中藥苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了中藥苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法,該方法包括供試液的制備,對照指紋圖譜的建立和供試液指紋圖譜的測定。本發明根據中藥苦黃注射劑中所含的活性成分,包括蒽醌類、黃酮類和生物堿類化合物的結構性質特點,通過大量實驗篩選出最佳的流動相組成,梯度洗脫程序、流速,檢測波長、色譜柱,柱溫等分析條件,經多次實驗驗證表明,本發明提供的中藥苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法可以全面、客觀、準確的檢測和評價苦黃注射液的質量,并且可以為苦黃注射液從源頭上保證原料藥材的安全,有效,為保證臨床療效具有重要意義。
【專利說明】中藥苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥制劑的質檢方法,具體涉及一種苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法及應用。
【背景技術】
[0002]苦黃注射劑是經典中藥注射劑,具有穩定和良好的臨床療效。處方源于《傷寒論》中的“茵陳蒿湯”(茵陳、大黃、山桅)。此方歷來被公認為治療濕熱黃疸的名方。苦黃注射液在此方基礎上,加減而得。該注射劑最早于96年批準上市銷售,執行標準為國家藥品標準(新藥轉正標準第30冊),為常熟雷允上制藥有限公司(前身國營常熟制藥廠)開發的一種有效治療黃疸型病毒性肝炎的中藥注射劑(藥品注冊號為國藥準字Z10960004),苦黃注射劑銷售近20多年來,臨床效果明顯,為肝病患者帶來了康復的機會。苦黃注射液由大黃、苦參、大青葉、春柴胡、茵陳等5味藥材制成,由于藥材較多,化學成分復雜,致使其質量控制難度較大。苦黃注射劑活性成分主要是黃酮類、蒽醌類及生物堿類化合物,但是目前苦黃注射劑活性成分的質量標準檢測方法只能一個一個對活性成分進行單獨檢測,或者只能對某個部位進行單獨檢測,檢測工作繁瑣,檢測效率低,且檢測的活性成分數量有限,不能很好的反應制劑的質量。
[0003]因此,很有必要在現有技術的基礎之上,設計研發一種能全面檢測和評價苦黃注射液質量的指紋圖譜檢測方法。
【發明內容】
[0004]發明目的:本發明的目的是解決現有技術的不足,提供一種苦黃注射液及其原料、半成品的指紋圖譜檢測方法,該檢測方法可以客觀、全面、準確的評價苦黃注射劑的質量,對控制苦黃注射劑的質量和原料藥材的質量和保證臨床療效具有重要意義。
[0005]技術方案:為了實現以上技術目的,本發明采取的技術方案為:
[0006]中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,包括以下步驟:
[0007]( I)供試品溶液制備:取苦黃注射液作為供試品溶液;
[0008](2)高效液相色譜法測定苦黃注射液的對照指紋圖譜:取10批以上苦黃注射液樣品在適當的色譜條件下進樣,測得各批次苦黃注射液的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為對照指紋圖譜;
[0009](3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:將待測苦黃注射液供試品溶液按步驟(2)相同的色譜條件進樣,測得供試品溶液的指紋圖譜;
[0010](4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
[0011]以上所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1: 100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫35?40°C,檢測波長為250?260nm。
[0012]以上所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30?35°C,檢測波長為260?270nm。
[0013]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:以DianmonsilC18(5ym,4.6X 250mm)為測定用色譜柱,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的比例為O:100。
[0014]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟
(3)所述的色譜條件為:以DianmonsilC18(5ym,4.6X250mm)為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的比例為98:2,20分鐘時流動相A:B的比例為84:16,30分鐘時流動相A:B的比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的比例為O:100o
[0015]本發明提供的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,包括以下步驟:
[0016](I)供試品溶液制備:取苦黃注射液原料藥材,經處理后得到原料藥材的供試品溶液;
[0017](2)高效液相色譜法測定原料的對照指紋圖譜:分別取苦黃注射液原料藥材各10批以上,按步驟(I)的處理方法制得供試品溶液,在適當的色譜條件下測得每批原料藥材的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為原料藥材對照指紋圖譜;
[0018](3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:取步驟(I)的供試品溶液按步驟
(2)相同的色譜條件進樣,測得苦黃注射液原料藥材的供試品溶液的指紋圖譜;
[0019](4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
[0020]以上所述的中藥苦黃注射液原料的指紋圖譜檢測方法,苦黃注射液的原料藥材為大黃、苦參、茵陳、春柴胡及大青葉藥材。
[0021]以上所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,步驟(I)所述的原料藥材處理方法為:將藥材粉碎,取藥材粉末4.0g,精密稱定,加水100ml,加熱回流I?2小時,過濾,取續濾液50ml濃縮至約IOml,加乙醇使含醇量達85 %,放置過夜,過濾,濾液濃縮并用水定容至10ml。
[0022]以上所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫35?40°C,檢測波長為250?260nm。
[0023]以上所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為0.5:100的Hac:H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30?35°C,檢測波長為260?270nm。
[0024]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:以Dianmonsi 1C18 (5 μ m,4.6X 250mm)為測定用色譜柱,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的比例為O:100o
[0025]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,步驟
(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:以DianmonsilC18(5ym,4.6X250mm)為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A: B的比例為98:2,20分鐘時流動相A: B的比例為84:16,30分鐘時流動相A: B的比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的比例為O:100o
[0026]本發明提供的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,包括以下步驟:
[0027]( I)供試品溶液制備:取苦黃注射液半成品作為供試品溶液;
[0028](2)高效液相色譜法測定苦黃注射液半成品的對照指紋圖譜:取10批以上苦黃注射液半成品在適當的色譜條件下進樣,測得各批次苦黃注射液半成品的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為對照指紋圖譜;
[0029](3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:將待測苦黃注射液半成品供試品溶液按步驟(2)相同的色譜條件進樣,測得供試品溶液的指紋圖譜;
[0030](4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
[0031]以上所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫35?40°C,檢測波長為250?260nm。
[0032]以上所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc:H20ICH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30?35°C,檢測波長為260?270nm。
[0033]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:以Dianmonsi 1C18 (5 μ m, 4.6 X 250mm)為測定用色譜柱,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的比例為O:100o
[0034]作為優選方案,以上所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,步驟(2)和步驟(3)所述的色譜條件為:以Dianmonsi 1C18 (5 μ m, 4.6 X 250mm)為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的比例為98:2,20分鐘時流動相A:B的比例為84:16,30分鐘時流動相A:B的比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的比例為0:100o
[0035]本發明所述的中藥苦黃注射液指紋圖譜檢測方法在評價苦黃注射液成品質量中的應用。
[0036]本發明所述的中藥苦黃注射液原料藥材指紋圖譜檢測方法在評價苦黃注射液原料藥材質量中的應用。
[0037]本發明所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法在評價苦黃注射液半成品質量中的應用。
[0038]本發明將供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜經計算機相似度評價軟件(選用中國藥典委推薦的“中藥指紋圖譜計算機輔助相似度評價軟件2004A版”)計算,獲得指紋圖譜相似度數值,依據相似度數值,應用于苦黃注射液及其原料藥材、半成品的質量控制。指紋圖譜相似度應大于0.90為檢驗質控標準。本發明提供的苦黃注射液及其原料藥材、半成品的指紋圖譜檢測方法用于生產檢驗質量控制,所得產品具有較高的質量穩定性,可確保產品安全有效。
[0039]采用本發明優選方案提供的中藥苦黃注射液指紋圖譜檢測方法共檢測到34個峰,其中保留時間為83.4min±5%,即32號峰為大黃酚葡萄糖化合物,有明顯的吸收峰,可作為標準參照物。
[0040]其中典型的檢測峰的相對保留時間分別為:4.3±5% (I號峰)、6.4±5% (2號峰)、7.9±5% (3 號峰)、9.6±5% (4 號峰)、11.8±5% (5 號峰)、15.9±5% (6 號峰)、18.1±5% (7號峰)、19.6±5% (8 號峰)、21.2±5% (9 號峰)、22.1±5% (10 號峰)、24.6±5% (11 號峰)、26min±5% (12 號峰)、30min±5% (13 號峰)、33.8±5% (14 號峰)、35.9±5% (15 號峰)、37.8±5%(16 號峰)、43.8±5%(17 號峰)、45.9±5%(18 號峰)、47.1±5%(19 號峰),48.4±5%(20 號峰),52.3±5% (21 號峰),54.9±5% (22 號峰)、56min±5% (23 號峰)、56.8±5% (24號峰)、57.5±5% (25 號峰)58.3±5% (26 號峰),59.1±5% (27 號峰)、62.2±5% (28 號峰)、72.1±5% (29 號峰)、75.5±5% (30 號峰)、76.9±5% (31 號峰)、83.4min±5% (32 號峰)、102min±5%(33 號峰)、109min±5% (34 號峰)。
[0041]本發明提供的苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,選擇與苦黃注射液指紋圖譜測定方法相同的檢測條件進行藥材指紋圖譜考察,便于更好的考察藥材指紋圖譜與制劑指紋圖譜的相關性,也有利于比較各藥材產地的差異,為保證苦黃注射液的安全穩定的原料藥材來源提供保證。
[0042]本發明提供的苦黃注射液及其原料藥材、半成品指紋圖譜檢測方法的最佳條件篩選過程:
[0043]1、儀器與試劑
[0044]儀器:ShimadzuLC-1OATvp高效液相色譜儀,配雙泵、脫氣機、自動進樣器、PDA檢測器、柱溫箱;Waters2695高效液相色譜儀,配PDA和熒光檢測器;Agilentll00高效液相色譜儀,配脫氣機、四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、DAD檢測器、ELSD檢測器。
[0045]試劑:乙腈、甲醇為色譜純(MERCK),其余試劑均為分析純,水為Mill1-Q純凈水。
[0046]對照品:苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿、靛玉紅、靛藍、綠原酸、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚(中國藥品生物制品檢定所),6,7-二甲氧基香豆素(沈陽藥科大學提供),槐果堿(寧夏華豐生物制品有限公司)。
[0047]2、流動相種類的篩選
[0048]由于苦黃注射液活性成分復雜,本發明通過大量實驗篩選了甲醇一水,乙腈一水體系等流動相,并且由于苦黃注射液中存在綠原酸、大黃酸等酸性成分,在流動相加入乙酸等有利于峰形改善,故在甲醇一水體系中加入一定量的乙酸,最后通過比較不同流動相的顯示峰的數目,分離度和峰形等,最后優選的流動相為:(I)體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相;(2)體積比為0.5:100的Hac:H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相。
[0049]3、檢測波長的選擇
[0050]由于苦黃注射液中含有蒽醌,黃酮和生物堿類活性化合物,如大黃中的大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚及其葡萄糖苷,茵陳中的綠原酸、2,6—二甲氧基香豆素、茵陳色原酮,柴胡中的柴胡皂苷A,大青葉中的靛藍、靛玉紅等。
[0051]根據Shannon的信息論,某個信號從信息源發出后,接受該信號的一方獲取得到的信息量為
[0052]
【權利要求】
1.中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,包括以下步驟: (1)供試品溶液制備:取苦黃注射液作為供試品溶液; (2)高效液相色譜法測定苦黃注射液的對照指紋圖譜:取10批以上苦黃注射液樣品在適當的色譜條件下進樣,測得各批次苦黃注射液的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為對照指紋圖譜; (3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:將待測苦黃注射液供試品溶液按步驟(2)相同的色譜條件進樣,測得供試品溶液的指紋圖譜; (4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
2.根據權利要求1所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫35~40°C,檢測波長為250~260nm。
3.根據權利要求2所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:以規格為5 μ m,4.6X 250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。
4.根據權利要求3所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的體積比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
5.根據權利要求1所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為0.5:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30~35°C,檢測波長為260~270nm。
6.根據權利要求5所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:以規格為5 μ m,4.6X 250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。
7.根據權利要求6所述的中藥苦黃注射液的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為98:2,20分鐘時流動相A:B的體積比例為84:16, 30分鐘時流動相A:B的體積比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的體積比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
8.中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,包括以下步驟: (1)供試品溶液制備:取苦黃注射液原料藥材,經處理后得到原料藥材的供試品溶液; (2)高效液相色譜法測定原料的對照指紋圖譜:分別取苦黃注射液原料藥材各10批以上,按步驟(1)的處理方法制得供試品溶液,在適當的色譜條件下測得每批原料藥材的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為原料藥材對照指紋圖譜; (3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:取步驟(1)的供試品溶液按步驟(2)相同的色譜條件進樣,測得苦黃注射液原料藥材的供試品溶液的指紋圖譜; (4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
9.根據權利要求8所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(1)所述的原料藥材處理方法為:將藥材粉碎,取藥材粉末4.0g,精密稱定,加水100ml,加熱回流I~2小時,過濾,取續濾液50ml濃縮至約10ml,加乙醇使含醇量達85%,放置過夜,過濾,濾液濃縮并用水定容至10ml。
10.根據權利要求8所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中的色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為1:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1:100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫35~40°C,檢測波長為250~260nm。
11.根據權利要求10所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:以規格為5 μ m,4.6X 250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為1: 100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1: 100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。
12.根據權利要求11所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的體積比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
13.根據權利要求8所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,體積比為0.5:100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc: H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30~35°C,檢測波長為260~270nm。
14.根據權利要求13所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:以規格為5μπι,4.6X250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc:H2O:CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。
15.根據權利要求14所述的中藥苦黃注射液原料藥材的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為98:2,20分鐘時流動相A:B的體積比例為84:16,30分鐘時流動相A:B的體積比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的體積比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
16.根據權利要求8所述的中藥苦黃注射液原料的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,苦黃注射液的原料藥材是指大黃、苦參、茵陳、春柴胡及大青葉藥材。
17.中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,該方法包括以下步驟: (1)供試品溶液制備:取苦黃注射液半成品作為供試品溶液; (2)高效液相色譜法測定苦黃注射液半成品的對照指紋圖譜:取10批以上苦黃注射液半成品在適當的色譜條件下進樣,測得各批次苦黃注射液半成品的指紋圖譜,以這些指紋圖譜為基礎,用相似度軟件計算獲得共有模式作為對照指紋圖譜; (3)高效液相色譜法測定供試品溶液指紋圖譜:將待測苦黃注射液半成品供試品溶液按步驟(2)相同的色譜條件進樣, 測得供試品溶液的指紋圖譜;(4)將步驟(3)得到的供試品溶液指紋圖譜和步驟(2)得到的對照指紋圖譜用相似度軟件評價。
18.根據權利要求17所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中的色譜條件:以規格為5 μ m,4.6X 250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為1: 100的HAc =H2O為流動相A相,體積比為1: 100的HAc =CH3OH為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫40°C,檢測波長為254nm。
19.根據權利要求18所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為85:15,25分鐘時流動相A:B的體積比例為33:67,65分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
20.根據權利要求17所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,步驟(2)中色譜條件為:以規格為5 μ m,4.6 X 250mm的DianmonsilC18為測定用色譜柱,體積比為0.5:100的Hac =H2O為流動相A相,體積比為0.5:20:80的HAc:H2O: CH3CN為流動相B相,線性梯度洗脫,柱溫30°C,檢測波長為262nm。
21.根據權利要求20所述的中藥苦黃注射液半成品的指紋圖譜檢測方法,其特征在于,所述的線性梯度洗脫方式為:0分鐘時流動相A:B的體積比例為98:2,20分鐘時流動相A:B的體積比例為84:16,30分鐘時流動相A:B的體積比例為80:20,90分鐘時流動相A:B的體積比例為40:60,100分鐘時流動相A:B的體積比例為O:100。
【文檔編號】G01N30/02GK103616459SQ201310692364
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月17日 優先權日:2013年12月17日
【發明者】顧治平, 王恒斌, 陳力建 申請人:常熟雷允上制藥有限公司