醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定rna的四種堿基的方法
【專利摘要】本發明公開了一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，包括以下步驟：RNA的堿水解、準備與點樣、電泳。采用本發明提供的醋酸纖維素薄膜電泳法，可簡單，快速，有效的分離測定RNA的四種堿基。
【專利說明】醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，尤其涉及一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法。
【背景技術】
[0002]核糖核酸(縮寫為RNA，即Ribonucleic Acid)，存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。由至少幾十個核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接而成的一類核酸，因含核糖而得名，簡稱RNA。RNA普遍存在于動物、植物、微生物及某些病毒和噬菌體內。RNA和蛋白質生物合成有密切的關系。在RNA病毒和噬菌體內，RNA是遺傳信息的載體。
[0003]RNA由核糖核苷酸經磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種，即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U(尿嘧啶)取代了 DNA中的核糖核酸。
[0004]T胸腺嘧啶而成為RNA的特征堿基。與DNA不同，RNA 一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結構，但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。RNA的 堿基配對規則基本和DNA相同，不過除了 A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。在細胞中根據結構功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA (轉運RNA)，rRNA (核糖體RNA)，mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質的模板，內容按照細胞核中的DNA所轉錄；tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉運者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質合成的工作場所。
[0005]在病毒方面，很多病毒只以RNA作為其唯一的遺傳信息載體(有別于細胞生物普遍用雙鏈DNA作載體)。1982年以來，研究表明，不少RNA，如1、11型內含子，RNase P, HDV,核糖體大亞基RNA等等有催化生化反應過程的活性，即具有酶的活性，這類RNA被稱為核酶(ribozyme)。20世紀90年代以來，又發現了 RNAi (RNA interference, RNA干擾)等等現象，證明RNA在基因表達調控中起到重要作用。
[0006]在RNA病毒中，RNA是遺傳物質，植物病毒總是含RNA。近些年在植物中陸續發現一些比病毒還小得多的浸染性致病因子，叫做類病毒。類病毒是不含蛋白質的閉環單鏈RNA分子,此外,真核細胞中還有兩類RNA，即不均一核RNA (hnRNA)和小核RNA (snRNA)。hnRNA是mRNA的前體；snRNA參與hnRNA的剪接(一種加工過程)。自1965年酵母丙氨酸tRNA的堿基序列確定以后，RNA序列測定方法不斷得到改進。除多種tRNA、5SrRNA、5.8SrRNA等較小的RNA外，尚有一些病毒RNA、mRNA及較大RNA的一級結構測定已完成，如噬菌體MS2RNA含3569個核苷酸。
【發明內容】
[0007]本發明的目的是提供了一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，以解決現有技術中的問題。
[0008]為實現上述目的，本發明采用以下技術方案: 一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征包括以下步驟:
A、RNA的堿水解；
B、準備與點樣；
C、電泳。
[0009]所述RNA的堿水解，稱取0.20gRNA,溶于5ml 0.3mol/L KOH溶液中，使RNA的濃度達到20?30mg/ml。沸水浴加熱30min。將水解液轉入到錐形瓶中。冰浴，在冰浴過程中用高錳酸溶液滴定到水解液的PH值為3.5，在2500rpm離心lOmin。出去沉淀，上層液即是樣品。
[0010]所述準備與點樣，
①將薄膜切成2.5cmX8cm的小片。在薄膜無光澤面得一端約2cm處用鉛筆劃一樣線。
[0011]②將薄膜無光澤面向下，置于PH3.5,0.02mol/L的檸檬酸緩沖液中濕潤。
[0012]③將充分濕透的膜條取出，用濾紙吸取多余的緩沖液，把膜條置于潔凈的玻璃板上，無光澤面朝上，用蓋玻片在劃線處點樣。
[0013]所述電泳，將點樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時，無光澤面向下，點樣端置于負極，槽架上以雙層濾紙做橋墊，濾紙的一端與槽架的前沿對齊，另一端與電極的緩沖液中，并使濾紙全部濕潤后驅除氣泡。膜條與濾紙需貼緊，保持平衡5min后通電，電壓為160V,電流為0.4?0.7mA/cm,通電30min。關閉電源。
[0014]本發明的有益效果:采用本發明提供的醋酸纖維素薄膜電泳法，可簡單，快速，有效的分離測定RNA的四種堿基。
【具體實施方式】
[0015]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0016]實施例1:
一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征包括以下步驟:
A、RNA的堿水解；
B、準備與點樣；
C、電泳。
[0017]RNA的堿水解，稱取0.20gRNA,溶于5ml 0.3mol/L KOH溶液中，使RNA的濃度達到20?30mg/ml。沸水浴加熱30min。將水解液轉入到錐形瓶中。冰浴，在冰浴過程中用高錳酸溶液滴定到水解液的PH值為3.5，在2500rpm離心lOmin。出去沉淀，上層液即是樣品。
[0018]準備與點樣，
①將薄膜切成2.5cmX8cm的小片。在薄膜無光澤面得一端約2cm處用鉛筆劃一樣線。
[0019]②將薄膜無光澤面向下，置于PH3.5,0.02mol/L的檸檬酸緩沖液中濕潤。
[0020]③將充分濕透的膜條取出，用濾紙吸取多余的緩沖液，把膜條置于潔凈的玻璃板上，無光澤面朝上，用蓋玻片在劃線處點樣。
[0021]電泳，將點樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時，無光澤面向下，點樣端置于負極，槽架上以雙層濾紙做橋墊，濾紙的一端與槽架的前沿對齊，另一端與電極的緩沖液中，并使濾紙全部濕潤后驅除氣泡。膜條與濾紙需貼緊，保持平衡5min后通電，電壓為160V，電流為
0.4?0.7mA/cm,通電30min。關閉電源。
[0022]上述雖然結合實施例對本發明的【具體實施方式】進行了描述，但并非對本發明保護范圍的限制，所屬領域技術人員應該明白，在本發明的技術方案的基礎上，本領域技術人員不需要付出創造性的勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征包括以下步驟: A、RNA的堿水解； B、準備與點樣； C、電泳。
2.根據權利要求1所述的醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征在于:所述RNA的堿水解，稱取0.20gRNA,溶于5ml 0.3mol/L KOH溶液中，使RNA的濃度達到20?30mg/ml,沸水浴加熱30min,將水解液轉入到錐形瓶中，冰浴,在冰浴過程中用高錳酸溶液滴定到水解液的PH值為3.5，在2500rpm離心lOmin，出去沉淀，上層液即是樣品O
3.根據權利要求1所述的醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征在于:所述準備與點樣， ①將薄膜切成2.5cmX 8cm的小片，在薄膜無光澤面得一端約2cm處用鉛筆劃一樣線； ②將薄膜無光澤面向下，置于PH3.5,0.02mol/L的檸檬酸緩沖液中濕潤； ③將充分濕透的膜條取出，用濾紙吸取多余的緩沖液，把膜條置于潔凈的玻璃板上，無光澤面朝上，用蓋玻片在劃線處點樣。
4.根據權利要求1所述的醋酸纖維素薄膜電泳法分離測定RNA的四種堿基的方法，其特征在于:所述電泳，將點樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時，無光澤面向下，點樣端置于負極，槽架上以雙層濾紙做橋墊，濾紙的一端與槽架的前沿對齊，另一端與電極的緩沖液中，并使濾紙全部濕潤后驅除氣泡，膜條與濾紙需貼緊，保持平衡5min后通電，電壓為160V,電流為0.4?0.7mA/cm,通電30min,關閉電源。
【文檔編號】G01N27/447GK103645234SQ201310591974
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月22日 優先權日:2013年11月22日
【發明者】簡玉君 申請人:簡玉君