一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種檢測雞冠提取法制玻璃酸鈉過程中，雞冠酶解液中玻璃酸鈉含量的方法，本發明用紫外可見分光光度計檢測處理后的供試品溶液，通過配制梯度標準溶液、制作標準曲線并建立回歸方程以計算所測雞冠酶解液中玻璃酸鈉的含量，本發明的檢測方法結果準確可靠，步驟簡單，檢測費用低，易于推廣，通過檢測雞冠酶解液中玻璃酸鈉的含量，可調控最佳的酶解條件，從而保證下游成品的品質。
【專利說明】一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種玻璃酸鈉的檢測方法，具體涉及雞冠提取法制玻璃酸鈉過程中的檢測方法，尤其涉及一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法。
【背景技術】
[0002]玻璃酸鈉是一種高分子多糖，用于外科關節病、組織修復、眼科手術、輔助診斷等方面。其生產工藝主要分為兩大類，以動物組織為原料的提取法和細菌發酵法。在雞冠提取法(動物組織)生產玻璃酸鈉的過程中，通過對雞冠酶解液中玻璃酸鈉的測定，可調控最佳的酶解條件，為工藝改進提供更準確的數據支持，從而保證下游成品的品質。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題在于提供一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法，以檢測酶解液中的玻璃酸鈉的含量。
[0004]為了實現本發明的目的，所采用的技術方案如下:
[0005]一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法，該方法包括以下步驟:
[0006](1)制備對照品溶液:取D-葡萄糖醛酸對照品60mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻制得每lml中含D-葡萄糖醛酸60 μ g的對照品溶液；
[0007](2)制備供試品溶液:稱取雞冠酶解液5.2g于50ml離心管中，加入10ml乙醇，放入離心儀中，以轉速4000rmp離心20分鐘后，取出離心管；倒掉離心管中的乙醇上清液，保留離心管中的白色沉淀物；然后加入少量水將離心管中白色沉淀物全部轉移至250ml容量瓶中溶解過夜并在離心管中加入適量水溶解沉淀殘留；次日將離心管中水溶液全部倒入容量瓶中，搖勻，定容至刻度；
[0008](3)制作對照品標準曲線溶液:精密量取對照品溶液0、0、0.2,0.4,0.6,0.8、1.0ml，分別置25ml具塞試管中，依次分別加水至1.0ml，混勻，冰浴中冷卻，并在不斷攪拌下緩緩滴加0.025mol/L硼砂硫酸溶液5.0ml，密塞，沸水浴加熱10分鐘，中間振搖一次，迅速冷卻，加0.125%咔唑的無水乙醇溶液0.2ml，搖勻，沸水浴中加熱15分鐘，中間振搖一次，
冷卻至室溫；0管為空白溶液。
[0009](4)精密量取供試品溶液0.5ml和水0.5ml，置同一 25ml具塞試管中，混勻，冰浴中冷卻，并在不斷攪拌下緩緩滴加0.025mol/L硼砂硫酸溶液5.0ml，密塞，沸水浴加熱10分鐘，中間振搖一次，迅速冷卻，加0.125%咔唑的無水乙醇溶液0.2ml，搖勻，沸水浴中加熱15分鐘，中間振搖一次，冷卻至室溫；
[0010](5)用紫外可見分光光度計對對照品標準曲線溶液和供試品溶液，在530nm波長
下進行測定，由回歸方程計算玻璃酸鈉的濃度，其公式為:
[0011]
【權利要求】
1.一種玻璃酸鈉雞冠提取過程中酶解液的檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:(1)制備對照品溶液:取D-葡萄糖醛酸對照品60mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻制得每lml中含D-葡萄糖醛酸60 μ g的對照品溶液；(2)制備供試品溶液:稱取雞冠酶解液5.2g于50ml離心管中，加入10ml乙醇，放入離心儀中，以轉速4000rmp離心20分鐘后，取出離心管；倒掉離心管中的乙醇上清液，保留離心管中的白色沉淀物；然后加入少量水將離心管中白色沉淀物全部轉移至250ml容量瓶中溶解過夜并在離心管中加入適量水溶解沉淀殘留；次日將離心管中水溶液全部倒入容量瓶中，搖勻，定容至刻度；(3)制作對照品標準曲線溶液:精密量取對照品溶液0、0、0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml，分別置25ml具塞試管中，依次分別加水至1.0ml，混勻，冰浴中冷卻，并在不斷攪拌下緩緩滴加0.025mol/L硼砂硫酸溶液5.0ml，密塞，沸水浴加熱10分鐘，中間振搖一次，迅速冷卻，力口.0.125%咔唑的無水乙醇溶液0.2ml，搖勻，沸水浴中加熱15分鐘，中間振搖一次，冷卻至室溫；0管為空白溶液。(4)精密量取供試品溶液0.5ml和水0.5ml，置同一 25ml具塞試管中，混勻，冰浴中冷卻，并在不斷攪拌下緩緩滴加0.025mol/L硼砂硫酸溶液5.0ml，密塞，沸水浴加熱10分鐘，中間振搖一次，迅速冷卻，加0.125%咔唑的無水乙醇溶液0.2ml，搖勻，沸水浴中加熱15分鐘，中間振搖一次，冷卻至室溫；(5)用紫外可見分光光度計對對照品標準曲線溶液和供試品溶液，在530nm波長下進行測定，由回歸方程計算玻璃酸鈉的濃度，其公式為:含 m (mg / g )=:.....——W,ik x 1000式中m:為供試品管中葡萄糖醛酸的量(yg/ml)；W供:為供試品重量(g)。
【文檔編號】G01N21/31GK103645150SQ201310673738
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月10日 優先權日:2013年12月10日
【發明者】李彤, 王瓊, 薛亮, 吳春宙 申請人:上海景峰制藥股份有限公司