一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法、標準指紋圖譜及應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法及標準指紋圖譜。將待測抗衰老片樣品研細，加乙醇或甲醇水溶液進行超聲提取，過濾得上清液，回收溶劑，以乙腈水溶液定容，微孔濾膜過濾或離心除雜，制得溶液作為進樣液供高效液相色譜進行分析，所用色譜柱為十八烷基硅烷鍵合相色譜柱；流動相乙腈和水按一定比例梯度洗脫；檢測器使用紫外檢測器，獲得樣品色譜圖。本發明對于提高抗衰老片的質量控制水平具有重要的意義。
【專利說明】一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法、標準指紋圖譜及應用(-)【技術領域】
[0001]本發明涉及一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法，以及按照此方法獲得的標準指紋圖譜及其應用。
(二)【背景技術】
[0002]隨著現代社會的發展，科學技術的進步及醫療水平的提高，世界人口正在向老齡化發展，全球有55個國家和地區已進入老齡化社會，全球老齡人口呈“爆炸式”增長。據世界衛生組織在2000年的報告稱“全球平均期望壽命己達66歲，65歲以人口達5名億，占總人口的6%”。在美國，65歲以上老年人己超過3200萬，占人口 13.3%。而中國60歲以上的老人己超過1.5億，占總人口的11.5%，一些經濟比較發達的地區，如上海、北京、天津、無錫等地已相繼步入老年型社會。聯合國老齡化議題一《馬德里政治宣言》中預計，到2050年，全球60歲以上的老齡人口總數將近20億，占總人口 21%，并將超過14歲以下兒童人口的總數。百歲老人將從2002年的約21萬增長到320萬。近年來，老齡化隨之帶來的問題日益突出，已引起了國際社會的普遍關注和重視。其中，由衰老引起的老化相關疾病如老年癡呆、帕金森氏病及白內障等的發病率明顯升高，成為世界范圍內日益嚴重的醫學問題和社會問題。因此，延緩人類衰老藥物的開發是國內外研究的重點，這不僅具有醫學、生物學意義，而且具有重要的現實意義和廣泛的社會意義。本發明基于傳統中醫理論，以紅參、地黃、茯苓、地骨皮、天冬、麥冬組成的中藥組合物，具有益氣養陰、寧心安神的功效，對于中、老年體弱者因氣陰兩虛所致的神疲乏力、心悸氣短、少氣懶言、頭暈目眩、潮熱盜汗、耳鳴健忘、煩躁失眠等有很好的療效。
[0003]抗衰老片原有的 質量評價方法主要檢測成品中指標成分人參皂苷Re和Rg1的含量，采用甲醇熱回流提取，然后用液相色譜法進行含量測定，不但操作較繁瑣，而且無法全面體現該產品內在化學組成及質量，不利于產品質量控制，也給市場上假冒偽劣行為留下了可乘之機。
[0004]色譜指紋圖譜作為目前對中藥及其制劑進行綜合宏觀分析的可行手段之一，也得到國際認可。該方法建立在中藥化學成分系統研究的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑成品及半成品質量的真實性、優良性和穩定性。對于化學組成和工藝穩定的中藥制劑，其指紋圖譜中特征指紋峰的保留時間和峰面積也是一定的；因此，指紋圖譜上的指紋峰，及其保留時間和峰面積的相對值可以反映中藥復方制劑的組成和工藝中的變化情況。
(三)
【發明內容】
[0005]本發明目的是提供一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法。
[0006]本發明采用的技術方案是:
[0007]—種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法，所述方法包括:
[0008](I)進樣液制備:將待測抗衰老片樣品研細，精密稱取1.00~5.0OgJP 30ml~100ml的體積濃度為50%~75%的乙醇或甲醇水溶液，超聲提取30~60min，過濾得上清液，回收溶劑，以10~20%乙腈水溶液定容，微孔濾膜過濾或離心除雜，制得溶液作為進樣液供高效液相色譜進行分析；
[0009](2)色譜分析:所用色譜柱為十八烷基硅烷鍵合相色譜柱；流動相由水相B和有機相A組成，流動相A為乙腈，流動相B為水，采用梯度洗脫，洗脫程序為表1~表3之一:
[0010]表1:
[0011]
【權利要求】
1.一種抗衰老片的指紋圖譜獲取方法，所述方法包括: (1)進樣液制備:將待測抗衰老片樣品研細，精密稱取1.0O~5.0OgJp 30ml~100ml的體積濃度為50%~75%的乙醇或甲醇水溶液，超聲提取30~60min，過濾得上清液，回收溶劑，以10~20%乙腈水溶液定容，微孔濾膜過濾或離心除雜，制得溶液作為進樣液供高效液相色譜進行分析； (2)色譜分析:所用色譜柱為十八烷基硅烷鍵合相色譜柱；流動相由水相B和有機相A組成，流動相A為乙腈，流動相B為水，采用梯度洗脫，洗脫程序為表1~表3之一: 表1:
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下: (1)將待測抗衰老片樣品研細，精密稱取2.0OgJP 40ml的體積濃度為75%的乙醇水溶液，超聲提取30min，過濾得上清液，回收溶劑，以12%乙腈水溶液定容至10mL，0.45 μ m微孔濾膜過濾，制得溶液作為進樣液供高效液相色譜進行分析； (2)色譜分析:所用色譜柱為AgilentZorbax SB-C18色譜柱；流動相由水相B和有機相A組成，流動相A為乙腈，流動相B為水，采用梯度洗脫，洗脫程序見下表4: 表4:
3.按照權利要求1或2方法獲得的標準指紋圖譜，其特征在于所述標準指紋圖譜如圖7所示，有15個已定性的特征峰，分別為:人參皂苷Rg1/人參皂苷Re對應的6號峰、人參皂苷Rf對應的10號峰、人參皂苷Rb1對應的11號峰、人參皂苷Rg2對應的12號峰、人參皂苷Rh1對應的13號峰、人參皂苷Re對應的14號峰、人參皂苷Rb2對應的15號峰、人參皂苷Rd對應的16號峰、(S)-人參皂苷Rg3對應的22號峰、(R)-人參皂苷Rg3對應的23號峰、jionoside A1對應的2號峰、麥角甾苷對應的3號峰、jionoside B1對應的4號峰、異麥角甾苷對應的5號峰、martynoside對應的7號峰；以人參皂苷Re所對應的14號峰為對照，相對峰面積和相對保留時間見下表:____
4.權利要求3所述的標準指紋圖譜在抗衰老片生產工藝監控、質量評價或真偽鑒別中的應用。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述應用為:將抗衰老片樣品按權利要求1或2所述的方法獲取樣品的指紋圖譜，與權利要求3所述的標準指紋圖進行比對，以正常樣品的相似度應不低于0.95為判斷標準。
【文檔編號】G01N30/02GK103604878SQ201310537423
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月1日 優先權日:2013年11月1日
【發明者】劉靂, 顏繼忠, 楚楚, 顧佳麗, 戴金明, 胡濟宏 申請人:正大青春寶藥業有限公司