黃曲霉毒素m1和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種黃曲霉毒素M1和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，由微孔試劑(8)和試紙條(9)組成，其特征在于：所述的微孔試劑(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)、檢測線A線(6-1)和B線(6-2)，所述的C線(7)標記的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的A線(6-1)標記的是牛血清白蛋白標記的黃曲霉毒素M1結合物，所述的B線(6-2)標記的是牛血清白蛋白標記氨芐青霉素結合物，所述的微孔試劑(8)內設有試劑層(8-1)。本實用新型靈敏度高，檢測范圍廣，檢測速度快，操作方便。
【專利說明】黃曲霉毒素M1和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及檢測試劑領域，具體為一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002]黃曲霉毒素(aflatoxin)，是一種有強烈生物毒性的化合物，常由黃曲霉及另外幾種霉菌在霉變的谷物中產生，如大米、豆類、花生等，是目前為止最強的致癌物質是迄今為止文獻報道毒性最大的化學物質之一。黃曲霉毒素主要包括黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及另外兩種代謝產物Ml和M2。畜牧業養殖實踐中如果奶牛食用了被黃曲霉毒素污染的飼料后，大部分黃曲霉毒素會在奶牛體內代謝為黃曲霉毒素M1，并繼續存在在牛乳汁中，繼而被人食用而產生危害，尤其是對于以乳汁為主要食物的嬰兒危害更大。目前世界各國均對黃曲霉毒素Ml在生鮮乳中的最大殘留限量做出了規定，其中歐盟為0.05yg/L，美國和中國為 0.5 μ g/L。
[0003]β內酰胺類抗生素主要包括青霉素類和頭孢菌素類以及第三代頭孢類藥物，其作為一大類治療乳房炎的常用藥物，其殘留往往通過乳房直接分泌到乳汁，從而引起藥物殘留。β內酰胺類抗生素中的青霉素、阿莫西林等藥物對部分人群存在嚴重的過敏反應，因此可能會對人體健康造成威脅。國內外都對其在牛乳中的殘留限量做出了嚴格規定，我國和歐盟、美國等都規定牛奶中的青霉素和阿莫西林最大殘留不能超過4 μ g/L。
[0004]目前黃曲霉毒素Ml和β內酰胺類抗生素主的檢測主要依靠酶聯免疫檢測試劑盒方法、熒光測定法、液相色譜方法和液相色譜質譜聯用方法等，這些方法檢測能力能滿足國家限量標準要求，但多數依賴于大型分析儀器如高效液相色譜、液質聯用儀和熒光光度計、酶標儀等，主要用于實驗室內部檢測。而目前我國奶業行業養殖規模化程度不高，多數企業需要從散戶或者小規模生產者收集牛奶，因此有必要開發一種適用于現場收集時應用的檢測方法及其產品，滿足基層奶站和企業的實際檢測需求。
【發明內容】
[0005]本申請的目的在于提供一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，以解決現有試劑盒不能快速準確同時檢測生鮮乳黃曲霉毒素和內酰胺類抗生素的問題。
[0006]為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案:
[0007]—種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，由微孔試劑(8)和試紙條(9)組成，其特征在于:所述的微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)、檢測線A線(6-1)和B線(6_2)，所述的C線(7)標記的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的A線(6-1)標記的是牛血清白蛋白標記的黃曲霉毒素Ml結合物，所述的B線(6-2)標記的是牛血清白蛋白標記氨芐青霉素結合物，所述的微孔試劑(8)內設有試劑層(8-1)。
[0008]進一步，所述的微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3)。
[0009]進一步，所述的塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
[0010]進一步，8個微孔試劑⑶組成一排。
[0011]進一步，所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78、.82cm。
[0012]進一步，所述的微孔試劑⑶和試紙條(9)的個數按照1:1的比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8°C溫度下。
[0013]本發明的有益效果為:
[0014]1.靈敏度高，檢測范圍廣。試紙條以黃曲霉毒素Ml高靈敏度單克隆抗體和β內酰胺類抗生素單克隆抗體為基礎材料研制而成，可以用于檢測生鮮乳中的黃曲霉毒素Μ1，檢測限最低可以達到0.5yg/L，用于檢測β內酰胺類抗生素時，最低可達到2-4μ g/L，可滿足歐盟、美國和中國對這兩大類物質的限量要求。
[0015]2.檢測速度快，操作方便。試紙條實驗反應時間僅為3分鐘，操作簡便，無需特殊培訓。一般奶站工人經過簡單培訓后即可掌握。
[0016]3.檢測結果判定直觀，無需特殊儀器。試紙條檢測結果以C線和B線及A線的顏色作為判定標準，肉眼直接觀察，無需任何特殊儀器設備，非常適合于基層奶站和企業在實際收奶時現場檢測使用。
[0017]4.降低成本，節省費用。由于試紙條應用了高靈敏度的單克隆抗體，單個試紙條研制和生產的成本大為降低，與國外同類型產品相比價格僅為三分之一，可以有效地節省開支，為乳業安全保駕護航。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018]圖1本實用新型的試紙條(9)結構平面俯視圖
[0019]圖2本實用新型的試紙條(9)結構剖面示意圖
[0020]圖3本實用新型的微孔試劑⑶示意圖
[0021]圖4是微孔試劑⑶成排的示意圖
[0022]圖5本實用新型的檢測結果判定示意圖
[0023]背板I ;樣品墊2 ;纖維素膜3 ;吸水墊4 ;帶標記的保護膜貼紙5-1 ;保護膜貼紙
5-2 ；A線6-1 ；B線6-2 ;C線7 ;微孔試劑8 ;試劑層8_1 ;塑料微孔8_2 ;塑料蓋8_3 ;加樣刻度線8-4 ;試紙條9
【具體實施方式】
[0024]為了使本實用新型的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本實用新型進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本實用新型，并不用于限定本實用新型。
[0025]黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒的組裝
[0026]1.粘貼:將樣品墊⑵、纖維素膜(3)、吸水墊⑷、帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)參照圖2的順序逐一貼在支持背板(I)上。樣品墊(2)與纖維素膜(3)相接，纖維素膜(3)與吸水墊(4)相接，同時在樣品墊(2)和吸水墊(4)上分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)，其中樣品墊(2)的帶標記的保護膜貼紙(5-1)印有“MAX”標記，方便檢測使用。纖維素膜(3)上分別標記了控制線C線(7)、黃曲霉毒素Ml檢測線A線(6-1)和β內酰胺類抗生素檢測線B線(6-2)。C線(7)標記的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，A線(6-1)標記的是牛血清白蛋白標記的黃曲霉毒素Ml結合物，B線(6-2)標記的是牛血清白蛋白標記氨芐青霉素結合物。
[0027]2.切條:將粘貼好的試紙條(9)大板用切條機進行切割，每個試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78、.82cm，切割好的試紙條(9)儲藏在室溫下備用。
[0028]3.微孔試劑⑶的組裝:采用自動化加樣裝置定量的將納米金顆粒標記的高靈敏度黃曲霉毒素Ml單克隆抗體和β內酰胺類抗生素單克隆抗體加到塑料微孔(8-2)中形成試劑層(8-1)，置于凍干機冷凍干燥。冷凍干燥的微孔試劑(8)用塑料蓋(8-3)蓋好，儲藏于4-8°C備用，在塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)，一般為了方便使用8個微孔試劑(8)組成一排，供檢測使用。
[0029]4.試紙條(9)和微孔試劑(8)的組裝:將制備好的試紙條(9)和微孔試劑(8)按照1:1的比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，密封好后存放于4-8°C備用。
[0030]黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒的使用
[0031]1.樣品的準備:
[0032]將待檢測的生鮮乳取樣后恢復至室溫，樣品應無沉淀和雜質，不能太粘稠。現場采集的樣本最佳。
[0033]2.試紙條(9)的準備:
[0034]根據樣品數量將需要 使用的試紙條(9)從冷藏環境中突出后，靜置30分鐘使之恢復到室溫，然后從密封包裝中取出相應數量的試紙條(9)和微孔試劑(8)。所有實驗操作應在水平的實驗臺或者相應環境上操作，環境溫度無特殊限制。
[0035]3.檢測操作:
[0036](I)加樣:將準備好的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200μ 1，加入到已經去掉蓋的微孔試劑⑶中。注意:一個微孔試劑⑶對應一個試紙條(9)，只能檢測一個樣品，不能重復使用。
[0037](2)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打微孔試劑(8)中的液體使之充分混勻，混勻后的微孔應呈現粉紅色或者淺粉色等。
[0038](3)插條:取出試紙條(9)并將帶標記的保護膜貼紙(5-1)的一端插入微孔試劑
(8)中。請不要用手指或者其他物體觸碰試紙條(9)的中段，即含有檢測線A線(6-1)、Β線(6-2)和控制線C線(7)的纖維素膜(3)段。
[0039](4)計時:插條后開始計時3分鐘,觀察C線(7)是否出現,如果3min內C線(7)已經出現，即可判讀結果；如果C線(7)沒有出現，請延長2分鐘使液體爬升至C線(7)出現后判讀結果。
[0040]4.結果判定:圖5
[0041]陰性:如圖5第I個所示，C線(7)顯色，而A線(6-1)和B線(6_2)也顯色，且A線(6-1)和B線(6-2)顏色較C線(7)深；
[0042]黃曲霉毒素Ml陽性:C線(7)顯色，A線(6-1)顏色與C線(7)顏色相比較:[0043](1)如果A線(6-1)顏色較C線(7)淺:如圖5第2個所示，則表明樣品中黃曲霉毒素Ml的濃度處于0.05 μ g/L和0.5 μ g/L之間。按照歐盟標準判斷屬于陽性，而按照中國和美國標準判斷屬于陽性
[0044](2)如果A線(6-1)不顯色，如圖5第3個所示，則表明樣品中黃曲霉毒素Ml的濃度大于0.5 μ g/L。按照歐盟、中國和美國標準判斷均屬于陽性(圖4-3)。
[0045]β內酰胺類陽性:，如圖5第4個所示，C線(7)顯色，B線(6_2)不顯色。
[0046]黃曲霉毒素Ml和β內酰胺類同時判斷時，兩者的陰陽性標準互不影響，按照各自顯色判斷即可。
[0047]無效:如圖5中的第5和6個所示，C線(7)不顯示。
[0048]以上所述僅為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，本實用新型涉及的材料均為已知材料，凡在本實用新型的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，由微孔試劑(8)和試紙條(9)組成，其特征在于:所述的微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)、檢測線A線(6-1)和B線(6_2)，所述的C線(7)標記的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的A線(6-1)標記的是牛血清白蛋白標記的黃曲霉毒素Ml結合物，所述的B線(6-2)標記的是牛血清白蛋白標記氨芐青霉素結合物，所述的微孔試劑(8)內設有試劑層(8-1)。
2.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，其特征在于:所述的微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3) ο
3.根據權利要求2所述的一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，其特征在于:所述的塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
4.根據權利要求3所述的一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，其特征在于:8個微孔試劑(8)組成一排。
5.根據權利要求4所述的一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，其特征在于:所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78、.82cm。
6.根據權利要求5所述的一種黃曲霉毒素Ml和內酰胺類抗生素的快速檢測試劑盒，其特征在于:所述的微孔試劑(8)和試紙條(9)的個數按照1:1的比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8°C溫度下。
【文檔編號】G01N33/577GK203376328SQ201320541332
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月2日 優先權日:2013年9月2日
【發明者】楊春江, 張曉燕, 李妍, 袁永欣, 馬孝斌 申請人:北京納百景弈生物科技有限公司