一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒。本實用新型屬于免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是：檢測試劑盒包括液滴瓶和測試條；液滴瓶分為示蹤液滴瓶，陽性對照液滴瓶，陰性對照液滴瓶，顯色液滴瓶；測試條設(shè)有反應(yīng)槽，反應(yīng)槽經(jīng)過布魯氏菌抗原包被和封閉液封閉。本實用新型具有結(jié)構(gòu)簡單，快捷方便，適于現(xiàn)場操作，檢測準(zhǔn)確，檢測靈敏度高等優(yōu)點;本實用新型在一次實驗中同時測定樣品、陽性對照和陰性對照，從而能準(zhǔn)確地界定檢測結(jié)果和有效性，可廣泛用于現(xiàn)場高靈敏度鹽酸克倫特羅速測。
【專利說明】一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，鹽酸克倫特羅俗名“瘦肉精”，是β2受體激動劑，屬于擬腎上腺素類藥物?？藗愄亓_在家畜和人體內(nèi)吸收好，瘦肉精的化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在體內(nèi)不會破壞分解，以原形排出體外。研究顯示瘦肉精完全能耐受100°c高溫，要經(jīng)126°C油煎5分鐘才會破壞減半。因此常規(guī)烹調(diào)對肉食品殘留的瘦肉精起不到破壞作用。如果生豬在屠宰前沒有足夠休停時間(一般停藥28天以上)，則在肌肉和內(nèi)臟器官有較高濃度的藥物殘留。人食用后重者出現(xiàn)心慌、肌肉震顫、頭疼、神經(jīng)過敏等癥狀；輕者感覺不明顯，但長期食用可致“慢性中毒”，引致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤。2002年9月10日農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部、國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》，鹽酸克侖特羅和萊克多巴胺等7種“瘦肉精”列為禁用藥品.[0003]目前，鹽酸克倫特羅檢測方法有:1).液相色譜(Liquid Chromatography, LC)法，液相色譜法是目前國內(nèi)絕大多數(shù)檢測機構(gòu)都在使用的方法，最低檢測限都在0.5ng/g以上，而且檢測過程煩瑣、檢測時間長，需貴重儀器、難于操作，不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代檢測要求。2)利用具有高度專一性的單克隆抗體或多克隆抗體設(shè)計的鹽酸克倫特羅的酶聯(lián)免疫法也是目前最常用的鹽酸克倫特羅檢測方法，最低檢測限可達(dá)0.05ng/g，靈敏度和精確度都符合標(biāo)準(zhǔn)，但該法檢測程序較多還需要特殊的讀盤儀器，得由專業(yè)技術(shù)人員執(zhí)行，而且假陽性率高，不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測。3)試紙條檢測法，該法適合現(xiàn)場快速檢測，但因靈敏度低，最低檢測限在5ng/g以上，且沒有同時進(jìn)行陽性和陰性對照，容易造成假陽性或假陰性的結(jié)果。同時存在不適合現(xiàn)場快速檢測等技術(shù)問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本實用新型為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題而提供一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒。
[0005]本實用新型的目的是提供一種操作簡單，準(zhǔn)確快速，靈敏度高，而且又能同時進(jìn)行陽性和陰性對照檢測等特點的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒。
[0006]本實用新型現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒所采取的技術(shù)方案是:
[0007]—種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:檢測試劑盒包括液滴瓶和測試條；液滴瓶分為示蹤液滴瓶，陽性對照液滴瓶，陰性對照液滴瓶，顯色液滴瓶；測試條設(shè)有反應(yīng)槽，反應(yīng)槽經(jīng)過布魯氏菌抗原包被和封閉液封閉。
[0008]本實用新型現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒還可以采用如下技術(shù)方案:
[0009]所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是:測試條設(shè)有3 - 20個反應(yīng)槽，用于同時檢測陽性對照、陰性對照一個或多個樣品。反應(yīng)槽是經(jīng)鹽酸克倫特羅抗體包被，封閉液封閉過的；示蹤液含有預(yù)標(biāo)記的鹽酸克倫特羅。
[0010]所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是:測試條反應(yīng)槽為圓形凹槽。
[0011]所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是:示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶、陰性對照液滴瓶和顯色液滴瓶的瓶口設(shè)有錐形尖嘴，便于滴加測試液體。
[0012]所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是:示蹤液滴瓶裝有能間接產(chǎn)生肉眼可見顏色的標(biāo)記物，標(biāo)記物為堿性磷酸酶、過氧化氫酶，相偶聯(lián)的鹽酸克倫特羅溶液。該偶聯(lián)鹽酸克倫特羅能與包被在反應(yīng)槽中的鹽酸克倫特羅抗體結(jié)合。
[0013]所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特點是:示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶、陰性對照液滴瓶和顯色液滴瓶并排在檢測試劑盒的下側(cè)，測試條位于檢測試劑盒的上部。
[0014]顯色液滴瓶中裝有顯色液，所述的顯色液含有能與所述蹤液中的鹽酸克倫特羅標(biāo)記酶反應(yīng)的底物，如TMB。
[0015]陽性對照液滴瓶中裝有含已知濃度鹽酸克倫特羅的液體。
[0016]陰性對照液滴瓶中裝有不含鹽酸克倫特羅的緩沖液。
[0017]本實用新型具有的優(yōu)點和積極效果是:
[0018]現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒由于采用了本實用新型全新的技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有結(jié)構(gòu)簡單，使用方便，不需要儀器就能檢測，檢測靈敏度比免疫層析試紙條高出十倍以上等優(yōu)點。
[0019]本實用新型在一次現(xiàn)場用免疫檢測實驗中，能同時測定樣品，陽性對照和陰性對照，避免了使用免疫層析試紙條時可能隱藏的假陽性和假失效的結(jié)果，因此，能正確地界定檢測結(jié)果及有效性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020]圖1是本實用新型現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖中，1、測試條，2、蹤液瓶，3、顯色液瓶，4、陽性對照液瓶，5、陰性對照液瓶。
【具體實施方式】
[0022]為能進(jìn)一步了解本實用新型的內(nèi)容、特點及功效，茲例舉以下實施例，并配合附圖詳細(xì)說明如下:
[0023]參閱附圖1。
[0024]實施例1
[0025]一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，包括液滴瓶和測試條I ;液滴瓶分為示蹤液滴瓶2，陽性對照液滴瓶3，陰性對照液滴瓶4，顯色液滴瓶5 ;示蹤液滴瓶2、陽性對照液滴瓶3、陰性對照液滴瓶4和顯色液滴瓶5并排在檢測試劑盒的下側(cè)，測試條I位于檢測試劑盒的上部。測試條設(shè)有反應(yīng)槽，反應(yīng)槽經(jīng)過布魯氏菌抗原包被和封閉液封閉。
[0026]示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶、陰性對照液滴瓶和顯色液滴瓶的瓶口設(shè)有錐形尖嘴，便于滴加測試液體。測試條設(shè)有16個反應(yīng)槽，用于同時檢測陽性對照、陰性對照一個或多個樣品。
[0027]示蹤液滴瓶中裝有:與能間接產(chǎn)生肉眼可見顏色的標(biāo)記物，如:堿性磷酸酶、過氧化氫酶，相偶聯(lián)的鹽酸克倫特羅溶液；該偶聯(lián)鹽酸克倫特羅能與顯色液滴瓶中的底物反應(yīng)產(chǎn)生肉眼可見的顏色。示蹤液滴瓶中的預(yù)標(biāo)記的鹽酸克倫特羅是由肉眼可見顏色的膠體金標(biāo)記的。
[0028]顯色液滴瓶中裝有顯色液，所述的顯色液含有能與所述蹤液中的鹽酸克倫特羅標(biāo)記酶反應(yīng)的底物，如TMB。陽性對照液滴瓶中裝有含已知濃度鹽酸克倫特羅的液體。陰性對照液滴瓶中裝有不含鹽酸克倫特羅的緩沖液。
[0029]實施例2
[0030]一種新型現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，包括:裝在塑料真空袋里的2條測試條I和裝在液滴瓶里的示蹤液瓶2，及顯色液瓶3，陽性對照液瓶4及陰性對照液瓶5，各I瓶。
[0031]測試條是成形塑膠條，每個測試條含有8個反應(yīng)槽可用于同時測定陽性對照，陰性對照以及1-6個待測樣品。反應(yīng)槽是事先經(jīng)含2ug/ml鹽酸克倫特羅抗體的PBS緩沖液包被后，用2%BSA封閉液封閉過的。
[0032]示蹤液是含有過氧化氫酶標(biāo)記的鹽酸克倫特羅(10ng/ml)溶解在含1%BSA的PBS緩沖液。
[0033]陽性對照液是含0.5ng/ml鹽酸克倫特羅，溶解在含1%BSA的PBS緩沖液。
[0034]陰性對照液是含1%BSA的PBS緩沖液，不含鹽酸克倫特羅。
[0035]顯色液是過氧化氫酶的底物TMB (0.2mg/ml)和H202 (0.03%)混合液。
[0036]實施例3
[0037]現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒制備:試劑盒包括一個測試條，一滴瓶示蹤液，一滴瓶陽性對照液，一滴瓶陰性對照液，一滴瓶顯色液、洗滌液、終止液和塑料吸管；測試條含有多個反應(yīng)槽，所述的反應(yīng)槽是事先經(jīng)鹽酸克倫特羅抗體包被，封閉液封閉過的；示蹤液含有預(yù)標(biāo)記的鹽酸克倫特羅抗體。
[0038]本實施例的具體實施過程:
[0039]測試條制備:選擇具有固定形狀，含有可盛裝液體的多個反應(yīng)槽，常溫常壓下化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定不與待測的樣品及檢測系統(tǒng)中的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的成形板。所述的反應(yīng)槽與蛋白類分子有高親和力。用IOOmM Tris-HCl (pH8)緩沖液將鹽酸克倫特羅特異性抗體稀釋至2ug/ml，取100微升(每個槽)添加于測試條的槽中，靜置4小時或以上；洗槽后用150微升(每個槽)2%牛血清蛋白-PBS緩沖液封閉4小時或以上，再洗槽后，于45度。C烘干，用鋁箔袋真空包裝，置于冰箱備用。所述的鹽酸克倫特羅特異性抗體可以是從市場購得也可以按公知的抗體制備方法來獲得。
[0040]示蹤液制備:將過氧化氫酶預(yù)先標(biāo)記的鹽酸克倫特羅用1%牛血清蛋白-PBS緩沖液釋至0.01-5000ng/ml，無菌過濾后裝在液滴瓶里，置于冰箱備用。所述的鹽酸克倫特羅標(biāo)記物可以是能直接或間接產(chǎn)生肉眼可見顏色的一種標(biāo)記物(如:堿性磷酸酶，過氧化氫酶，膠體金)。
[0041]陽性對照液制備:所述的陽性對照液含鹽酸克倫特羅。將鹽酸克倫特羅用1%牛血清蛋白-PBS緩沖液釋0.01-5ng/ml,無菌過濾后裝在液滴瓶里，置于冰箱備用。[0042]陰性對照液制備:所述的陰性對照液含有1%牛血清蛋白-PBS緩沖液，該陰性緩沖液不含鹽酸克倫特羅，無菌過濾后裝在液滴瓶里，置于冰箱備用。
[0043]顯色液制備:所述的顯色液是示蹤液中所含鹽酸克倫特羅標(biāo)記酶的底物混合液。將示蹤液中所含抗體標(biāo)記酶的底物用適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋成工作濃度，無菌過濾后裝在避光液滴瓶里，置于冰箱備用。例:過氧化氫酶顯色液制備:將TMB溶解于用50mM檸檬酸緩沖液(PH4.5)，調(diào)濃度至0.2mg/ml，再加過氧化氫至0.03% (此TMB-過氧化氫混合液即為過氧化氫酶顯色液)，無菌過濾后裝在避光液滴瓶里，置于冰箱備用。
[0044]本實施例新型現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒的檢測過程，包含下述幾個步驟:
[0045]I)加樣反應(yīng):取一測試條,給每個反應(yīng)槽作記號,如:反應(yīng)槽1-8 ;在各反應(yīng)槽中加入I滴示蹤液，再分別在反應(yīng)槽I和反應(yīng)槽2中加入I滴陽性對照液和陰性對照液，用不同的塑料吸管分別吸取不同待測樣品，在反應(yīng)槽3-8中分別滴加I滴待測樣品，輕晃混勻后室溫下靜置5-30分鐘。
[0046]2)洗滌:倒掉反應(yīng)槽中液體并用過濾水(或自來水)沖洗反應(yīng)槽5次或以上；每次沖洗后，將反應(yīng)槽倒干再摔向吸水紙(如衛(wèi)生紙)上以除去反應(yīng)槽內(nèi)水珠。
[0047]3)顯色:在每個反應(yīng)槽內(nèi)加入2滴顯色液，輕晃測試條并觀察反應(yīng)槽中顏色變化，直至陰性反應(yīng)槽內(nèi)有清晰的顏色出現(xiàn)，
[0048]4)結(jié)果分析:比較各反應(yīng)槽(陽性對照，陰性對照和各樣品)的顏色深淺程度以確定該被檢樣品是陽性還是陰性。
[0049]由于陽性對照及陽性樣品中鹽酸克倫特羅能與示蹤液中預(yù)標(biāo)記的鹽酸克倫特羅相互競爭地與反應(yīng)槽上鹽酸克倫特羅抗體結(jié)合，而陰性對照不能；因此，正常情況下陽性樣品不顯色，陰性顯色。如果被檢樣品的顏色明顯比陰性對照淺，說明該被檢樣品為陽性；如果被檢樣品的顏色與陰性對照相同或更深說明該被檢樣品為陰性；如果被檢樣品的顏色比陰性對照稍淺，比陽性對照深說明該被檢樣品為陽性，其鹽酸克倫特羅濃度低于陽性對照；如果陽性對照的顏色與陰性對照相同或更深說明該實驗失敗。
[0050]本實施例具有所述的結(jié)構(gòu)簡單，快捷方便，適于現(xiàn)場操作，檢測準(zhǔn)確，檢測靈敏度高等優(yōu)點；在一次實驗中同時測定樣品、陽性對照和陰性對照，從而準(zhǔn)確地界定檢測結(jié)果和有效性。
【權(quán)利要求】
1.一種現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:檢測試劑盒包括液滴瓶和測試條；液滴瓶分為示蹤液滴瓶，陽性對照液滴瓶，陰性對照液滴瓶，顯色液滴瓶；測試條設(shè)有反應(yīng)槽，反應(yīng)槽經(jīng)過布魯氏菌抗原包被和封閉液封閉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:測試條設(shè)有3 - 20個反應(yīng)槽，用于同時檢測陽性對照、陰性對照一個或多個樣品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:測試條反應(yīng)槽為圓形凹槽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶、陰性對照液滴瓶和顯色液滴瓶的瓶口設(shè)有錐形尖嘴，便于滴加測試液體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:示蹤液滴瓶裝有能間接產(chǎn)生肉眼可見顏色的標(biāo)記物，標(biāo)記物為堿性磷酸酶、過氧化氫酶，相偶聯(lián)的鹽酸克倫特羅溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的現(xiàn)場用高靈敏度鹽酸克倫特羅速測試劑盒，其特征是:示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶、陰性對照液滴瓶和顯色液滴瓶并排在檢測試劑盒的下偵牝測試條位于檢測試劑盒的上部。
【文檔編號】G01N21/78GK203376264SQ201320494943
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年8月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月13日
【發(fā)明者】鄒潮 申請人:哈德遜（天津）生物技術(shù)有限責(zé)任公司