一種激活素a促進原始卵泡庫形成的方法
【專利摘要】本發明涉及一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法，操作步驟如下：1）利用體內和體外實驗確定激活素A發揮作用的關鍵時期是出生前12天到出生后7天；2）利用細胞熒光染色和western?blot檢測減數分裂相關蛋白的表達情況，確定激活素A促進雌性生殖細胞第一次減數分裂的進程；3）利用免疫熒光組化的方法統計各組中原始卵泡形成情況，激活素A促進原始卵泡庫的建立。本發明方法原理可靠，操作簡單，激活素A在卵母細胞發生早期起重要作用，它使雌性生殖嵴中保持相對高濃度的視黃酸，視黃酸在雌性生殖細胞中促進了Stra8基因的表達，加速了雌性生殖細胞減數分裂啟動及進程，促進了原始卵泡的形成。
【專利說明】一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法
【技術領域】:
[0001]本發明涉及一種激活素A (Activin A)促進雌性生殖細胞第一次減數分裂進程的方法，從而促進哺乳動物原始卵泡庫的建立，特別是涉及一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法。屬于生殖醫學的生物醫學【技術領域】。
【背景技術】: [0002]隨著全球工業化的急劇發展和環境污染的持續加重，不孕不育夫婦的比例逐漸增加，胎兒出生缺陷發生率居高不下。我國女性不孕不育、卵巢早衰及先天出生缺陷等疾病發生率也呈現逐漸升高的趨勢。研究者對不孕不育和先天出生缺陷的發病原因進行了大量的探索研究后發現，這些卵巢性生殖疾病發生的主要原因之一是卵子發生過程中減數分裂發生或染色體分離異常從而導致原始卵泡庫中卵母細胞的數目降低。然而，最初人們主要關注出生后卵泡的生長、發育與成熟，而對減數分裂啟動以及原始卵泡形成的調控機制還了解很少。另外，原始卵泡形成的數量及其消耗的效率決定了雌性動物的繁殖使用時間的長短。因此，為了盡早地啟動動物繁殖周期、開發最大量的原始卵泡或推遲女性更年期的來臨、治療卵巢功能性不育，研究卵母細胞發生過程中減數分裂啟動、原始卵泡形成和募集顯得非常重要。
[0003]激活素A是TGF-β超家族成員，在哺乳動物卵子發生過程中發揮著重要的作用，在不同時間調節多種細胞中相關基因的表達。近年的研究主要集中在激活素A調節卵泡顆粒細胞增殖，激活素A可刺激卵巢顆粒細胞增生和成熟，用己烯雌酚處理未成熟大鼠顆粒細胞表明，激活素A可增強FSH (促卵泡素)，刺激芳香酶的活性，促進孕酮及抑制素的產生(Eppig et al, 1994)。用激活素A處理卵巢碎片可刺激卵原細胞的增殖(Martins da etal, 2004)等。目前，在激活素A參與調節減數分裂前生殖細胞形成原始卵泡庫方面還未有研究報道。本研究借助胎鼠生殖嵴體外發育模型，深入研究激活素A與雌性生殖細胞原始卵泡庫形成之間的關系，具有很大的實際應用價值。
【發明內容】
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[0004]本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法，使激活素A在體內和體外條件下都可以促進動物原始卵泡庫的形成。
[0005]為了實現上述發明目的，本發明方法利用免疫組織化學、定量PCR及蛋白印跡技術檢測了激活素A的I型和II型受體在12.5dpc、0dpp、7dpp、14dpp和21dpp小鼠卵巢發育過程中的定位和表達變化，結果顯示激活素A的I型和II型受體在12.5dpc到7dpp小鼠卵巢中有明顯的表達峰；再利用12.5dpc雌性胎鼠生殖嵴體外培養，在12.5dpc到7dpp期間持續添加激活素A顯著提高卵母細胞數量、直徑和質量(P〈0.05);在12.5dpc雌性胎鼠生殖嵴體外培養過程中，激活素A可促進卵母細胞第一次減數分裂前期的進程(P〈0.05)，使減數分裂相關基因Stra8、Dazl、Dmcl和Scp3在基因水平表達量顯著升高(P〈0.05)，Stra8、Scp3和Dazl蛋白表達量顯著升高(P〈0.05)。對妊娠第10d的母鼠靜脈注射激活素A,激活素A促進卵原細胞第一次減數分裂前期進程，減數分裂相關基因表達量也顯著升高(P〈0.05)。12.5dpc小鼠卵巢體外培養10天后，激活素A促進生殖細胞Cyst的解聚和原始卵泡形成。
[0006]本發明的一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法，按照如下步驟操作:
[0007]1)利用體內和體外實驗確定激活素A發揮作用的關鍵時期是出生前12天到出生后7天:利用機械法分離12.5dpc的胎鼠卵巢組織在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，培養液A包含88%( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH);培養分為四個階段，每個階段7天，共28天；在每個階段分別設置不添加激活素A組，培養到28天時，收集胎鼠卵巢，并撕成碎小的組織塊，0.25%胰酶，0.2%膠原酶IV，37°C處理lOmin，加入終止液(10%的胎牛血清+90%的DMEM)后洗滌3次后，用口吸管收集裸卵，在磷酸鹽緩沖液(PBS)中反復洗滌，直至收集的樣品中不再含有顆粒細胞；然后統計不同組的卵母細胞數目和直徑大小；發現激活素A從小鼠出生前12天開始到出生后7天都發揮重要作用；為了更準確地了解激活素I型和II型受體在整個卵巢發生過程中的定位和表達模式，分別采用定量PCR和蛋白印跡方法對其轉錄和翻譯水平的表達量進行分析:定量PCR結果表明:在12.5dpc的胎鼠卵巢中可檢測到激活素受體IA、IB、IIA和IIB的表達，且隨著卵母細胞發育，激活素受體IA和IB在7dpp時表達量達到峰值，與出生前卵巢中激活素受體IA和IB的表達量相比，差異極顯著(P〈0.01);而激活素受體IIA和IIB表達量到Odpp時達到峰值，與出生前卵母細胞中的表達量相比，差異極顯著(P < 0.05);檢測7dpp的卵巢發現激活素受體IIA和IIB表達呈現下降的趨勢，但相較其它時期仍處于較高表達水平；卵巢發育到14dpp時，激活素受體IA、IB、IIA和IIB表達水平都降到最低值，與Odpp或7dpp時相比差異顯著(P<0.05);另外，蛋白印跡分析結果顯示，激活素受體IB和IIB在翻譯水平的表達趨勢與轉錄水平基本一致；
[0008]所述胎鼠卵巢組織的分離按照如下步驟操作:胎鼠卵巢來源于12.5dpc的孕鼠，孕鼠的判定以見栓為0.5dpc，利用機械分離法從胎鼠體內分離出卵巢，并轉移到磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.2)+10%胎牛血清(FCS)的操作液中，在操作液中洗3次，并利用手術鑷子去掉與卵巢連接在一起的中腎組織，在新鮮培養液88% α -MEM, 5%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU/ml的促卵泡素(FSH)中將卵巢洗3次；
[0009]2)利用細胞熒光染色和western blot檢測減數分裂相關基因和蛋白的表達情況，確定激活素A促進雌性生殖細胞第一次減數分裂的進程:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:生殖嵴分離出來培養的當天定為0天，分離出的12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，貼壁培養4天，對照組培養液包含88%( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH);激活素A組培養液包含88%( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH)，100ng/ml激活素A ;激活素A加抑制劑組培養液包含88% ( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH)，100ng/ml激活素Α，5μ ΜSB431542 ;妊娠10天的母鼠通過靜脈注射二甲基亞砜(DMS0)、60ng/kg和100ng/kg的激活素A，4天后檢測，通過實時熒光定量PCR、細胞熒光染色和western blot檢測手段，確定激活素A加速第一次減數分裂的進·程；
[0010]3)利用免疫熒光組化的方法統計各組中原始卵泡的形成情況，激活素A促進原始卵泡庫的建立:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:分離出12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液成分同步驟2);每兩天換半液，懸浮培養4天后轉為體外立體培養6天，通過熒光免疫組化檢測發現激活素A促進在體外培養條件下的原始卵泡庫形成；妊娠10天的母鼠通過靜脈注射DMS0、60ng/kg和100ng/kg的激活素A，待出生后3天通過熒光免疫組化檢測原始卵泡庫的形成情況，結果表明，激活素A加速體內原始卵泡庫的建立。
[0011]4)激活素A對雌性生殖細胞第一次減數分裂相關基因和蛋白的影響
[0012]為了進一步確定激活素A對第一次減數分裂的影響，利用RT-qPCR方法檢測減數分裂相關基因Stra8、Dazl、Scp3、Rec8、Spoil和Dmcl的變化，結果發現:激活素A處理組的Stra8表達量極顯著升高(Ρ〈0.01), Dazl、Scp3和Dmcl表達量顯著升高(Ρ〈0.05)。另外，借助免疫細胞化學檢測技術，利用MVH標記生殖細胞后檢測了生殖細胞DAZL和STRA8的陽性率，發現激活素Α顯著增加了表達DAZL和STRA8的生殖細胞比例(P〈0.05)。同時，Western blot結果顯示，添加激活素A后，DAZL、SCP3和STRA8等減數分裂相關蛋白都顯著升高(P〈0.05)。
[0013]綜上所述，本發明方法原理可靠，操作簡單，激活素A在卵母細胞發生的早期起重要作用，它使雌性生殖嵴中保持相對高濃度的視黃酸(RA)，RA在雌性生殖細胞中促進了StraS基因的表達，進而加速了雌性生殖細胞減數分裂啟動及進程，進一步促進了原始卵泡的形成。
【專利附圖】
【附圖說明】: [0014]圖1為激活素A在雌性生殖嵴體外培養過程中的作用時間示意圖。
[0015]圖2為激活素A對雌性生殖細胞第一次減數分裂染色體聯會變化的影響示意圖。
[0016]圖3為激活素A對原始卵泡庫形成的影響示意圖。
【具體實施方式】:
[0017]下面通過具體實施例和附圖對本發明方法做進一步闡述。
[0018]實施例1、
[0019]本發明的激活素A促進原始卵泡庫形成的操作步驟如下:
[0020]1)利用體內和體外實驗確定激活素A發揮作用的關鍵時期是出生前12天到出生后7天:利用機械法分離12.5dpc的胎鼠卵巢組織在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，培養液A包含88%( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH);培養分為四個階段，每個階段7天，共28天；在每個階段分別設置不添加激活素A組，培養到28天時，收集胎鼠卵巢，并撕成碎小的組織塊，0.25%胰酶，0.2%膠原酶IV，37°C處理lOmin，加入終止液(10%的胎牛血清+90%的DMEM)后洗滌3次后，用口吸管收集裸卵，在磷酸鹽緩沖液(PBS)中反復洗滌，直至收集的樣品中不再含有顆粒細胞；然后統計不同組的卵母細胞數目和直徑大小；發現激活素A從小鼠出生前12天開始到出生后7天都發揮重要作用；
[0021]激活素A受體在體內的表達變化:為了更準確地了解激活素I型和II型受體在整個卵巢發生過程中的定位和表達模式，分別采用定量PCR和蛋白印跡方法對其轉錄和翻譯水平的表達量進行分析。定量PCR結果表明:在12.5dpc的卵巢中便可以檢測到激活素受體IA、IB、IIA和IIB的表達，且隨著卵母細胞發育，激活素受體IA (ActRIA)和激活素受體IB (ActRIB)在7dpp時表達量達到峰值，與出生前卵巢中激活素受體激活素受體IA(ActRIA)和激活素受體IB (ActRIB)的表達量相比，差異極顯著(P〈0.01);而激活素受體IIA (ActRIIA)和激活素受體IIB (ActRIIB)表達量到Odpp時達到峰值，與出生前卵母細胞中的表達量相比，差異極顯著(P < 0.05)，之后檢測7dpp的卵巢發現激活素受體IIA(ActRIIA)和激活素受體IIB (ActRIIB)表達呈現下降的趨勢，但相較其它時期仍處于較高表達水平；卵巢發育到14dpp時，激活素受體IA (ActRIA)、激活素受體IB (ActRIB)、激活素受體ΠΑ (ActRIIA)和激活素受體IIB (ActRIIB)表達水平都降到最低值，與Odpp或7dpp時相比差異顯著(P<0.05);另外，蛋白印跡分析結果顯示，激活素受體IB和激活素受體IIB在翻譯水平的表達趨勢與轉錄水平基本一致(圖1A和圖1B)。
[0022]2)利用細胞熒光染色和western blot檢測減數分裂相關基因和蛋白的表達情況，確定激活素A促進雌性生殖細胞第一次減數分裂的進程:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:生殖嵴分離出來培養的當天定為0天，分離出的12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，貼壁培養4天，對照組培養液包含88% ( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH);激活素A組培養液包含88% ( α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH)，100ng/ml激活素A ;激活素A加抑制劑組培養液包含88%(α -MEM), 10%胎牛血清(FCS)，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素(FSH)，100ng/ml激活素Α，5μΜ SB431542 ;妊娠10天的母鼠通過靜脈注射二甲基亞砜(DMS0)、60ng/kg和100ng/kg的激活素A，4天后檢測，通過實時熒光定量PCR、細胞熒光染色和western blot檢測手段，確定激活素A加速第一次減數分裂的進程；
[0023]圖2表示減數分裂相關的蛋白因為激活素A的添加其表達量明顯升高，從而整個減數分裂的進程被加速。(圖2A)是實驗過程中檢測到的各個時期有代表性的卵原細胞聯會復合體圖片。(圖2B)對照組、激活素A組和激活素A+抑制劑組的卵原細胞都可以進入減數分裂但其進程卻有顯著的差異，對照組處于各時期的比例分別細線期56.16±3.2%，偶線期56.16±3.2%,粗線期9±2.75%，雙線期2±6% ;激活素A組各時期的比例分別是細線期 39.9±4.24%，偶線期 40.2±2.48，粗線期 16.95±3.89，雙線期 3.12±4.24%,終變期0.9 ± 3.88%。激活素A+抑制劑組各時期比例分別細線期53.18 ± 8.48%，偶線期36.94±4.95%，粗線期6.85±7.78%,雙線期1.523+1.414%，從這些數據可以看出整個減數分裂進程都被加速了。激活素A組進入減數分裂的陽性細胞數比對照組也顯著提高(28.3 ±3.28%VS16±4.12%, P < 0.05)。
[0024]3)利用免疫熒光組化的方法統計各組中原始卵泡的形成情況，激活素A促進原始卵泡庫的建立:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:分離出12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液成分同步驟2);每兩天換半液，懸浮培養4天后轉為體外立體培養6天，通過熒光免疫組化檢測發現激活素A促進在體外培養條件下的原始卵泡庫形成；妊娠10天的母鼠通過靜脈注射二甲基亞砜(DMS0)、60ng/kg和100ng/kg的激活素A，待出生后3天通過熒光免疫組化檢測原始卵泡庫的形成情況，結果表明，激活素A加速體內原始卵泡庫的建立。[0025]如圖3A所示12.5dpc卵巢體外培養10天后經固定，脫水，包埋后切片做出的熒光免疫組化圖。其中綠色的是MVH抗體的特異著色，紅色為PI染得細胞核。分析統計數據發現激活素A處理組卵母細胞處于生殖細胞簇時期的比例(27.14±4.56%)顯著低于對照組(47.85±7.97%)，卵母細胞處于卵泡時期的比例顯著高于對照組(P〈0.05)(圖3B)。給妊娠10天的母鼠體內注射激活素A，在仔鼠出生后3天檢測對照組卵母細胞處于生殖細胞簇時期的比例為48.14±3.76%，60ng/kg組的比例為34.85 ±2.97%，100ng/kg組的比例是32.66±2.64%，差異極顯著(？〈0.01)。(圖3C)。這說明激活素A可以促進活體卵巢內原始卵泡的形成。
[0026]4)激活素A對雌性生殖細胞第一次減數分裂相關基因和蛋白的影響
[0027]為了進一步確定激活素A對第一次減數分裂的影響，利用RT-qPCR方法檢測減數分裂相關基因Stra8、Dazl、Scp3、Rec8、Spoil和Dmcl的變化，結果發現:激活素A處理組的Stra8表達量極顯著升高(Ρ〈0.01), Dazl、Scp3和Dmcl表達量顯著升高(Ρ〈0.05)。另外，借助免疫細胞化學檢測技術，利用MVH標記生殖細胞后檢測了生殖細胞DAZL和STRA8的陽性率，發現激活素Α顯著增加了表達DAZL和STRA8的生殖細胞比例(P〈0.05)。同時，Western blot結果顯示，添加激活素A后，DAZL、SCP3和STRA8等減數分裂相關蛋白都顯著升高(P〈0.05)。
[0028]相關基因的定量檢測:
[0029]1、RNA 的提取:
[0030]本實驗采用Aidlab試劑公司的RNA提取試劑盒(艾德萊，北京，中國)提取RNA，具體操作如下所述:
[0031](1)輕彈管底使細胞分開，加入350μ1裂解液RL (使用前請加入巰基乙醇，終濃度為1%)，用一次性注射器或超聲波破碎儀將組織打碎，渦旋振蕩或用移液器混勻。
[0032](2)加入1倍體積(350μ 1) 70%乙醇，用移液器立即吹打混勻。
[0033](3)將所有溶液及沉淀全部轉移至吸附柱CR1上，輕柔地蓋上管蓋，12000rpm (~13400 Xg)離心lmin，棄廢液，將吸附柱CR1放回收集管中。
[0034](4)向吸附柱CR1中加入350μ 1去蛋白液RW1，12000rpm (~13400Xg)離心lmin，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1放回收集管中。
[0035](5)向吸附柱的中心滴加50 μ 1 Dnasel,在室溫反應15分鐘。
[0036](6)向吸附柱CR1中加入500μ 1漂洗液鼎，室溫靜置2min，12000rpm(~13400Xg離心lmin，棄廢液，將吸附柱CR1放回收集管中，重復步驟6。
[0037](7)12000rpm (~13400Xg)離心2min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
[0038](8)將吸附柱CR1放入一個新的RNase-free離心管中，向膜中央加入11 μ 1RNase-free ddH20,輕柔地蓋上管蓋，室溫放置 2min。12000rpm (~13400 X g)離心 lmin,所得溶液即為RNA溶液。
[0039](9)測定RNA的濃度，準備進行反轉錄。
[0040]2、RT_PCR
[0041]反應液的配置(反應液在冰上配置):
[0042]
【權利要求】
1.一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法，其特征在于按照如下步驟操作:1)利用體內和體外實驗確定激活素A發揮作用的關鍵時期是出生前12天到出生后7天:利用機械法分離12.5dpc的胎鼠卵巢組織在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，培養液A包含88% α -MEM, 10%胎牛血清，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素；培養分為四個階段，每個階段7天，共28天；在每個階段分別設置不添加激活素A組，培養到28天時，收集胎鼠卵巢，并撕成碎小的組織塊，0.25%胰酶，0.2%膠原酶IV，37°C處理lOmin，加入10%的胎牛血清+90%的DMEM配成的終止液后洗滌3次后，用口吸管收集裸卵，在磷酸鹽緩沖液中反復洗滌，直至收集的樣品中不再含有顆粒細胞；然后統計不同組的卵母細胞數目和直徑大小；發現激活素A從小鼠出生前12天開始到出生后7天都發揮作用；2)利用細胞熒光染色和western blot檢測減數分裂相關基因和蛋白的表達情況，確定激活素A促進雌性生殖細胞第一次減數分裂的進程:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:生殖嵴分離出來培養的當天定為0天，分離出的12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液每兩天換半液，貼壁培養4天，培養液包含88% α -MEM, 10%胎牛血清，1%丙酮酸鈉，1%青鏈霉素，10mIU促卵泡素，100ng/ml激活素A ;通過實時熒光定量PCR、細胞熒光染色和western blot檢測手段，確定激活素A加速第一次減數分裂的進程；3)利用免疫熒光組化的方法統計各組中原始卵泡的形成情況，激活素A促進原始卵泡庫的建立:12.5dpc胎鼠生殖嵴的體外培養按照如下步驟操作:分離出12.5dpc胎鼠生殖嵴，在37°C、5%C02、飽和濕度的培養箱里培養，培養液成分同步驟2);每兩天換半液，懸浮培養4天后轉為體外立體培養6天，通過熒光免疫組化檢測發現激活素A促進在體外培養條件下的原始卵泡庫形成；結果表明，激活素A加速體內原始卵泡庫的建立；4)激活素A對雌性生殖細胞第一次減數分裂相關基因和蛋白的影響:利用RT-qPCR方法檢測減數分裂相關基因Stra8、Dazl、SCp3、Rec8、Spoll和Dmcl的變化，激活素A處理組的Stra8表達量極顯著升高，Dazl、Scp3和Dmcl表達量顯著升高；借助免疫細胞化學檢測技術，利用MVH標記生殖細胞后檢測了生殖細胞DAZL和STRA8的陽性率，發現激活素A顯著增加了表達DAZL和STRA8的生殖細胞比例；同時，Western blot結果顯示，添加激活素A后，DAZL、SCP3和STRA8減數分裂相關蛋白都顯著升高。
2.根據權利要求1所述的一種激活素A促進原始卵泡庫形成的方法，其特征在于:為了更準確地了解激活素I型和II型受體在整個卵巢發生過程中的定位和表達模式，分別采用定量PCR和蛋白印跡方法對其轉錄和翻譯水平的表達量進行分析:定量PCR結果表明:在12.5dpc的胎鼠卵巢中檢測到激活素受體IA、IB、IIA和IIB的表達，且隨著卵母細胞發育，激活素受體IA和IB在7dpp時表達量達到峰值，與出生前卵巢中激活素受體IA和IB的表達量相比差異極顯著；而激活素受體IIA和IIB表達量到Odpp時達到峰值，與出生前卵母細胞中的表達量相比差異顯著；檢測7dpp的卵巢發現激活素受體IIA和IIB表達呈現下降的趨勢，但相較其它時期仍處于較高表達水平；卵巢發育到14dpp時，激活素受體IA、IB、IIA和IIB表達水平都降到最低值，與Odpp或7dpp時相比差異顯著；蛋白印跡分析結果顯示，激活素受體IB和IIB在翻譯水平的表達趨勢與轉錄水平一致。
【文檔編號】G01N33/53GK103667181SQ201310654177
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月6日 優先權日:2013年12月6日
【發明者】梁桂金, 劉京才, 賴方秾, 秦訓思, 程順峰, 沈偉 申請人:青島農業大學