腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法
【專利摘要】本發明提供了一種腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法，是以甲醇冰醋酸或甲醇三氟醋酸溶液提取制劑中丹參素鈉制成供試品溶液，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以甲醇∶0.01～0.2%三氟醋酸水溶液＝5∶95～20∶80為流動相進行高效液相色譜分析，280nm波長處檢測丹參素鈉色譜峰，外標法計算丹參素含量。本發明建立的丹參素測定方法專屬性強，線性關系好，準確度高，重復性好，測定時間短，作為腦震寧制劑的質量控制指標，可有效控制腦震寧制劑產品質量，更科學地評價丹參素鈉的轉移率。
【專利說明】腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及丹參素的含量測定方法，特別是涉及一種用于測定腦震寧制劑中丹參素含量的方法。
【背景技術】
[0002]腦震寧制劑是依據ZL93100741公開的處方制成的顆粒劑、膠囊、片劑、軟膠囊、口服液等各種適宜的劑型，用于預防和治療腦外傷綜合征。
[0003]腦震寧顆粒收錄于《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑(第十七冊)》第230頁(標準號:WS3-B-3312-98)，其處方為:當歸200g、地黃200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龍150g、丹參375g、茯苓250g、陳皮250g、竹茹250g、酸棗仁(炒)250g、柏子仁250g ；制法為:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度1.35~1.38 (550C )的清膏，加入適量蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成1000g。功能涼血活血，化瘀通絡，益血安神，寧心定智，除煩止嘔。用于治療腦外傷引起的頭痛，頭暈，煩躁失眠，健忘驚悸，惡心嘔吐。
[0004]根據上述腦震寧顆粒改進而成的腦震寧無糖顆粒，標準YBZ27112005，其處方為:當歸333.4g、地黃333.4g、牡丹皮250g、川芎250g、地龍250g、丹參625g、茯苓416.7g、陳皮416.7g、竹茹416.7g、酸棗仁(炒)416.7g、柏子仁416.7g ;功能、主治與WS3-B_3312_98相同，只是制法略有區分，具體為:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并·，濃縮至相對密度1.35~1.38 (55°C)的清膏，以糊精為輔料，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成lOOOg，即得。
[0005]目前，包括腦震寧顆粒及無糖顆粒的標準中均只有定性鑒別試驗，沒有涉及任何有效成分含量的定量測定。丹參是腦震寧制劑的主要藥味之一，丹參素是丹參的主要成分之一，且性質穩定，以丹參素為指標成分，以丹參素含量作為腦震寧制劑的一個質量控制指標，來控制腦震寧制劑中主要藥味丹參的含量，是一種行之有效的定量控制方法。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種簡便、靈敏、快速、準確的腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法，以有效地控制腦震寧制劑中的丹參含量。
[0007]本發明腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法包括以下步驟:
1)對照品溶液的制備:取丹參素鈉對照品，精密稱定，以溶媒A制成每ImL含2~5(^g丹參素鈉的對照品溶液；
2)供試品溶液的制備:取腦震寧制劑樣品，精密稱定，加入溶媒A，稱定重量，加熱回流或超聲處理，放冷，再稱定重量，以溶媒A補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，配制成與對照品溶液丹參素鈉濃度相適應的供試品溶液；3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.01~0.2%三氟醋酸水溶液=5: 95~20: 80 ;柱溫:5~45°C ;檢測波長:280nm ；
4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積，以外標法計算腦震寧制劑樣品中的丹參素含量；
進一步地，腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法包括以下步驟:
1)對照品溶液的制備:取丹參素鈉對照品，精密稱定，以溶媒A制成每ImL含5~2(^g丹參素鈉的對照品溶液； 2)供試品溶液的制備:取腦震寧制劑樣品，精密稱定，加入溶媒A，稱定重量，以功率50~500W、頻率25~80kHz的超聲波處理I~5次，每次10~90分鐘，放冷，再稱定重量，以溶媒A補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，配制成與對照品溶液丹參素鈉濃度相適應的供試品溶液；
3)采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.03~0.13%三氟醋酸水溶液=5: 95~20: 80 ;柱溫:10~40°C ;檢測波長:280nm ;流速:0.5~1.5mL/分鐘；
4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各2~25μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積，以外標法計算腦震寧制劑樣品中的丹參素含量。
[0008]本發明上述測定方法中，所述的溶媒A可以是甲醇冰醋酸溶液或甲醇三氟醋酸溶液。其中，所述的甲醇冰醋酸溶液是甲醇與0.1~1%冰醋酸水溶液按照5: 95~20: 80的體積比配制成的甲醇冰醋酸溶液，優選地，是甲醇與0.5%冰醋酸水溶液按照10: 90的體積比配制成的甲醇冰醋酸溶液。所述的甲醇三氟醋酸溶液是甲醇與0.01~0.15%三氟醋酸水溶液按照5: 95~20: 80的體積比配制成的甲醇三氟醋酸溶液，優選地，是甲醇與0.1%三氟醋酸水溶液按照10: 90的體積比配制成的甲醇三氟醋酸溶液。
[0009]更進一步地，本發明所述色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;柱溫:20~30°C;檢測波長:280nm ;流速:lmL/分鐘。
[0010]一般地，液相色譜進樣量為10 μ L或20 μ L。
[0011]本發明中所述的濃度，除另有說明外，均為體積百分濃度。
[0012]本發明中所述的腦震寧制劑是指腦震寧顆粒、腦震寧無糖顆粒、腦震寧片、腦震寧分散片、腦震寧膠囊、腦震寧軟膠囊、腦震寧口服液、腦震寧糖漿、腦震寧丸等任何藥劑學中所述的劑型。
[0013]中藥標準現代化是中醫藥現代化的重要組成部分，選擇中成藥的主要藥味中具有標志性的化學成分為指標成分，測定其含量，是化學法測定中成藥含量的主要手段。
[0014]本發明選擇腦震寧制劑中的主要藥味丹參所含丹參素鈉為指標成分，通過采用高效液相色譜法測定腦震寧制劑中的丹參素含量來作為腦震寧制劑的質量控制指標，所建立的測定方法專屬性強，線性關系好，準確度高，重復性好，測定時間短。優點是簡便、快速、準確，可以更科學地評價丹參素鈉的轉移率，有效地提高產品的質量。
【專利附圖】
【附圖說明】[0015]圖1是對照品溶液中的丹參素鈉高效液相色譜圖。
[0016]圖2是腦震寧制劑中的丹參素鈉高效液相色譜圖。
[0017]圖3是陰性對照品溶液的高效液相色譜圖。
[0018]圖4是丹參素鈉的線性圖。
【具體實施方式】
[0019]實施例1
腦震寧顆粒(依據衛生部藥品標準WS3-B-3312-98制成的顆粒劑)中的丹參素含量測定。
[0020]處方:當歸200g、地黃200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龍150g、丹參375g、茯苓250g、陳皮250g、竹茹250g、酸棗仁(炒)250g、柏子仁250g。
[0021]制法:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度1.35?1.38 (550C )的清膏，加入適量蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成lOOOg。
[0022]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5μπι，4.6mmX 200mm);流動相:甲醇一0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90);流速:1.0mL/min ;波長:280nm ;柱溫:25°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于1500。
[0023]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg)丹參素。
[0024]3)供試品溶液的制備:取腦震寧顆粒，研細，混勻，取0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)25mL，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0025]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0026]5)以外標法計算腦震寧顆粒樣品中的丹參素含量。
[0027]分別測定3批腦震寧顆粒樣品，每袋中含丹參素分別為3.56,4.32,4.10mg。
[0028]實施例2
腦震寧無糖顆粒(依據衛生部藥品標準YBZ27112005制成的無糖顆粒)中的丹參素含量測定。
[0029]處方:當歸333.4g、地黃333.4g、牡丹皮250g、川芎250g、地龍250g、丹參625g、茯苓 416.7g、陳皮 416.7g、竹茹 416.7g、酸棗仁(炒)416.7g、柏子仁 416.7g。
[0030]制法:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度1.35?1.38 (550C )的清膏，以糊精為輔料，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成lOOOg，即得。
[0031]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5μπι，4.6mmX 250mm);流動相:甲醇一0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90);流速:0.5mL/min ;波長:280nm ;柱溫:30°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。 [0032]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置IOOmL量瓶中，加甲醇一0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0033]3)供試品溶液的制備:取腦震寧無糖顆粒，研細，混勻，取0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90)60mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.1%三氟醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0034]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0035]5)以外標法計算腦震寧無糖顆粒樣品中的丹參素含量。
[0036]分別測定3批腦震寧無糖顆粒樣品，每袋中含丹參素分別為3.26,3.32,3.10mg。
[0037]實施例3
腦震寧片(依據ZL93100741及衛生部藥品標準WS3-B-3312_98制成的片劑)中的丹參
素含量測定。
[0038]處方:當歸lOOOg、地黃lOOOg、牡丹皮750g、川芎750g、地龍750g、丹參1875g、茯苓1250g、陳皮1250g、竹茹1250g、酸棗仁(炒)1250g、柏子仁1250g。
[0039]制法:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至適量的清膏，加入乙醇使含醇量為60%，混勻，靜置使沉淀，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成稠膏，加入輔料適量，混勻，制顆粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，壓制成1000片，即得。
[0040]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(10μπι，4.6mmX 200mm);流動相:甲醇一0.05%三氟醋酸水溶液(5: 95);流速:1.5mL/min ;波長:280nm ;柱溫:35°C ;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0041]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇一 0.1%冰醋酸水溶液(5: 95)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.1%冰醋酸水溶液(5: 95)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0042]3)供試品溶液的制備:取腦震寧片，研細，混勻，取lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.1%冰醋酸水溶液(5: 95)101^，稱定重量，超聲處理(功率501，頻率80kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.1%冰醋酸水溶液(5: 95)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。[0043]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μ L注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0044]5)以外標法計算腦震寧片樣品中的丹參素含量。
[0045]分別測定3批腦震寧片樣品，每片中含丹參素分別為1.10、1.04、1.12mg。
[0046]實施例4
腦震寧膠囊(依據ZL93100741及衛生部藥品標準YBZ27112005制成的膠囊)中的丹參
素含量測定。
[0047]處方:當歸lOOOg、地黃lOOOg、牡丹皮750g、川芎750g、地龍750g、丹參1875g、茯苓1250g、陳皮1250g、竹茹1250g、酸棗仁(炒)1250g、柏子仁1250g。
[0048]制法:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至適量的清膏，加入乙醇使含醇量為60%，混勻，靜置使沉淀，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成稠膏，加入輔料適量，混勻，制顆粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。
[0049]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 250mm);流動相:甲醇:0.15%三氟醋酸水溶液=15: 85 ;流速:0.6mL/min ;波長:280nm ;柱溫:40°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0050]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇一1%冰醋酸水溶液(20: 80)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 1%冰醋酸水溶液(20: 80)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0051]3)供試品溶液的制備:取腦震寧膠囊內容物，研細，混勻，取1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 1%冰醋酸水溶液(20: 80) 25mL，稱定重量，超聲處理(功率50W,頻率25kHz) 3次，每次lOmin，放冷，再稱定重量，用甲醇一 1%冰醋酸水溶液(20: 80)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0052]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μ L注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0053]5)以外標法計算腦震寧膠囊樣品中的丹參素含量。
[0054]分別測定3批腦震寧膠囊樣品，每粒中含丹參素分別為0.82,0.83,0.86mg。
[0055]實施例5
腦震寧軟膠囊(依據ZL93100741及衛生部藥品標準YBZ27112005制成的軟膠囊)中的
丹參素含量測定。
[0056]處方:當歸1000g、地黃1000g、牡丹皮750g、川芎750g、地龍750g、丹參1875g、茯苓1250g、陳皮1250g、竹茹1250g、酸棗仁(炒)1250g、柏子仁1250g。
[0057]制法:以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，慮過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至適量的清膏，加入乙醇使含醇量為60%，混勻，靜置使沉淀，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成稠膏，減壓干燥，粉碎成細粉，加入上述揮發油及精制大豆油，混勻，制成軟膠囊1000粒，即得。
[0058]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 250mm);流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;流速:lmL/min ;波長:280nm ;柱溫:45°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0059]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇一 0.05%三氟醋酸水溶液(10: 90)至刻度，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.05%三氟醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0060]3)供試品溶液的制備:取腦震寧軟膠囊內容物2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.05%三氟醋酸水溶液(10: 90)25mL，稱定重量，超聲處理(功率50W，頻率25kHz) 80分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.05%三氟醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mfli微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0061]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μ L注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0062]5)以外標法計算腦震寧軟膠囊樣品中的丹參素含量。
[0063]分別測定3批腦震寧軟膠囊樣品，每粒中含丹參素分別為0.98,0.96、1.0lmgo
[0064]實施例6
腦震寧顆粒(依據衛生部藥品標準WS3-B-3312-98制成的顆粒劑)中的丹參素含量測定。
[0065]處方及制法同實施例1。
[0066]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 200mm);流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;流速:1.0mL/min ;波長:280nm ;柱溫:20°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0067]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇一 0.15%三氟醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一0.15%三氟醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0068]3)供試品溶液的制備:取腦震寧顆粒，研細，混勻，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.15%三氟醋酸水溶液(10: 90) 25mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.15%三氟醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0069]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0070]5)以外標法計算腦震寧顆粒樣品中的丹參素含量。
[0071]分別測定3批腦震寧顆粒樣品，每袋中含丹參素分別為4.06,4.30,4.2Imgo
[0072]實施例7
腦震寧片(依據ZL93100741及衛生部藥品標準WS3-B-3312_98制成的片劑)中的丹參素含量測定。
[0073]處方及制法同實施例3。
[0074]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 200mm);流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;流速:1.0mL/min ;波長:280nm ;柱溫:25°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0075]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0076]3)供試品溶液的制備:取腦震寧片，研細，混勻，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)25mL，稱定重量，超聲處理(功率150W，頻率50kHz) I小時，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mfli微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0077]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μ L注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0078]5)以外標法計算腦震寧片樣品中的丹參素含量。
[0079]分別測定3批腦震寧片樣品，每片中含丹參素分別為1.16、1.06、1.02mg。
[0080]實施例8
腦震寧片(依據ZL93100741及衛生部藥品標準WS3-B-3312_98制成的片劑)中的丹參
素含量測定。
[0081]處方及制法同實施例3。
[0082]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 250mm);流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;流速:0.8mL/min ;波長:280nm ;柱溫:40°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0083]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置IOOmL量瓶中，加甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0084]3)供試品溶液的制備:取腦震寧片，研細，混勻，取2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)35mL，稱定重量，超聲處理(功率150W，頻率33kHz) 60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0085]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μ L注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0086]5)以外標法計算腦震寧片中的丹參素含量。
[0087]分別測定3批腦震寧片樣品，每片中含丹參素分別為1.04、1.12、1.08mg。
[0088]實施例9 腦震寧無糖顆粒(依據衛生部藥品標準YBZ27112005制成的無糖顆粒)中的丹參素含量測定。
[0089]處方及制法同實施例2。
[0090]I)色譜條件與系統適用性試驗:
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(5 μ m，4.6mmX 200mm);流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;流速:lmL/min ;波長:280nm ;柱溫:30°C;理論塔板數按丹參素鈉峰計算，應不低于2000。
[0091]2)對照品溶液的制備:取在110°C干燥至恒重的丹參素鈉對照品12.5mg,精密稱定，置IOOmL量瓶中，加甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)至刻度，搖勻，精密量取lmL，至25mL量瓶中，加甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，即得(Img丹參素鈉相當于0.89mg丹參素)。
[0092]3)供試品溶液的制備:取腦震寧無糖顆粒，研細，混勻，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90) 50mL，稱定重量，超聲處理(功率50W，頻率25kHz) 90分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇一 0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)補足減失的重量，用0.45Mffl微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
[0093]4)精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積。
[0094]5)以外標法計算腦震寧無糖顆粒樣品中的丹參素含量。
[0095]分別測定3批腦震寧無糖顆粒樣品，每袋中含丹參素分別為3.36,3.22,3.16mg。
[0096]實施例10
專屬性考察按照腦震寧制劑的處方比例及工藝，制備不含丹參藥材的陰性樣品，再按照供試品溶液的制備方法制備不含丹參的陰性對照溶液。分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μ L注入液相色譜儀，得到圖1?圖3的液相色譜圖。
[0097]由圖1和圖2可以看出，供試品溶液的高效液相色譜圖中，在與對照品溶液高效液相色譜圖的相應位置處有一個相同的丹參素鈉色譜峰；而從圖3可以看出，陰性對照溶液的高效液相色譜圖中，在此相應位置上無干擾色譜峰。說明本發明提供的測定方法具有專屬性。
[0098]實施例11
線性關系考察精密稱取丹參素鈉對照品，制成0.216mg/mL的溶液。分別精密量取對照品溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0mL置25ml容量瓶中，用甲醇一0.5%冰醋酸水溶液(10: 90)稀釋至刻度，搖勻，液相色譜測定峰面積。以丹參素鈉峰面積為縱坐標，進樣量(Kg)為橫坐標繪制標準曲線(圖4)，計算得到丹參素鈉回歸方程為Y=734.03Χ-7.1915，r=0.9998。表明丹參素鈉在0.0864?1.2096 μ g范圍內，峰面積與進樣量線性關系良好。
[0099]實施例12
精密度試驗精密吸取上述第4份丹參素鈉對照品溶液，連續進樣5次，測定峰面積，計算RSD，結果見表I。對照品溶液RSD為0.740%,結果表明方法精密度良好。
【權利要求】
1.腦震寧制劑中的丹參素含量測定方法，包括以下步驟: 1)對照品溶液的制備:取丹參素鈉對照品，精密稱定，以溶媒A制成每ImL含2~5(^g丹參素鈉的對照品溶液； 2)供試品溶液的制備:取腦震寧制劑樣品，精密稱定，加入溶媒A，稱定重量，加熱回流或超聲處理，放冷，再稱定重量，以溶媒A補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，配制成與對照品溶液丹參素鈉濃度相適應的供試品溶液； 3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.01~0.2%三氟醋酸水溶液=5: 95~20: 80 ;柱溫:5~45°C ;檢測波長:280nm ； 4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積，以外標法計算腦震寧制劑樣品中的丹參素含量； 其中，所述的溶媒A為甲醇冰醋酸溶液或甲醇三氟醋酸溶液。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征是包括以下步驟: 1)對照品溶液的制備:取丹參素鈉對照品，精密稱定，以溶媒A制成每ImL含5~2(^g丹參素鈉的對照品溶液； 2)供試品溶液的制備:取腦震寧制劑樣品，精密稱定，加入溶媒A，稱定重量，以功率50~500W、頻率25~80kHz的超聲波處理I~5次，每次10~90分鐘，放冷，再稱定重量，以溶媒A補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，配制成與對照品溶液丹參素鈉濃度相適應的供試品溶液； 3)采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.03~0.13%三氟醋酸水溶液=5: 95~20: 80 ;柱溫:10~40°C ;檢測波長:280nm ;流速:0.5~1.5mL/分鐘； 4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各2~25μ L，注入液相色譜儀，測定丹參素鈉色譜峰的峰面積，以外標法計算腦震寧制劑樣品中的丹參素含量； 其中，所述的溶媒A為甲醇冰醋酸溶液或甲醇三氟醋酸溶液。
3.根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征是所述的甲醇冰醋酸溶液是甲醇與0.1~1%冰醋酸水溶液按照5: 95~20: 80的體積比配制成的甲醇冰醋酸溶液。
4.根據權利要求3所述的測定方法，其特征是所述的甲醇冰醋酸溶液是甲醇與0.5%冰醋酸水溶液按照10: 90的體積比配制成的甲醇冰醋酸溶液。
5.根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征是所述的甲醇三氟醋酸溶液是甲醇與0.01~0.15%三氟醋酸水溶液按照5: 95~20: 80的體積比配制成的甲醇三氟醋酸溶液。
6.根據權利要求5所述的測定方法，其特征是所述的甲醇三氟醋酸溶液是甲醇與0.1%三氟醋酸水溶液按照10: 90的體積比配制成的甲醇三氟醋酸溶液。
7.根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征是所述色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相:甲醇:0.1%三氟醋酸水溶液=10: 90 ;柱溫:20~30°C ;檢測波長:280nm ;流速:lmL/分鐘。
【文檔編號】G01N30/02GK103592392SQ201310599038
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月25日 優先權日:2013年11月25日
【發明者】姚娟娟, 吳月俠, 朱平, 李安平, 秦正國, 南瑩 申請人:山西振東安特生物制藥有限公司