與綴合到 經標記的化合物（例如， 3H或1251)上的目標抗體一起孵育。或者，可通過表面等離振子共 振來測定抗體與CD30的結合親和性以及抗體CD30相互作用的結合和解離速率。
[0041] 可根據抗體類型，通過標準方法，利用CD30蛋白的含有抗原的片段來制備抗體 (可參見，例如，Kohler，et al.，Nature，256:495，（1975) ;Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (C. S. Η. P. , NY, 1988) ；Queen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033(1989)和 TO 90/07861 ;Dower et al·，TO 91/17271 和 McCafferty et al.，W0 92/01047)(出于所有目的，每份文獻通過引用并入本文）。例如，可使用多種技 術來制備單克隆抗體，包括，例如，使用雜交瘤、重組以及噬菌體展示技術或者它們的組 合。雜交瘤技術在例如上文的 Harlow et al·，和 Hammerling，et al·，In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, pp. 563-681 (Elsevier, N. Y.，1981)中有一般性討 論。可用于制造抗⑶30抗體的噬菌體展示方法包括，例如，Briinnan et al.，1995，J. Immunol. Methods 182:41-50 ；Ames et al.,1995, J. Immunol. Methods 184:177-186； Kettleborough et al.,1994,Eur.J.Immunol. 24:952-958 ；Persic et al. , 1997, Gene 187:9-18 ;Burton et al·, 1994, Advances in Immunology57:191-280 ;PCT 申請號 PCT/GB91/01134 ;PCT
【發明者】蒂娜·艾伯森, 瑪麗亞·L.·史密斯 申請人:西雅圖遺傳學公司