一種hit抗體檢測免疫熒光層析試紙條的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，該試紙條由依次在襯板上相互搭接的樣品墊、反應膜和吸收墊組成，所述樣品墊兩端分別設置有第一加樣點和第二加樣點，所述反應膜固定有一條內部質控帶和至少一條抗體檢測帶。通過上述方式，本實用新型HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，檢測過程簡單、高效、準確、價廉且實用，可實現半定量或定量檢測，為我國臨床肝素誘導的血小板減少癥及相關并發癥的診斷提供較為可靠實用的方法。
【專利說明】—種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及醫學檢測領域，特別是涉及一種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條。
【背景技術】
[0002]肝素是臨床上應用最為廣泛的抗凝藥物之一，其主要副作用是出血、血小板減少并伴隨血栓栓塞，以及過敏反應和注射部位皮膚壞死等，其中肝素所致的血小板減少癥(heparin-1nduced thrombocytopenia, HIT)及血栓栓塞并發癥(心臟栓塞和心肌梗死、肢體血管栓塞和肢體壞死)最為嚴重，發病率大于5%，其中死亡率約為20-30%。
[0003]由于HIT及血栓并發癥臨床表現多樣性，且缺少特異性的輔助檢查方法，做到早期診斷有困難。病人在被臨床確定診斷時，常常是已經發生了難以逆轉的多發性危及生命的靜脈和動脈血栓；該病誤診又常誤導實施血小板輸血治療，進而加重血栓綜合癥和增高死亡率。英國血小板輸血指南中明確指出“肝素引起的免疫性血小板減少癥是血小板輸注禁忌癥”，然而迄今全世界HIT的診斷和治療均尚未規范化，特別是在我國臨床，一般不對血小板減少患者進行相關抗體檢測，更不對其進行抗體鑒定和分析，造成大量HIT患者難以準確診斷，誤輸血小板，導致嚴重的動靜脈血栓甚至死亡。早期診斷HIT并采取治療措施對于減少血栓栓塞等嚴重并發癥的發生具有重要意義，除密切觀察臨床表現、動態監測血小板數量外，對肝素治療的或者高度懷疑HIT的患者進行HIT抗體檢測以支持診斷很有必要，但目前HIT抗體檢測尚未普及，其診斷主要依據臨床表現，盡管國外現存的HIT抗體檢測技術和方法較多，但存在諸多缺陷，目前尚缺乏一種實用、簡便、快捷而且特異性高的檢測方法。
[0004]研究表明，HIT抗體檢測是診斷HIT的必要條件，韓國學者Lee等檢測91例維持性血液透析患者血清HIT抗體，結果顯示血液透析患者HIT抗體的陽性率達到34%，為正常健康人的10倍，HIT抗體陽性的血液透析患者其血管通路堵塞的發生率顯著高于陰性患者。HIT抗體產生的概率隨著使用肝素的治療持續時間延長逐漸上升。如心血管手術患者因長時間使用肝素，產生HIT抗體者可達30% -60%。通常，HIT抗體檢查呈強陽性的患者易于發展為HIT。CarrierM等的研究發現,體內HIT抗體的生成與患者的死亡率相關,進一步的研究表明，維持性血液透析治療的患者體內HIT抗體的生成可以顯著增加心血管病死亡率。美國病理學會建議，在接受肝素治療期間出現血小板減少或新血栓的患者應檢測HIT抗體。目前HIT的診斷主要依據臨床表現，HIT抗體相關的實驗室檢測可為HIT確診提供重要依據，并能預測非HIT患者不良心臟事件的發生。
[0005]國內目前HIT的診斷和治療均尚未規范化，替代抗凝治療更是很少被應用，臨床醫師尤其非血液專科醫師對HIT的認識程度尚且不夠，在臨床工作中需加強對HIT的警惕和認識，從而及早發現及時治療，盡量避免形成嚴重的血栓并發癥。盡管現存的HIT抗體檢測技術和方法很多，但國內臨床上還沒有具有實用價值的簡便、快捷而且特異性很高的檢測方法，因此對HIT準確、便捷的檢測方法的進一步研究，將有助于本病的早期診斷和防治O
[0006]美國等國家已經研發出相關的檢測試劑，但特異性較差，此外價格昂貴，購買繁瑣也限制了其在國內的應用，且其中陰陽性的預測值是根據本國群體統計而來，直接用國外產品的陰陽預測值來判斷國內個體的檢測結果，因群體的差異，可能會導致假性結果的產生，因此中國群體應該有自己的陰陽性的預測值，使檢測結果的準確性提高。
實用新型內容
[0007]本實用新型主要解決的技術問題是提供一種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，該試紙條使用上簡單、高效、準確、價廉且實用。
[0008]為解決上述技術問題，本實用新型采用的一個技術方案是:提供一種免疫熒光層析試紙條，包括反應膜、樣品墊、吸收墊和底板，所述反應膜位于所述底板上，所述反應膜上固定有檢測帶和質控帶，所述樣品墊和所述吸收墊分別與所述反應膜的兩側部分重疊，并位于所述反應膜和所述底板上，所述樣品墊上固定有第一加樣點和第二加樣點，所述第一加樣點設置在遠離所述樣品墊與所述反應膜重疊的一側，所述第二加樣點設置在接近所述樣品墊與所述反應膜重疊的一側。
[0009]在本實用新型一個較佳實施例中，所述檢測帶為至少一條，所述檢測帶上固定有肝素-血小板因子4復合物，每條所述檢測帶的間距為5mm。
[0010]在本實用新型一個較佳實施例中，所述質控帶為一條，所述質控帶上固定有人IgG0
[0011]在本實用新型一個較佳實施例中，所述反應膜的材料為硝酸纖維膜，醋酸纖維膜，尼龍膜或聚四氟乙烯膜。
[0012]本實用新型的有益效果是:本實用新型的HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，免疫熒光層析技術操作快速簡便，結合檢測儀器可實現半定量或定量檢測，檢測過程簡單、高效、準確、價廉且實用，不容易漏檢，對操作人員技術要求不高，能輔助臨床對肝素誘導血小板減少癥相關疾病的早期診斷，快速診斷血小板減少癥以及血栓栓塞等嚴重并發癥是否是由肝素引起，對及時停用肝素和避免誤輸血小板而加重病情的診療起指導作用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013]為了更清楚地說明本實用新型實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實用新型的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其它的附圖，其中:
[0014]圖1是本實用新型的HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條一較佳實施例的結構示意圖；
[0015]附圖中各部件的標記如下:1、反應膜，2、樣品墊，3、吸收墊，4、底板，5、檢測帶，6、質控帶，7、第一加樣點，8、第二加樣點。
【具體實施方式】
[0016]下面將對本實用新型實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本實用新型的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本實用新型中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本實用新型保護的范圍。
[0017]實施例一:
[0018]請參閱圖1，提供一種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，包括反應膜1、樣品墊2、吸收墊3和底板4。所述反應膜I位于所述底板4上，所述反應膜I上固定有檢測帶5和質控帶6，所述檢測帶5為兩條，所述質控帶6為一條，所述反應膜的材料可以選為硝酸纖維膜，醋酸纖維膜，尼龍膜或聚四氟乙烯膜。
[0019]所述樣品墊2和所述吸收墊3分別與所述反應膜I的兩側部分重疊，并位于所述反應膜I和所述底板4上。所述樣品墊2上包括第一加樣點7和第二加樣點8,所述第一加樣點7設置在遠離所述樣品墊2與所述反應膜I重疊的一側，所述第二加樣點8設置在接近所述樣品墊2與所述反應膜I重疊的一側。
[0020]所述HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條的制備過程為:
[0021]I)反應膜的制備
[0022]選取Millipore HF 180帶背襯膜作為反應膜，將其裁成30 X 1.8cm大小備用。用
0.0lM的pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液將人IgG的濃度調節為0.5mg/ml，加入體積分數為1%的Tween-20，使用劃膜儀將其噴于NC膜表面作為質控線，劃膜量為0.5 μ 1/cm。用0.0lM的PH為7.2磷酸鹽緩沖液即PBS配置20 μ g/ml PF4和5 μ g/ml肝素，兩者等體積混合后，于4°C過夜后加入體積分數為1%的Tween-20，使用劃膜儀將其噴于NC膜表面作為檢測線，每條線間隔為5_，劃膜結束后立即放入37°C烘箱中干燥過夜，室溫保存備用。
[0023]2)試紙條的組裝
[0024]選取國產優質玻璃纖維膜BT100作為樣品墊材料，將其剪成30X1.8cm大小備用。選取國產優質吸水紙CH37K，并將其剪裁成30X 1.8cm大小備用。在規格為30X6cm的PVC底板上先黏貼反應膜，再將樣本墊與吸水紙采取搭接的方法黏貼于底板上，搭接的長度為
0.5mm,以便于反應液的擴散。組裝好后，將其切成4mm寬的試紙條，并封裝于塑料外殼中，放于鋁箔袋中，4 °C下密封保存。
[0025]實施例二:
[0026]提供一種實施例一所述試紙條用于肝素誘導的血小板減少癥抗體檢測的方法:
[0027](I)熒光反應液的制備
[0028]將抗人IgG抗體溶液用磷酸鹽緩沖液調節其濃度為2mg/ml，pH為7.5至8.0。取Iml抗體溶液，緩慢加入100 μ I濃度為lmg/ml的cy5熒光染料，在4°C下緩慢攪拌3h后再室溫反應lh，再用pH為7.4的磷酸鹽緩沖液進行透析，去除未反應的cy5染料。透析液完成后回收偶聯好的熒光抗體，測定偶聯效率與抗體濃度后，在4°C下避光保存。
[0029](2)檢測步驟
[0030]I)將試紙條和熒光反應液平衡至室溫即18_25°C ；
[0031]2)加入5μ I待檢樣本至樣品墊中。
[0032]3)加入15 μ I含有體積分數為0.5%的Tween-20的pH為7.2的0.15M PBS至樣
品墊中。
[0033]7)加入5μ1 cy5_抗人IgG至樣品墊中。[0034]8 )重復步驟2 )三次。
[0035]9)將試紙條置于熒光信號讀取儀器中，讀取熒光信號進行測定。
[0036]以上所述僅為本實用新型的實施例，并非因此限制本實用新型的專利范圍，凡是利用本實用新型說明書內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其它相關的【技術領域】，均同理包括在本實用新型的專利保護范圍內。
【權利要求】
1.一種HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，其特征在于，包括反應膜、樣品墊、吸收墊和底板，所述反應膜位于所述底板上，所述反應膜上固定有檢測帶和質控帶，所述樣品墊和所述吸收墊分別與所述反應膜的兩側部分重疊，并位于所述反應膜和所述底板上，所述樣品墊上固定有第一加樣點和第二加樣點，所述第一加樣點設置在遠離所述樣品墊與所述反應膜重疊的一側，所述第二加樣點設置在接近所述樣品墊與所述反應膜重疊的一側。
2.根據權利要求1所述的HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述檢測帶為至少一條，所述檢測帶上固定有肝素-血小板因子4復合物，每條所述檢測帶的間距為5mm ο
3.根據權利要求1所述的HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述質控帶為一條，所述質控帶上固定有人IgG。
4.根據權利要求1所述的HIT抗體檢測免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述反應膜的材料為硝酸纖維膜，醋酸纖維膜，尼龍膜或聚四氟乙烯膜。
【文檔編號】G01N33/558GK203396776SQ201320432876
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年7月19日 優先權日:2013年7月19日
【發明者】王紅梅, 李勇, 尹煥才, 丁少華, 段生寶, 田晶晶, 陳燁洲, 史素霞, 李冬 申請人:中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所