一種食品營養成份的檢測方法和檢測試劑的制作方法
【專利摘要】本發明屬于食品檢測領域，涉及一種食品營養成分的檢測方法和檢測試劑。所述的食品營養成分的測試試劑，由包括以下含量的組分制得：溶劑100mmol/L，內肽酶300~50000U/L，外肽酶2000~80000U/L，枯草桿菌蛋白酶200~1000U/L，氨基酸脫氫酶4000~30000U/L，硫酸銨0.2~0.5mol/L，丙三醇0.2~0.5mol/L。本發明的檢測試劑可存儲時間長，使用方便，可有效檢測真蛋白質的含量，避免了非蛋白質含氮化合物對蛋白質含量測定的干擾，從而避免了凱式定氮法檢測蛋白質含量時引起的結果偏差，測試更加準確。
【專利說明】一種食品營養成份的檢測方法和檢測試劑
【技術領域】
[0001]本發明屬于食品檢測領域，涉及一種食品營養成份的檢測方法和檢測試劑。
【背景技術】
[0002]食品是人們生活的最基本必需品，食品中蛋白質含量的多少，與人們的健康息息相關。食品中蛋白質的含量不僅表示食品的質量的好壞，而且也關系著人體的健康，因此，測定食品中蛋白質的含量不僅是檢驗食品質量的重要舉措，同時也是保證人們身體健康的重要手段。目前，國家食品衛生標準也對部分食品尤其是動物乳和動物乳制品中的蛋白質含量作了明確規定。由于蛋白質測定相對較為困難，而食物中的蛋白質是人體中氮的唯一來源，因此，傳統的方法多采用測定氮的含量間接測定蛋白質的含量。目前，蛋白質的測定多采用凱氏定氮法，該方法也是我國測定蛋白質含量的標準方法，其適用性強，重復性好，但這種方法存在的最大的缺陷就是測得的結果不僅包含了蛋白質，而且還包含了尿素氮及無機胺鹽等含氮的化合物，由此，導致了許多不法分子或企業以非法牟取暴利，如他們把三氯氰胺及尿素等廉價的含氮的化合物添加到食品中，以冒充蛋白質，這樣嚴重危害了人們的健康，尤其是食用乳制品的嬰幼兒，因此，提供一種檢測方便、結果準確的蛋白質檢測方法至關重要。
【發明內容】
[0003]為解決現有技術中存在的上述技術問題，本發明的目的是提供一種食品營養成分的檢測方法和檢測試劑，能夠迅速檢測出食品中的蛋白質含量，排除非蛋白質含氮化合物對檢測結果的干擾。
[0004]本發明的技術方案如下:
一種食品營養成分的測試試劑，由包括以下含量的組分制得:
溶劑 10Ommol /I,
內肽酶 30(T50000U/L 外肽酶2000~80000U/L 枯草桿菌蛋白酶 20(Tl000U/L 氨基酸脫氫酶 400(T30000U/L 硫酸銨 0.2^0.5mol/L 丙三醇0.2~0.5mol/L。
[0005]所述的溶劑選自:2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基_1_丙醇緩沖液、二乙醇胺緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或硼酸-硼砂緩沖液中的一種或一種以上。
[0006]優選的所述的溶劑為2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基_1_丙醇緩沖液、二乙醇胺緩沖液三種緩沖液按摩爾比為1: 1:2的混合物。
[0007]所述的內肽酶為N-內肽酶，所述的外肽酶為C-外肽酶；內肽酶和外肽酶的比例為1U/L:(1.2~3)U/L。[0008]利用上述食品營養成分測試試劑測量食品營養成分的方法，包括以下步驟:
(1)將測試試劑平分為三等份，第一份中加入待測樣品，配制成濃度為3(T50g/L的待測樣品溶液，第二份中加入和第一份樣品中相同質量的純蛋白配制成和第一份相同濃度的第一對比溶液，第三份測試試劑中加入第一份樣品中相同質量的測試試劑作為第二對比溶液；
(2)將步驟(1)中制得的待測樣品溶液、第一對比溶液和第二對比溶液采用同樣的條件邊攪拌邊進行微波分散；
(3)采用吸光度測試儀測試步驟(2)中分散好的三種溶液在540nm下吸光度隨時間的變化，分別測得S待測樣品溶液、8第一對比溶液8第二對比溶液；
(4)待測樣品中的蛋白質含量為(8待測樣品溶液-S第二對比溶液)/( 8第一對比溶液-S第二對比溶液)。
[0009]優選的，所述的步驟(2)中在三種溶液中分別加入相同量的氫氧化鈉，然后進行攪拌，氫氧化鈉的加入量為0.3^0.5g/L的氫氧化鈉。
[0010]所述的步驟(2)中的攪拌條件具體為，先將溶液攪拌f3min，然后邊攪拌邊進行微波分散，繼續攪拌2~5min。
[0011]所述的步驟(3)中的測試溫度為25~30°C。
[0012]步驟(3)中所述的吸光度測試儀為紫外可見分光光度儀或全自動生化分析儀。
[0013]和現有技術相比，本發明的有益效果在于:
1.本發明的檢測試劑可存儲時間長，使用方便，可有效檢測真蛋白質的含量，避免了非蛋白質含氮化合物對蛋白質含量測定的干擾，從而避免了凱式定氮法檢測蛋白質含量時引起的結果偏差，測試更加準確。
[0014]2.在食品蛋白質含量的測定過程中，測試試劑的組分選擇和具體含量非常重要，本發明通過選擇合適的溶劑及與之相匹配的酶，合理調節各組分之間的含量配比，使得本發明中的測試試劑具有較高的活性。其中內肽酶可以將蛋白質分子內部切斷，形成分子量較小的肽，外肽酶從蛋白質分子的游離氨基或羧基的末端逐個將肽鍵水解，而游離出氨基酸；各組分相互作用使得測試樣品能夠滿足吸光度測試儀進行測試的需要。
[0015]3.測試溶液和對比溶液保證各成分的含量相同，使測試更加準確，同時在測試溶液和對比溶液中加入氫氧化鈉使溶液的環境呈堿性，有利于提高測試溶液中各種酶的效率。 [0016]【具體實施方式】:
下面結合實施例對本發明做進一步說明:
實施例1
一種食品營養成分的測試試劑，由包括以下含量的組分制得:
溶劑10Ommol /I,
內肽酶4000U/L 外肽酶6000U/L 枯草桿菌蛋白酶800U/L 氨基酸脫氫酶5000U/L 硫酸銨0.3mol/L 丙三醇0.5mol/L
所述的溶劑為雙甘氨肽緩沖液或硼酸-硼砂緩沖液；
所述的內肽酶為N-內肽酶，所述的外肽酶為C-外肽酶；內肽酶和外肽酶的比例為IU/L:3U/L;
利用上述食品營養成分測試試劑測試食品營養成分的方法，包括以下步驟:
(1)將測試試劑平分為三等份，第一份中加入待測樣品(豆奶)，配制成濃度為50g/L的待測樣品溶液，第二份中加入和第一份樣品中相同質量的純蛋白配制成和第一份相同濃度的第一對比溶液，第三份測試試劑中加入第一份樣品中相同質量的測試試劑作為第二對比溶液；
(2)將步驟(I)中制得的待測樣品溶液、第一對比溶液和第二對比溶液中分別加入0.5g/L的氫氧化鈉，然后采用同樣的條件邊攪拌邊進行微波分散；攪拌過程中先將溶液攪拌3min,然后邊攪拌邊進行微波分散,繼續攪拌5min ；
(3)采用全自動生化分析儀測試步驟(2)中分散好的三種溶液在540nm下吸光度隨時間的變化，分別測得δ待測樣品溶液、δ第一對比溶液δ第二對比溶液；
(4)待測樣品中的蛋白質含量為(δ待測樣品溶液-δ第二對比溶液)/( δ第一對比溶液_ δ第二對比溶液)；
通過測試待測樣品奶粉的蛋白質含量為16.5%。
[0017]實施例2
一種食品營養成分的測試試劑，由包括以下含量的組分制得:
溶劑10Ommol /I,
內肽酶300U/L
外肽酶2000U/L
枯草桿菌蛋白酶 200U/L 氨基酸脫氫酶 4000U/L 硫酸銨0.2mol/L
丙三醇0.2mol/L
所述的溶劑為2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、二乙醇胺緩沖液三種緩沖液按摩爾比為1:1:2的混合物；
所述的內肽酶為N-內肽酶，所述的外肽酶為C-外肽酶；內肽酶和外肽酶的比例為IU/L:1.2U/L;
利用上述食品營養成分測試試劑測試食品營養成分的方法，包括以下步驟:
(1)將測試試劑平分為三等份，第一份中加入待測樣品(嬰兒奶粉)，配制成濃度為30g/L的待測樣品溶液，第二份中加入和第一份樣品中相同質量的純蛋白配制成和第一份相同濃度的第一對比溶液，第三份測試試劑中加入第一份樣品中相同質量的測試試劑作為第二對比溶液；
(2)將步驟(I)中制得的待測樣品溶液、第一對比溶液和第二對比溶液中分別加入0.3g/L的氫氧化鈉，然后采用同樣的條件邊攪拌邊進行微波分散；攪拌過程中先將溶液攪拌Imin,然后邊攪拌邊進行微波分散,繼續攪拌2min ；
(3)采用紫外可見分光光度儀測試步驟(2)中分散好的三種溶液在540nm下吸光度隨時間的變化，分別測得5待測樣品溶液、δ第一對比溶液δ第二對比溶液；
(4)待測樣品中的蛋白質含量為(δ待測樣品溶液-δ第二對比溶液)/ ( δ第一對比溶液_ δ第二對比溶液)；
通過測試待測樣品奶粉的蛋白質含量為18.2%。
[0018]實施例3
一種食品營養成分的測試試劑，由包括以下含量的組分制得:
溶劑10Ommol /I,
內肽酶50000U/L
外肽酶80000U/L
枯草桿菌蛋白酶 1000U/L 氨基酸脫氫酶 30000U/L 硫酸銨0.5mol/L
丙三醇0.5mol/L
所述的溶劑為2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液；
所述的內肽酶為N-內肽酶，所述的外肽酶為C-外肽酶；內肽酶和外肽酶的比例為IU/L:3U/L;
利用上述食品營養成分測試試劑測試食品營養成分的方法，包括以下步驟:
(1)將測試試劑平分為三等份，第一份中加入待測樣品(豆奶)，配制成濃度為50g/L的待測樣品溶液，第二份中加入和第一份樣品中相同質量的純蛋白配制成和第一份相同濃度的第一對比溶液，第三份測試試劑中加入第一份樣品中相同質量的測試試劑作為第二對比溶液；
(2)將步驟(I)中制得的待測樣品溶液、第一對比溶液和第二對比溶液中分別加入
0.5g/L的氫氧化鈉，然后采用同樣的條件邊攪拌邊進行微波分散；攪拌過程中先將溶液攪拌3min,然后邊攪拌邊進行微波分散,繼續攪拌5min ；
(3)采用全自動生化分析儀測試步驟(2)中分散好的三種溶液在540nm下吸光度隨時間的變化，分別測得δ待測樣品溶液、δ第一對比溶液δ第二對比溶液；
(4)待測樣品中的蛋白質含量為(δ待測樣品溶液-δ第二對比溶液)/( δ第一對比溶液_ δ第二對比溶液)；
通過測試待測樣品奶粉的蛋白質含量為16.5%。
[0019]上述實施例僅為本發明的優選實施方式，并不應理解為對本發明的限定，本領域技術人員根據本發明的揭示，不脫離本發明范疇所做出的改進和修改都應該在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種食品營養成分的測試試劑，其特征在于，由包括以下含量的組分制得: 溶劑10Ommol /I, 內肽酶30(T50000U/L 外肽酶200(T80000U/L 枯草桿菌蛋白酶 20(Tl000U/L 氨基酸脫氫酶 400(T30000U/L 硫酸銨0.2^0.5mol/L 丙三醇0.2~0.5mol/L。
2.根據權利要求1所述的一種食品營養成分的測試試劑，其特征在于，所述的溶劑選自2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、二乙醇胺緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或硼酸-硼砂緩沖液中的一種或一種以上。
3.根據權利要求2所述的一種食品營養成分的測試試劑，其特征在于，優選的所述的溶劑為2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、二乙醇胺緩沖液三種緩沖液按摩爾比為1: 1:2的混合物。
4.根據權利要求2所述的一種食品營養成分的測試試劑，其特征在于，所述的內肽酶為N-內肽酶，所述的外肽酶為C-外肽酶。
5.根據權利要求4所述的一種食品營養成分的測試試劑，其特征在于，所述的內肽酶和外肽酶的比例為1U/L:(1.2~3) U/L。
6.采用權利要求f5中任一所述的食品營養成分的測試試劑測量食品營養成分的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將測試試劑平分為三等份，第一份中加入待測樣品，配制成濃度為3(T50g/L的待測樣品溶液，第二份中加入和第一份樣品中相同質量的純蛋白配制成和第一份相同濃度的第一對比溶液，第三份測試試劑中加入第一份樣品中相同質量的測試試劑作為第二對比溶液； (2)將步驟(1)中制得的待測樣品溶液、第一對比溶液和第二對比溶液采用同樣的條件邊攪拌邊進行微波分散； (3)采用吸光度測試儀測試步驟(2)中分散好的三種溶液在540nm下吸光度隨時間的變化，分別測得δ待測樣品溶液、δ第一對比溶液δ第二對比溶液； (4)待測樣品中的蛋白質含量為(δ待測樣品溶液-δ第二對比溶液)/( δ第一對比溶液_ δ第二對比溶液)。
7.根據權利要求6所述的一種測量食品營養成分的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中在三種溶液中分別加入相同量的氫氧化鈉，然后進行攪拌，氫氧化鈉的加入量為0.3^0.5g/L的氫氧化鈉。
8.根據權利要求6所述的一種測量食品營養成分的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中的攪拌條件具體為，先將溶液攪拌f3min，然后邊攪拌邊進行微波分散，繼續攪拌2~5min。
9.根據權利要求6所述的一種測量食品營養成分的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中的測試溫度為25~30°C。
10.根據權利要求6所述的一種測量食品營養成分的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的吸光度測試儀為紫外 可見分光光度儀或全自動生化分析儀。
【文檔編號】G01N1/28GK103645148SQ201310616197
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月28日 優先權日:2013年11月28日
【發明者】郭狄 申請人:中山鼎晟生物科技有限公司