一種用于篩選抗腫瘤藥物的spr傳感芯片的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，以市售的傳感片L1為基板，在所述基板表面偶聯含MDR1的微囊泡。本案利用MDR1特異性識別候選藥物分子，根據MDR1與藥物之間的親和力，判斷藥物可被腫瘤細胞耐受的可能性，實現藥物篩選，同時該芯片檢測的蛋白-藥物親和動力學也可被用于多藥耐藥機理的研究。本案制備的SPR傳感芯片結合了表面等離子共振技術的非標記及高靈敏性的優點，可開發作為有效的高通量藥物篩選和藥理學研究工具。
【專利說明】—種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及SPR傳感檢測領域，特別涉及一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法。
【背景技術】
[0002]腫瘤治療是目前的研究熱點，化療是時下治療惡性腫瘤的主要方法，然而腫瘤細胞對化療藥物的多藥耐藥是實現治療的主要障礙之一，也是多數腫瘤患者治療后效果不佳的重要因素。多藥耐藥蛋白(MDRl)屬于ATP能量依賴型跨膜轉運蛋白，對于外源藥物具有選擇性與特異性外排的功能。目前的大量研究均表明，MDRl的過表達是多藥耐藥的重要原因之一。因此，抗腫瘤藥物篩選中均將MDRl對藥物的識別能力作為重要依據，同時，多藥耐藥現象的研究中也將MDRl作為主要內容之一。
[0003]表面等離子共振傳感技術(SPR)發源于上世紀80年代，因其免標記、快速靈敏以及實時監測特性，被廣泛應用于生物大分子相互作用、大分子與小分子相互作用、藥物篩選以及腫瘤研究中。基于該技術開發的芯片與儀器已經高度商業化，目前國外主要有Biacore, IBIS等系列，國內也有中科院電子所研制的各型號儀器與芯片出售，然而這些芯片中還未有研究多藥耐藥現象及機理的報道。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，以填補國內市場上研究抗腫瘤藥物及多藥耐藥機理所用SPR傳感芯片的空白。
[0005]本發明提供一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，以市售的傳感片LI為基板，在所述基板表面偶聯含MDRl的微囊泡。
[0006]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，以市售的傳感片LI為基板，將所述基板放入BIACore3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以15?25微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以15?25微升/分鐘的流速注入15?25mM的3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為2?4min ;用磷酸緩沖液沖洗所述基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當所述BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl 芯片。
[0007]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，所述的含MDRl的微囊泡懸浮液采用如下方法制得:將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90%融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎與蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，將所述中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。[0008]優選地,所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法,在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。
[0009]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，在蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為lOOOOg，離心時間為lOOmin，溫度控制在4±0.I。。。
[0010]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，在獲得所述的含MDRl的微囊泡懸浮液后，將其注入BIAcore3000儀器前，還包括對所獲含MDRl的微囊泡懸浮液進行鑒定:采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出所獲含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及活度；采用動態光散射儀測定微囊泡的直徑分布，直徑在150?300nm之間的才能注入BIAcore3000 儀器中。
[0011]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，在制得Ll-MDRl芯片之后，還包括對其進行表面覆蓋率檢測:將所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。
[0012]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為25 ±0.1°C。
[0013]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，磷酸緩沖液配制方法為:將0.27g磷酸二氫鉀、1.42g磷酸氫二鈉、Sg氯化鈉及0.2g氯化鉀溶解于IL雙蒸水中，并通過滴加IM的鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液來調整pH至7.4。
[0014]優選地，所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，Tris緩沖液的pH 為 7.4。
[0015]本發明的有益效果是:利用MDRl特異性識別候選藥物分子，根據MDRl與藥物之間的親和力，判斷藥物可被腫瘤細胞耐受的可能性，實現藥物篩選，同時該芯片檢測的蛋白-藥物親和動力學也可被用于多藥耐藥機理的研究。本芯片結合了表面等離子共振技術的非標記及高靈敏性的優點，可開發作為有效的高通量藥物篩選和藥理學研究工具。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]圖1是Ll-MDRl芯片結構示意圖，其中I為玻璃片基，2為鍍金膜層，3為羧基化葡聚糖膜層，4為親脂殘基，5為微囊泡。
[0017]圖2是Ll-MDRl芯片檢測下不同底物的響應曲線。其中A為紅霉素，B為甲氨蝶呤，C為羅丹明123，D為利福平，E為肌酐。
【具體實施方式】
[0018]下面結合附圖對本發明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據以實施。
[0019]本發明提供了一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，包括以下步驟:[0020]步驟I)制備含MDRl的微囊泡懸浮液
[0021]將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90%融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎、蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，該中間層是高倍濃縮的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸緩沖液和蔗糖溶液的含量極少；隨后將中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。
[0022]在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。在進行蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為10000g(g代表重力加速度)，離心時間為lOOmin，溫度控制在4±0.1°C。Tris緩沖液的pH為7.4。
[0023]步驟2)對微囊泡懸浮液的鑒定
[0024]采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出堿性磷酸酶的活性與總蛋白量比值、蛋白活性與蛋白總量比值，從而獲知含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及蛋白活度；
[0025]采用動態光散射儀測定微囊泡的直徑分布，直徑在150?300nm之間的才能注入BIAcore3000儀器中，直徑不在此區間范圍的不適用于后續的試驗，應舍棄。動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為25 ±0.1°C。
[0026]步驟3)制作Ll-MDRl芯片
[0027]以市售的傳感片LI為基板，將基板放入BIACore3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以15?25微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以15?25微升/分鐘的流速注入15?25mM的3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為2?4min ;用磷酸緩沖液沖洗基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0028]3-[(3_膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸是一種兩性表面活性劑，可以增溶蛋白。
[0029]步驟4) Ll-MDRl芯片表面覆蓋率驗證
[0030]將Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出芯片并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。Ll-MDRl芯片的干燥可采用氮氣吹干、空氣吹干、烘干或者自然晾干。
[0031]值得注意的是，以上所用磷酸緩沖液均采用以下方法制得:將0.27g磷酸二氫鉀、
1.42g磷酸氫二鈉、8g氯化鈉及0.2g氯化鉀溶解于IL雙蒸水中，并通過滴加IM的鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液來調整pH至7.4。
[0032]實施例1:
[0033]步驟I)制備含MDRl的微囊泡懸浮液
[0034]將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90 %融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎、蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，該中間層是高倍濃縮的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸緩沖液和蔗糖溶液的含量極少；隨后將中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。
[0035]在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。在進行蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為10000g(g代表重力加速度)，離心時間為lOOmin，溫度控制在4±0.1°C。Tris緩沖液的pH為7.4。
[0036]步驟2)對微囊泡懸浮液的鑒定
[0037]采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出堿性磷酸酶的活性與總蛋白量比值、蛋白活性與蛋白總量比值，從而獲知含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及蛋白活度；
[0038]采用動態光散射儀測定微囊泡的直徑分布，直徑在150?300nm之間的才能注入BIAcore3000儀器中，直徑不在此區間范圍的不適用于后續的試驗，應舍棄。動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為25 ±0.1°C。
[0039]步驟3)制作Ll-MDRl芯片
[0040]以市售的傳感片LI為基板，將基板放入BIACore3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以15微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以15微升/分鐘的流速注入15mM的3-[(3_膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為2min ;用磷酸緩沖液沖洗基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0041 ] 步驟4) Ll-MDRl芯片表面覆蓋率驗證
[0042]將Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出芯片并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。
[0043]實施例2:
[0044]步驟I)制備含MDRl的微囊泡懸浮液
[0045]將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90 %融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎、蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，該中間層是高倍濃縮的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸緩沖液和蔗糖溶液的含量極少；隨后將中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。
[0046]在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。在進行蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為10000g(g代表重力加速度)，離心時間為lOOmin，溫度控制在4±0.1°C。Tris緩沖液的pH為7.4。
[0047]步驟2)對微囊泡懸浮液的鑒定
[0048]采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出堿性磷酸酶的活性與總蛋白量比值、蛋白活性與蛋白總量比值，從而獲知含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及蛋白活度；
[0049]采用動態光散射儀測定微囊泡的直徑分布，直徑在150?300nm之間的才能注入BIAcore3000儀器中，直徑不在此區間范圍的不適用于后續的試驗，應舍棄。動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為25 ±0.1°C。
[0050]步驟3)制作Ll-MDRl芯片
[0051]以市售的傳感片LI為基板，將基板放入BIACore3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以20微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以20微升/分鐘的流速注入20mM的3-[(3_膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為3min ;用磷酸緩沖液沖洗基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0052]步驟4) Ll-MDRl芯片表面覆蓋率驗證
[0053]將Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出芯片并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。
[0054]實施例3:
[0055]步驟I)制備含MDRl的微囊泡懸浮液
[0056]將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90%融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎、蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，該中間層是高倍濃縮的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸緩沖液和蔗糖溶液的含量極少；隨后將中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。
[0057]在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。在進行蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為10000g(g代表重力加速度)，離心時間為lOOmin，溫度控制在4±0.1°C。Tris緩沖液的pH為7.4。
[0058]步驟2)對微囊泡懸浮液的鑒定
[0059]采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出堿性磷酸酶的活性與總蛋白量比值、蛋白活性與蛋白總量比值，從而獲知含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及蛋白活度；
[0060]采用動態光散射儀測定微囊泡的直徑分布，直徑在150?300nm之間的才能注入BIAcore3000儀器中，直徑不在此區間范圍的不適用于后續的試驗，應舍棄。動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為25 ±0.1°C。
[0061]步驟3)制作Ll-MDRl芯片
[0062]以市售的傳感片LI為基板，將基板放入BIACore3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以25微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以25微升/分鐘的流速注入25mM的3-[(3_膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為4min ；用磷酸緩沖液沖洗基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0063]步驟4) Ll-MDRl芯片表面覆蓋率驗證
[0064]將Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出芯片并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。
[0065]實施例4:使用上述方法獲得的Ll-MDRl芯片進行SPR檢測
[0066]步驟I)將Ll-MDRl芯片放入BIAcore3000儀器中，首先通入磷酸鹽緩沖液(含有5mM ATP)，直至得到平穩基線。
[0067]步驟2) 5種對于MDRl具有不同親和力的底物紅霉素、甲氨蝶呤、羅丹明123、利福平以及肌酐溶解于磷酸緩沖液中，并通過Ll-MDRl芯片表面，獲得相應的響應曲線(見圖2，其中A為紅霉素，B為甲氨蝶呤，C為羅丹明123，D為利福平，E為肌酐)。
[0068]步驟3)對比文獻中各底物與轉運蛋白的親和力，排序與響應曲線結果一致，驗證本方法在多藥耐藥現象研究以及藥物篩選中應用的可行性。
[0069]盡管本發明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發明并不限于特定的細節和這里示出與描述的圖例。
【權利要求】
1.一種用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，以市售的傳感片LI為基板，在所述基板表面偶聯含MDRl的微囊泡。
2.根據權利要求1所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，以市售的傳感片LI為基板，將所述基板放入BIAcOre3000儀器中，注入磷酸緩沖液使其以15~25微升/分鐘的流速持續流經基板表面，隨后又向該儀器中以15~25微升/分鐘的流速注入15~25mM的3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持續時間為2~4min ;用磷酸緩沖液沖洗所述基板，最后向該儀器中注入含MDRl的微囊泡懸浮液，當所述BIACore3000儀器中折射率的信號變化參數RU值達到5500時，停止注入含MDRl的微囊泡懸浮液，待磷酸緩沖液沖洗掉未結合的微囊泡后，得到表面偶聯有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
3.根據權利要求2所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，所述的含MDRl的微囊泡懸浮液采用如下方法制得:將市售的MDCK-MDR1細胞進行平板培養，待MDCK-MDR1細胞生長至90 %融合后，對其進行胰酶-EDTA消化，離心，并重新懸浮于磷酸緩沖液中；將含MDCK-MDR1細胞的磷酸緩沖液放入超聲儀中，經超聲破碎、蔗糖密度梯度離心后，取離心液的中間層，將所述中間層懸浮于含250mM蔗糖的50mM Tris緩沖液中，從而獲得含MDRl的微囊泡懸浮液。
4.根據權利要求3所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，在超聲破碎時，超聲頻率為250Hz，超聲時間為3min。
5.根據權利要求3所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，在蔗糖密度梯度離心時，蔗糖濃度為38wt%，離心速度為10000g，離心時間為lOOmin，溫度控制在4 ± 0.1°C。
6.根據權利要求3所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，在獲得所述的含MDRl的微囊泡懸浮液后，將其注入BIACore3000儀器前，還包括對所獲含MDRl的微囊泡懸浮液進行鑒定:采用磷酸苯二鈉比色法檢測微囊泡中堿性磷酸酶的活性；采用熒光底物或同位素底物轉運法測定MDRl的蛋白活性；采用BCA法檢測含MDRl的微囊泡懸浮液中的蛋白總量；將以上測定參數進行比對，得出所獲含MDRl的微囊泡懸浮液中微囊泡的純度及活度；采用動態光散射儀檢測并確定微囊泡的直徑分布，直徑在150~300nm之間的才能注入BIAcore3000儀器中。
7.根據權利要求2所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，在制得Ll-MDRl芯片之后，還包括對其進行表面覆蓋率檢測:將所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000儀器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖液，當RU值的改變量小于50時，表明芯片表面已完全被微囊泡覆蓋，最后取出并用氮氣吹干即可用于后續的檢測試驗。
8.根據權利要求6所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，動態光散射儀的光源系統為氦離子激光系統，光源波長為633nm,動態光散射儀工作溫度為 25±0.10Co
9.根據權利要求2所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于，磷酸緩沖液配制方法為:將0.27g磷酸二氫鉀、1.42g磷酸氫二鈉、Sg氯化鈉及0.2g氯化鉀溶解于IL雙蒸水中，并通過滴加IM的鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液來調整pH至7.4。
10.根據權利要求3所述的用于篩選抗腫瘤藥物的SPR傳感芯片的制備方法，其特征在于， Tris緩沖液的pH為7.4。
【文檔編號】G01N21/55GK103712954SQ201310730985
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月27日 優先權日:2013年12月27日
【發明者】殷建, 陳名利, 林穎, 胡軍 申請人:中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所