谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素含量的方法
【專利摘要】本發明公開了一種谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素含量的方法。具體為：待測樣品粉碎或者切成小塊后用萃取溶劑萃取得到供試品；供試品和黃曲霉毒素標準樣品分別點加在相同的薄層硅膠板或濾紙上，在紫外燈下比較供試品和黃曲霉毒素標準樣品的熒光顏色和熒光強度，以判斷供試品中黃曲霉毒素的含量和所含的黃曲霉毒素種類。本發明的檢測方法步驟簡單，檢測時間短，也可以適用于大量樣品的同時檢測，且檢測成本低，使用溶劑量極少，環保，產業應用價值高。
【專利說明】谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素含量的方法
【技術領域】
本發明涉及在谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素的方法，屬于食品安全檢驗【技術領域】。
【背景技術】
黃曲霉毒素(Aflatoxin)是真菌毒素的ー種。在結構上，黃曲霉毒素是ー類由氨基酸、莽草酸、以及丙二酰-COA通過特殊途徑而合成的分子量低的小分子化合物。它們可以在真菌菌絲或分泌到周圍的環境中而積累。這些毒素基本上是在農業產品食物中由被黃曲霉菌和寄生曲霉囷污染所廣生的。寄生曲霉囷廣生四種王要的黃曲霉韋素:B1，B2，Gl和G2，而黃曲霉只產生BI和B2兩種黃曲霉毒素。黃曲霉毒素最初是從黃曲霉菌中鑒定分離出來的。B型黃曲霉毒素在紫外光線下顯示藍色(Blue)熒光，而G型黃曲霉毒素在紫外光線下顯示綠色(Green)突光。 黃曲霉毒素是致癌毒素極強的毒素，廣泛存在于花生、玉米，大米、小麥、堅果類等人類常用食品和動物飼料中，嚴重影響人類的身體健康和畜牧生產力。
為了把黃曲霉毒素在食物中的潛在含量降低到最小，許多食品中黃曲霉毒素的最高允許含量現已有明確規定。美國食品藥品管理局(FDA)的法律條文特別規定禁止銷售被黃曲霉毒素污染超標的食品。FDA規定美國洲際貿易食品和飼料允許總量不得高于20ppb。
目前精確定性定量測定黃曲霉毒素的技術和分析方法包括:薄層色譜法、高壓液相色譜法(HPLC)、氣相色譜分析法(GC)。用于快速檢測黃曲霉毒素的方法主要為:在含量精確到每毫升中I毫微克的方法[I]、用血清抗體的原理快速檢測的免疫分析法(RIA)和酶聯免疫吸附測定法(ELISA) [2，3]。另外，對檢查各種各樣農產品中黃曲霉毒素的體外試劑盒已發展成不少于十種。
但是，目前大多數檢驗檢測方法都需要專用儀器和復雜程序[4，5]，檢測時間長，檢測費用聞等缺點。
參考文獻:
[0001]J.Public.Health Manag.Pract.1997，3:61-69.[0002]Arch.Environ.Contam.Toxicol.1989，18:308-314.[0003]Int.J.Food Microbiol.2005，99:185-194.[0004]Crit.Rev.Food Sc1.Nutr.2014，54:64-83.[0005]Crit.Rev.Food Sc1.Nutr.1991，30:403-439.
【發明內容】
本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素含量的方法，該檢測方法不需要特殊的檢測儀器，檢測步驟簡單易行，檢測成本低，檢測時間短。本發明的方法適用于快速檢測各種谷物、食品和動物飼料中的黃曲霉毒素的含量。本發明的目的是由如下的技術方案來實現的。 一種谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素的方法，包括如下步驟:
(1)將待測樣品粉碎或者切成小塊，置于試管中，加入萃取溶劑攪拌或振搖萃取，取萃取液，得供試品；
(2)將步驟(I)的供試品和黃曲霉毒素標準樣品分別點加在相同的薄層硅膠板或濾紙上，其中點加供試品和黃曲霉毒素標準樣品時，均以點加量遞增的順序依次點加；
(3)待步驟(2)的薄層硅膠板或濾紙上的溶劑揮干后，在波長366nm的紫外燈下比較供試品和黃曲霉毒素標準樣品的熒光顏色和熒光強度，確定熒光顔色和熒光強度均為相似的標準樣品點樣斑點B和供試品點樣斑點A，認為斑點B和斑點A中含有的黃曲霉毒素總含量相同；
(4)計算待測樣品中黃曲霉毒素含量yg，計算公式為:待測樣品中加入的萃取溶劑總體積y IX斑點B所含的黃曲霉毒素總量U g/斑點A的供試品點加體積U I。
本發明中，步驟(I)中所述萃取溶劑為三氯甲烷、丙酮、甲醇中的ー種，所述待測樣品與萃取溶劑的質量體積比(g:ml)為1:1-5，優選為1:1-2，萃取時間為5-10min，優選為5min。
在本發明中，所述黃曲霉毒素標準樣品為黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素Gl、黃曲霉毒素G2、混合黃曲霉毒素中的ー種或多種。
在本發明的技術方案中，所述混合黃曲霉毒素為黃曲霉毒素毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2按質量比1:1:1:1混合的混合物。在本發明的技術方案中，所述待測樣品優選為花生、玉米，大米、小麥、棉籽、堅果類、飼料中的ー種。所述待測樣品也可以為其他谷物、各種食品以及動物飼料。
在本發明的技術方案中，所述黃曲霉毒素標準樣品溶于三氯甲烷，濃度為0.1 y g/yl。
在本發明的技術方案中，在步驟(2)中所述供試品和黃曲霉毒素標準樣品點樣直徑在不大于Icm,點樣一次性完成或分多次完成，點加量1-80 ii I。
本發明的有益效果:
(1)本發明的檢測方法步驟簡單，不需要特殊的設備和實驗場所，檢測時間短，每次檢測時間15-20min，也可以大量樣品的同時檢測，便于產業上應用。
(2)本發明的檢測方法，檢測成本低，使用溶劑量極少，環保，產業應用價值高。
(3)本發明的檢測方法，適用于快速檢測各種谷物、食品和動物飼料中的黃曲霉毒素的含量以及可以初步判斷樣品中所含的黃曲霉毒素的種類。
(4)本發明的檢測方法，簡單易學、便于培訓和推廣。
【專利附圖】
【附圖說明】
本發明共有3個附圖。
圖1為本發明實施例1中點加在薄層硅膠板上的供試品和黃曲霉毒素標準樣品在紫外燈下的熒光檢測結果；其中a (上面的一行樣品斑點)為供試品點樣斑點，其中斑點1-7的點樣量依次為l、2、4、8、16、32、64ii I ；b (下面的一行斑點)為黃曲霉毒素標準樣品點樣斑點，其中斑點1-7的點樣量依次為1.25,2.5、5、10、20、40、80iil。
圖2為本發明實施例2中生長在培養基上的寄生曲霉(Yl)和生長在培養基上的黃曲霉菌(Y2)的照片。
圖3為本發明實施例2中點加在薄層硅膠板上的供試品和黃曲霉毒素標準樣品在紫外燈下的熒光檢測結果；其中斑點Y1-1、Y2-1、Y3-1、Y4-1、E-1分別為點加量為I 的Yl供試品、Y2供試品、Y3供試品、Y4供試品和黃曲霉毒素標準樣品；Y1-10、Y2-10、Y3-10、Y4-10、E-1O分別為點加量為10 ill的Yl供試品、Y2供試品、Y3供試品、Y4供試品和黃曲霉毒素標準樣品。
【具體實施方式】
下述非限制性實施例可以使本領域的普通技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。下述實施例中，如無特殊說明，所使用的實驗方法均為常規方法，所用試劑等均可從化學試劑公司購買。
實施例1花生中生長的黃曲霉毒素含量的測定
(1)取發霉花生I粒，稱重，0.45g，將其切成小塊，置于試管中，加入800iU三氯甲烷，攪拌萃取5分鐘，取萃取液，得供試品；
(2)將步驟(1)的供試品和黃曲霉毒素標準樣品分別點加在相同的薄層硅膠板，其中點加供試品和黃曲霉毒素標準樣品時，均以點加量遞增的順序依次點加，供試品和黃曲霉毒素標準樣品的點加量如表1。
表1.供試品和黃曲霉毒素標準樣品在薄層硅膠板上的點樣量
【權利要求】
1.一種谷物和食品中快速檢測黃曲霉毒素含量的方法，包括如下步驟: (1)將待測樣品粉碎或者切成小塊，置于試管中，加入萃取溶劑攪拌或振搖萃取，取萃取液，得供試品； (2)將步驟(I)的供試品和黃曲霉毒素標準樣品分別點加在相同的薄層硅膠板或濾紙上，其中點加供試品和黃曲霉毒素標準樣品時，均以點加量遞增的順序依次點加； (3)待步驟(2)的薄層硅膠板或濾紙上的溶劑揮干后，在波長366nm的紫外燈下比較供試品和黃曲霉毒素標準樣品的熒光顏色和熒光強度，確定熒光顔色和熒光強度均為相似的標準樣品點樣斑點B和供試品點樣斑點A，認為斑點B和斑點A中含有的黃曲霉毒素總含量相同； (4)計算待測樣品中黃曲霉毒素含量yg，計算公式為:待測樣品中加入的萃取溶劑總體積y IX斑點B所含的黃曲霉毒素總量U g/斑點A的供試品點加體積U I。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中所述萃取溶劑為三氯甲烷、丙酮、甲醇中的ー種，所述待測樣品與萃取溶劑的質量體積比(g:ml)為1:1-5，萃取時間為5_10mino
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述黃曲霉毒素標準樣品為黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、混合黃曲霉毒素中的ー種或多種。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述混合黃曲霉毒素標準樣品為黃曲霉毒素毒素B1、黃曲霉毒素毒素B2、黃曲霉毒素毒素Gl、黃曲霉毒素毒素G2按質量比1:1:1:1的混合物。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品為花生、玉米，大米、小麥、棉籽、堅果類、飼料中的ー種。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，黃曲霉毒素標準樣品溶于三氯甲烷，濃度為 0.1 u g/ u I。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中所述供試品和黃曲霉毒素標準樣品的點樣直徑在不大于Icm,點樣一次性完成或分多次完成，點加量1-80 ii I。
【文檔編號】G01N30/90GK103604902SQ201310660329
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年12月6日 優先權日:2013年12月6日
【發明者】張淑金, 孫家琪 申請人:張淑金