貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，該方法是以無水葡萄糖為對照品，采用苯酚-硫酸法在480～490nm波長處或采用蒽酮-硫酸法在600～625nm波長處測定貞芪扶正制劑中多糖的含量。本發明操作簡便，快速重現性好，回收率高，靈敏度高，測量結果準確，可有效控制貞芪扶正制劑的質量，從而確保其臨床療效。
【專利說明】貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法【技術領域】
[0001]本發明涉及一種貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，屬于中藥質量檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]貞芪制劑有補氣養陰、扶正固本之功效。現代藥理實驗證明能提高人體免疫功能，保護骨髓和腎上腺皮質功能，促進干擾素產生；配合腫瘤患者放、化療，減輕病人放、化療期間的毒副作用，促進正常功能的恢復的作用。其處方由黃芪、女貞子組成。目前，貞芪制劑供臨床選擇的劑型有片劑、膠囊劑、顆粒劑及滴丸劑等。
[0003]黃芪是一種常用的扶正中藥，素以“補氣諸藥之最”著稱，含有多糖、蛋白質、生物堿、氨基酸、黃酮類、微量元素等多種生物活性物質，其中多糖是黃芪中的主要生物活性成分之一，具有免疫調節、抗腫瘤、促進骨髓造血干細胞增殖和雙向調節血糖等藥理作用。而女貞子有增加人體體液、細胞免疫功能，且能補陰虛、退虛熱、抗炎、消腫、止痛等功效，其中女貞子多糖是調節機體免疫功能的活性成分，可顯著抑制機體免疫器官退化及提高免疫功能，清除羥自由基，超氧陰離子自由基和活性氧，提高抗氧化酶活力，量效變化說明其作用呈劑量依賴性。
[0004]因此，多糖成分是貞芪扶正制劑的主要藥物有效成分之一，對其含量進行測定顯得尤為重要，是衡量貞芪藥物質量的一個關鍵指標。但是，現有的貞芪扶正制劑的質量檢測方法并沒有對多糖成分的含量進行測定，該質量檢測標準是不完善的。并且，多糖的提取主要采取水提工藝，該工藝的缺點是多糖粗品的收率低，提取成本高，勢必會影響多糖的含量測定結果。如果沒有嚴格準確的質量標準，所得到的藥品質量就不能保證，必將影響該藥品的臨床療效。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于，提供一種貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，能夠對貞芪扶正制劑中多糖成分的含量進行快速、準確、高重現性、高回收率的測定。
[0006]本發明所述的貞芪扶正制劑是以10%~90%重量的女貞子和90%~10%重量的黃芪為原料藥，按女貞子:黃芪=1:2的比例制成的。其制備方法:取女貞子10%~90%、黃芪90%~10%粉碎成粗粉，按女貞子:黃芪=1:2的比例，將黃芪飲片、女貞子飲片投入多功能提取罐內，加水煎煮三次，第一次加水量為藥材的10倍量，加熱至沸，煎煮2小時；第二、三次加水量均為藥材的8倍量，加熱至沸，分別煎煮I小時，濾過，合并濾液，真空度在-0.04~-0.075Mpa下濃縮，濃縮至相對密度為1.30~1.32 (80°C的)清膏，備用；加入適量輔料，按常規方法制成相應的藥物制劑。
[0007]為解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案:
[0008]一種貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，是以無水葡萄糖為對照品，采用苯酹-硫酸法在480~490nm波長處或采用蒽酮-硫酸法在600~625nm波長處測定貞苗扶正制劑中多糖的含量。
[0009]前述含量測定方法具體包括以下步驟:
[0010](I)對照品溶液的制備:取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成ImL含0.1mg的溶液，即得；
[0011](2)供試品溶液的制備，采用下述方法a-d中的任一種:
[0012]a精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物2.0g,精密加入水50mL，稱定重量，超聲、回流30?60min或微波提取5?15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液25mL，濾液加入95%乙醇使含醇量達80%，過濾，沉淀物用95%乙醇進行洗滌，沉淀物揮干,加水溶解并轉移至25mL容量瓶內，超聲10?30min，定容至刻度，搖勻，即得；
[0013]b精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物2.0g,精密加入水50mL，稱定重量，超聲、回流30?60min或微波提取5?15min,補足重量；3000?5000rpm離心3min,取上清液，即得;
[0014]c精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物6.0g,置250mL燒瓶中依次用60?90°C的石油醚、乙醚和90%乙醇索氏提取，殘渣揮干，精密加入水150mL，稱定重量，超聲、回流30?60min或微波提取5?15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液IOOmL，加入活性炭，脫色，過濾，精密量取續濾液50mL，加入95%乙醇使溶液含醇80%，靜置過夜，過濾，沉淀物用無水乙醇反復洗滌，沉淀物揮干，加水溶解后定容到50mL容量瓶中，搖勻，即得；
[0015]d精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物4.0g，置250mL燒瓶中，依次用60?90°C的石油醚、乙醚和乙醇索氏提取，殘渣揮干，精密加入水IOOmL,稱定重量，超聲、回流30?60min或微波提取5?15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，加入95%乙醇使溶液含醇量達80%，靜置過夜，濾過，沉淀物用無水乙醇反復洗滌，沉淀物揮干，用水50mL溶解，加入適量2mol/L鹽酸調節pH至3.0，放置過夜，3000?5000rpm離心3min，取上清液，用2mol/L NaOH調pH至7.0，蒸干溶劑，殘渣加水溶解后定容到50mL容量瓶中，搖勻，即得；
[0016](3)標準曲線的繪制:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于具塞試管中，并分別補蒸餾水至10.0mL，搖勻，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，依次向試管中加入5%苯酚試劑1.0mL或2%蒽酮試劑0.5mL以及5.0mL濃硫酸，以蒸餾水1.0mL同法作空白參照，照《中國藥典》2010版一部附錄VA的紫外-可見分光光度法，苯酚-硫酸法在480?490nm波長處測定吸光度，蒽酮-硫酸法在600?625nm波長處測定吸光度，以吸光度值A為縱坐標、對照品溶液的濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程；
[0017](4)測定法:精密吸取供試品溶液1.0mL置于具塞刻度試管中，依次向試管中加入5%苯酚試劑1.0mL或2%蒽酮試劑0.5mL以及5.0mL濃硫酸，照標準曲線繪制項下的方法測定吸光度，代入回歸方程，計算貞芪扶正制劑中的多糖含量。
[0018]前述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法中，5%苯酚試劑的制備方法為:取苯酚適量，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g,蒸懼，收集180°C餾份，稱取7.5g，加水150mL溶解，置棕色瓶內放冰箱備用。
[0019]前述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法中，采用苯酚-硫酸法時，步驟(3)為:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于5mL具塞試管中，并分別補蒸餾水至5mL，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，加Λ 5%苯酹試劑1.0mL,搖勻，精密加入5.0mL濃硫酸,立即搖勻，室溫下放置25min,以蒸懼水1.0mL同法作空白參照，于490nm波長處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標、濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程。
[0020]前述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法中，2%蒽酮試劑的制備方法為:精密稱定0.1g蒽酮,置于50mL量瓶中，用乙酸乙酯定容,搖勻，即得。
[0021]前述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法中，采用蒽酮-硫酸法時，步驟(3)為:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于IOmL具塞試管中并分別補蒸餾水至10.0mL，搖勻，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，依次向試管中加入0.5mL2%蒽酮試劑和5.0mL濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中加熱lOmin，取出，速冷至室溫后，以蒸餾水1.0mL同法作空白參照，照《中國藥典》2010版一部附錄VA的紫外-可見分光光度法，在625nm波長處測定吸光度，以吸光度值A為縱坐標、對照品溶液的濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程。
[0022]采用本發明所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，每克貞芪扶正制劑中多糖以葡萄糖C6H12O6計,不得少于30mg。
[0023]為確保本發明含量測定方法科學、合理、可行， 申請人:進行了一系列試驗研究和考察。
[0024]一、儀器與試藥(見表1)
[0025]表1
[0026]
【權利要求】
1.一種貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于:以無水葡萄糖為對照品，采用苯酹-硫酸法在480~490nm波長處或采用蒽酮-硫酸法在600~625nm波長處測定貞芪扶正制劑中多糖的含量。
2.根據權利要求1所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟: (1)對照品溶液的制備:取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成ImL含0.1mg的溶液，即得； (2)供試品溶液的制備，采用下述方法a-d中的任一種: a精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物2.0g，精密加入水50mL，稱定重量，超聲、回流30~60min或微波提取5~15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液25mL，濾液加入95%乙醇使含醇量達80%，過濾，沉淀物用95%乙醇進行洗滌，沉淀物揮干，加水溶解并轉移至25mL容量瓶內，超聲10~30min，定容至刻度，搖勻，即得； b精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物2.0g，精密加入水50mL，稱定重量，超聲、回流30~60min或微波提取5~15min,補足重量；3000~5000rpm離心3min,取上清液，即得； c精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物6.0g，置250mL燒瓶中依次用60~90°C的石油醚、乙醚和90%乙醇索氏提取，殘渣揮干，精密加入水150mL，稱定重量，超聲、回流30~60min或微波提取5~15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液IOOmL，加入活性炭，脫色，過濾，精密量取續濾液50mL，加入95%乙醇使溶液含醇80%，靜置過夜，過濾，沉淀物用無水乙醇反復洗滌，沉淀物揮干，加水溶解后定容到50mL容量瓶中，搖勻，即得； d精密稱取貞芪扶正制劑或其內容物4.0g，置250mL燒瓶中，依次用60~90°C的石油醚、乙醚和乙醇索氏提取，殘渣揮干，精密加入水IOOmL,稱定重量，超聲、回流30~60min或微波提取5~15min，補足重量，濾過；精密量取續濾液50mL，加入95%乙醇使溶液含醇量達80%，靜置過夜，濾過，沉淀物用無水乙醇反復洗滌，沉淀物揮干，用水50mL溶解，加入適量2mol/L鹽酸調節pH至3.0,放置過夜,3000~5000rpm離心3min,取上清液,用2mol/LNaOH調pH至7.0，蒸干溶劑，殘渣加水溶解后定容到50mL容量瓶中，搖勻，即得； (3)標準曲線的繪制:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于具塞試管中，并分別補蒸餾水至10.0mL,搖勻，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，依次向試管中加入5%苯酚試劑1.0mL或2%蒽酮試劑0.5mL以及5.0mL濃硫酸，以蒸餾水1.0mL同法作空白參照，照《中國藥典》2010版一部附錄VA的紫外-可見分光光度法，苯酚-硫酸法在480~490nm波長處測定吸光度，蒽酮-硫酸法在600~625nm波長處測定吸光度，以吸光度值A為縱坐標、對照品溶液的濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程； (4)測定法:精密吸取供試品溶液1.0mL置于具塞刻度試管中，依次向試管中加入5%苯酚試劑1.0mL或2%蒽酮試劑0.5mL以及5.0mL濃硫酸，照標準曲線繪制項下的方法測定吸光度，代入回歸方程，計算貞芪扶正制劑中的多糖含量。
3.根據權利要求2所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于，5%苯酚試劑的制備方法為:取苯酚適量，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集180°C餾份，稱取7.5g，加水150mL溶解，置棕色瓶內放冰箱備用。
4.根據權利要求2或3所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于，采用苯酚-硫酸法時，步驟(3)為:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于具塞試管中，并分別補蒸餾水至10.0mL，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，加入5%苯酚試劑1.0mL,搖勻，精密加入5.0mL濃硫酸，立即搖勻，室溫下放置25min，以蒸餾水1.0mL同法作空白參照，照《中國藥典》2010版一部附錄VA的紫外-可見分光光度法，于490nm波長處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標、濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程。
5.根據權利要求2所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于，2%蒽酮試劑的制備方法為:精密稱定0.1g蒽酮，置于50mL量瓶中，用乙酸乙酯定容，搖勻，即得。
6.根據權利要求2或5所述的貞芪扶正制劑中多糖的含量測定方法，其特征在于，采用蒽酮-硫酸法時，步驟(3)為:精密吸取對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL于IOmL具塞試管中并分別補蒸餾水至10.0mL，搖勻，配成系列標準溶液；精密移取1.0mL系列標準溶液于IOmL具塞刻度試管中，依次向試管中加入0.5mL2%蒽酮試劑和5.0mL濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中加熱lOmin，取出，速冷至室溫后，以蒸餾水1.0mL同法作空白參照，照《中國藥典》2010版一部附錄VA的紫外-可見分光光度法，在625nm波長處測定吸光度，以吸光度值A為縱坐標、對照品溶液的濃度C為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程。`
【文檔編號】G01N21/33GK103558166SQ201310513100
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月25日 優先權日:2013年10月25日
【發明者】張觀福 申請人:貴州信邦制藥股份有限公司