一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法及其使用的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種檢測祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的方法及其使用的試劑盒，旨在提供一種專屬、靈敏、簡便、現場可操作性強的快速檢驗方法；該方法由以下步驟組成：（1）取1份量供試品置于具塞試管中，加有機溶劑3ml，振搖1min，得到供試品粗提液；（2）用有機系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；（3）取供試液1.5ml置盛有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；（4）向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數次；（5）將試管置于微沸水浴中加熱約1min，使有機溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；（6）沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml；（7）立即觀察1min內液面交界處及乙醇層的顏色變化。
【專利說明】一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法及其使用的試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明公開一種檢測方法，具體是一種利用化學試劑檢測祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的方法，屬于醫藥檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]風濕及類風濕性關節炎為常見病，是骨關節的一種慢性炎癥性和破壞性疾病，屬于頑固性疾病，患者需要長期服藥以控制病情。傳統中藥在我國有著幾千年的歷史，并以毒副作用小、安全性高深受百姓信賴，因此越來越多的人選用中藥來治療此類疾病。但是中藥起效慢，止痛效果差，短期療效不如西藥明顯，所以，社會上有些不法之徒為了牟取暴利，以中成藥、保健食品之名非法添加化學藥品。這些化學藥品雖療效迅速，但長期服用不良反應較大。
[0003]具有1，2-苯并噻嗪結構(如圖1所示)的非留體抗炎藥被稱為“昔康類”，該類藥物通過抑制炎癥介質合成酶(環氧合酶)來抑制前列腺素的合成，從而達到抗炎的作用，代表藥物有吡羅昔康、美洛昔康、氯諾昔康、辛諾昔康、安吡昔康、替諾昔康、舒多昔康和伊索昔康。昔康類藥物，具有解熱鎮痛抗炎的作用，也兼有抗風濕的療效，使用這類藥物可能產生惡心、胃痛或胃腸道出血，甚至會引起肝功能異常等不良反應，對于消化道潰瘍、腎功能不全、心功能不全、高血壓、哮喘以及凝血機制障礙者則會造成更加嚴重的危害。這類藥物若非法摻雜在祛風濕中成藥和保健食品中，由于無法準確科學控制藥量，極易引起嚴重不良反應，給廣大患者造成危害。
[0004] 申請人:在專項打擊非法添加化學藥品活動中發現，部分祛風濕中成藥中違法添加昔康類非留體抗炎藥，且往往以添加吡羅昔康為主。查處在祛風濕類中成藥和保健食品中擅自添加昔康類化學藥品的違法行為，是一項長期的任務，涉及范圍廣，檢驗工作量大。
[0005]目前，檢驗中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥摻雜的方法主要有FeCl3M色法，薄層色譜法，高效液相色譜法，液相色譜-質譜聯用法。其中FeCl3顯色法雖簡單易行，但該法對昔康類的不同藥物顯不同的顏色，難以統一標準對一整類藥物進行檢查，且易受樣品本身顏色的影響；薄層色譜法簡便經濟，但色譜分辨率較低，而中藥制劑的干擾因素又多，易產生誤判；高效液相色譜法和液相色譜-質譜聯用法靈敏度高，結果準確可靠，但不適合流動性大的現場檢驗，在廣大的農村地區和經濟欠發達的中小城市開展檢驗活動有一定的難度。
【發明內容】
[0006]針對上述問題，本發明旨在提供一種克服現有技術存在的缺點，分析成本低，不需要使用貴重分析儀器，專屬性強，靈敏度高，現象易于觀察，適用于現場檢驗中成藥和保健食品是否摻雜昔康類非留體抗炎藥的檢驗方法。
[0007]本發明的另一目的在于提供上述方法在制備昔康類非留體抗炎藥快速檢驗試劑盒中的應用。
[0008]本發明的另一目的在于提供上述方法在檢驗祛風濕類中成藥和保健食品是否摻雜昔康類非留體抗炎藥的篩查中的應用。
[0009]本發明的前一技術方案是這樣的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法，依次由以下步驟組成:(I)取I份量供試品置于具塞試管中，加有機溶劑3ml，振搖lmin，得到供試品粗提液；(2)用有機系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；(3)取供試液1.5ml置裝有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；(4)向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數次；(5)將試管置于微沸水浴中加熱約lmin，使有機溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；(6)沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml ;(7)立即觀察Imin內液面交界處及乙醇層的的顏色變化。
[0010]所述的I份量供試品為一次服用量的供試品，所述的有機溶劑為二氯甲烷。
[0011]上述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，所述的膠囊和軟膠囊取內容物置于具塞試管中，片劑和丸劑先研細，再置于具塞試管中。
[0012]上述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，所述的有機溶劑為二氯甲烷；昔康類非留體抗炎藥在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性較好，但二氯甲烷是不可燃低沸點溶劑，加熱時易揮盡，且毒性較小，故采用二氯甲烷作為提取溶劑。
[0013]上述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(5)所述的微沸水浴約85?95°C，加熱時間約lmin，必要時可適當延長加熱時間使有機溶劑揮盡。
[0014]上述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(7)所述的立即觀察Imin內液面交界處及乙醇層的的顏色變化，應是加入無水乙醇后立即觀察，只需輕輕晃動試管至可觀察到乙醇層的顏色變化即可，不宜過度振搖使兩層過分混合，否則顏色較深不利于觀察，決定判斷結果的現象應是在加入無水乙醇后Imin內觀察到的。
[0015]上述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(7)所述的顏色變化，其判斷標準為:若加入無水乙醇后Imin內交界處的乙醇層顏色先變為紫色，再變為紫堇色或藍色，可初步斷定樣品中含有昔康類非留體抗炎藥，若不符合此顏色變化規律，或Imin內未觀察到此顏色變化現象，則為陰性結果。
[0016]以常見的吡羅昔康、美洛昔康和氯諾昔康為代表考察檢測靈敏度，本方法的顯色靈敏度可以達到:卩比羅昔康0.50mg,,美洛昔康0.52mg,氯諾昔康0.51mg均低于其相應臨床有效劑量的1/20，因此本發明的顯色靈敏度足夠保證不會漏檢祛風濕中成藥和保健食品中的昔康類非留體抗炎藥。
[0017]本發明的后一技術方案是這樣的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法所使用的試劑盒，括盒體，盒體內設有至少一個盛有3ml 二氯甲烷的具塞試管，至少一個盛有2ml濃硫酸的試劑瓶,至少一個盛有5ml無水乙醇的試劑瓶,至少一個盛有15mg香草醛的干燥具塞試管，至少一個5ml的一次性注射器，以及有機系微孔濾膜。
[0018]本發明的試驗原理如下:
昔康類非留體抗炎藥結構中都有1，2-苯并噻嗪的母核，和酰胺結構，由于噻嗪環和羰基的強電負性，使得酰胺-NH-上的H比較活潑，可與香草醛在濃硫酸存在下發生縮合反應，生成較大的共軛系統，顯紅棕色，加入乙醇后，反應產物轉變為具有更大共軛體系的化合物，顏色先變為紫色，再變為紫堇色或藍色。反應原理如下:
【權利要求】
1.一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，依次包括下述步驟:(1)取I份量供試品置于具塞試管中，加有機溶劑3ml，振搖lmin，得到供試品粗提液；(2)用有機系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；(3)取供試液1.5ml置裝有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；(4)向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數次；(5)將試管置于微沸水浴中加熱約lmin，使有機溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；(6)沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml ；(7)立即觀察Imin內液面交界處及乙醇層的的顏色變化； 所述的I份量供試品為一次服用量的供試品； 所述的有機溶劑為二氯甲烷。
2.根據權利要求1所述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，所述的膠囊和軟膠囊取內容物置于具塞試管中，片劑和丸劑先研細，再置于具塞試管中。
3.根據權利要求1所述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，所述的有機溶劑為二氯甲烷；昔康類非留體抗炎藥在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性較好，但二氯甲烷是不可燃低沸點溶劑，加熱時易揮盡，且毒性較小，故采用二氯甲烷作為提取溶劑。
4.根據權利要求1所述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(5)所述的微沸水浴約85?95°C，加熱時間約lmin，必要時可適當延長加熱時間使有機溶劑揮盡。
5.根據權利要求1所述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(7)所述的立即觀察Imin內液面交界處及乙醇層的的顏色變化，應是加入無水乙醇后立即觀察，只需輕輕晃動試管至可觀察到乙醇層的顏色變化即可，不宜過度振搖使兩層過分混合，否則顏色較深不利于觀察，決定判斷結果的現象應是在加入無水乙醇后Imin內所觀察到的。
6.根據權利要求1所述的一種祛風濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(7)所述的顏色變化，其判斷標準為:若加入無水乙醇后Imin內液層交界處的乙醇層顏色先變為紫色，再變為紫堇色或藍色，可初步斷定樣品中含有昔康類非留體抗炎藥，若不符合此顏色變化規律，或Imin內未觀察到此顏色變化現象，則為陰性結果，必要時應平行進行陽性對照試驗和空白試驗。
7.權利要求1所述的昔康類非留體抗炎藥包括:吡羅昔康、美洛昔康、氯諾昔康、辛諾昔康、安吡昔康、替諾昔康、舒多昔康和伊索昔康。
8.權利要求1所述的檢測方法在制備昔康類非留體抗炎藥快速檢驗試劑盒中的應用。
9.權利要求6所述的一種昔康類非留體抗炎藥快速檢驗試劑盒，包括盒體，其特征在于，盒體內設有至少一個盛有3ml 二氯甲烷的具塞試管，至少一個盛有2ml濃硫酸的試劑瓶，至少一個盛有5ml無水乙醇的試劑瓶,至少一個盛有15mg香草醒的干燥具塞試管,至少一個5ml的一次性注射器，以及有機系微孔濾膜。
10.權利要求1所述的檢測方法在祛風濕中成藥和保健食品中是否摻入昔康類非甾體抗炎藥的篩選檢驗中的應用。
【文檔編號】G01N21/78GK103616375SQ201310555545
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月11日 優先權日:2013年11月11日
【發明者】宮旭, 蘆麗, 馮有龍, 曹玲, 樊夏雷, 孫晶, 張再平, 尚姝, 吳莉 申請人:江蘇省食品藥品檢驗所, 中國食品藥品檢定研究院, 宮旭