一種參芪扶正注射液核磁共振質量控制方法
【專利摘要】本發明提供一種采用質子核磁共振指紋圖譜結合多成分含量測定的方法來控制參芪扶正注射液中氨基酸、有機酸和糖類的質量。本發明采用定性、定量的質子核磁共振指紋圖譜技術，建立一種針對參芪扶正注射液中氨基酸、有機酸和糖類化合物的質量控制方法，在工業生產中可與HPLC指紋圖譜聯合使用，實現對參芪扶正注射液產品的全面質量控制。
【專利說明】一種參苗扶正注射液核磁共振質量控制方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及參芪扶正注射液的質量控制方法，特別涉及采用質子核磁共振指紋圖譜結合多成分含量測定的方法來控制參芪扶正注射液中氨基酸、有機酸和糖類的質量。
【背景技術】
[0002]參芪扶正注射液是麗珠集團利民制藥廠研制開發成功的國家二類中藥新藥參芪扶正注射液，該藥為國內首創的純中藥澄明大輸液，1999年11月獲國家藥品監督管理局正式生產批文。參芪扶正注射是由傳統補氣藥黨參、黃芪組成的復方制劑，具有益氣扶正之功效，用于肺脾氣虛引起的神疲乏力，少氣懶言，自汗眩暈；肺癌、胃癌見上述癥候者的輔助治療。
[0003]在2009年I月28日公開的200710136382.0號中國專利申請中報道了有關參芪扶正注射液的質量控制方法，按照該專利公開中記載的方法，建立起了參芪扶正注射液的HPLC指紋圖譜。該專利申請公開中記載的方法據盡管有許多優點，但仍存在不足，采用高效液相色譜法(HPLC)分析方法對天然產物進行研究，需要經過提取、精制等預處理，操作較煩瑣，且效率低。而且ODS色譜柱在分離過程中，性較大的水溶性成分損失被。因此，HPLC指紋圖譜技術不能檢測到參芪扶正注射液中的氨基酸、有機酸和糖類化合物。
[0004]近年來由于現代超導高磁場的脈沖Fourier變換核磁共振譜儀的應用，核磁共振技術應用于天然產物分析已日趨成熟。核磁共振定量分析法操作簡便，樣品用量少，定性鑒定和定量分析同步完成，無須被測物的標準對照品，只須一般標準品(內標)即可完成定量分析，分析速度和精密度可以接近HPLC法。
[0005]所以，本發明采用定性、定量的質子核磁共振指紋圖譜技術，建立一種針對參芪扶正注射液中氨基酸、有機酸和糖類化合物的質量控制方法，在工業生產中可與HPLC指紋圖譜聯合使用，實現對參芪扶正注射液產品的全面質量控制。
【發明內容】
[0006]本發明提供了一種參芪扶正注射液的1H-NMR指紋圖譜質量控制方法，可以有效解決參芪扶正注射液中氨基酸、有機酸和糖類化合物的含量測定問題，為參芪扶正注射液全面質量控制奠定基礎。
[0007]本發明是通過下列步驟實現的:
[0008](I)參芪扶正注射液1H-NMR指紋圖譜的建立和定性鑒別
[0009]①參芪扶正注射液樣品溶液的制備
[0010]參芪扶正注射液樣品凍干后精密稱取10mg，加入0.6ml D20(含內標TSP0.0Olg /ml),轉移至5mm核磁管中,加封直接用于1H-NMR測試。
[0011]②1H-NMR指紋圖譜的測定
[0012]將核磁管置于核磁共振儀中，采用水峰抑制脈沖序列測定參芪扶正注射液樣品溶液的1H-NMR指紋圖譜和對照品溶液的1H-NMR圖譜。[0013]優化的測試參數及條件為:抑水峰序列zgcppr，觀測頻率600.23MHz，測定溫度298K，譜寬7211.5Hz, 90°脈沖寬度13.87 μ s，采樣數據點65536，掃描次數16次，延遲時間2s，接受增益114。
[0014]③質子信號峰的定性鑒別
[0015]參芪扶正注射液對照品溶液的1H-NMR圖譜上質子信號峰分布在δ 0-5.5之間，其中δ 0.0-3.2是氨基酸和有機酸質子特征信號區，δ 3.3-5.5是糖基質子特征信號區(圖1)。根據質子信號峰的化學位移值和偶合裂分情況，結合參芪扶正注射液的二維核磁圖譜信息和標準品溶液的1H-NMR圖譜，共鑒定出17個氨基酸類、有機酸類和糖類化合物，分別
為:
[0016]
【權利要求】
1.一種參芪扶正注射液的1H-NMR指紋圖譜質量控制方法，包括以下步驟: a.稱取凍干參芪扶正注射液樣品，加入含內標TSP0.0Olg / ml的D2O,轉移至核磁管中后，加封用于1H-NMR測試，1H-NMR測試是采用水峰抑制脈沖序列測定參芪扶正注射液樣品溶液的1H-NMR指紋圖譜和對照品溶液的1H-NMR圖譜； b.質子信號峰的定性鑒別； c.選擇各個化合物中獨立的特征質子信號峰作為定量峰，TSP為內標化合物，應用以下公式測定參芪扶正注射液中蔗糖、葡萄糖、焦谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、琥珀酸、蘇氨酸、蘋果酸的含量:
2.根據權利要求1所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質量控制方法，其特征在于:所述步驟a中稱取IOmg的凍干參芪扶正注射液樣品，加入含內標TSP0.0Olg / ml的0.6ml D2O,轉移至5mm核磁管測定。
3.根據權利要求2所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質量控制方法，其特征在于:所述步驟b中質子信號峰的定性鑒別為:根據質子信號峰的化學位移值和偶合裂分情況，結合參芪扶正注射液對照樣品的二維核磁圖譜信息和標準品溶液的IH-NMR圖譜鑒定出蔗糖、葡萄糖、果糖、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、乙酸、脯氨酸、焦谷氨酸、蘋果酸、琥珀酸、天門冬氨酸、丙二酸、氨基丁酸和甲酸共17個化合物。
4.根據權利要求3所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質量控制方法，其特征在于:所述步驟d中采用MetresNova軟件對得到的1H-NMR指紋圖譜進行數據處理，數據處理包括相位調整、基線校正、分段積分。
5.根據權利要求4所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質量控制方法，其特征在于:所述步驟d中采用MetresNova軟件對全譜進行分段積分，以0.04為最小間隔積分，得到500個數據點，即每段化學位移值下的相對峰面積積分值，與制定的標準指紋圖譜進行比較，采用相關系數法和夾角余弦值法計算定性相似度，相似度大于0.95則認為注射液合格。
6.根據權利要求5所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質量控制方法，其特征在于:所述步驟a中1H-NMR的測試參數及條件為:抑水峰序列zgcppr，觀測頻率600.23MHz，測定溫度298K，譜寬7211.5Hz, 90。脈沖寬度13.8700 μ S，采樣數據點65536，掃描次數16次，延遲時間2s，接受增益114。
【文檔編號】G01N24/08GK103884731SQ201310756866
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年12月28日 優先權日:2013年12月28日
【發明者】曹暉, 姜苗苗, 許磊, 黃文華, 劉東來, 謝海燕 申請人:麗珠集團利民制藥廠, 珠海現代中藥高科技有限公司