一種中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的測定方法
【專利摘要】本發明提供一種中藥龍膽中抗老年癡呆有效成分苯甲酸酯類化合物的測定方法，屬于化學分析領域。本方法特征在于：以龍膽為原料，經粉碎過篩，采用95%乙醇溶液超聲萃取，過濾，從中提取苯甲酸酯類化合物，采用液相色譜-串聯質譜聯用儀實現龍膽中主要苯甲酸酯類化合物的測定。本發明中采用的LC-MS/MS法，靈敏度高，穩定性好，方便快速，適合復雜基質中超低含量目標物的批量分析。
【專利說明】一種中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的測定方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于化學分析領域，具體涉及一種中藥龍膽中抗老年癡呆有效成分苯甲酸酯類化合物的測定方法。
【背景技術】
[0002]中藥龍膽(GentianaeRadix et Rhizoma)為龍膽科植物:條葉龍膽manshurica Kitag.,Jii^BGentiana scabra Bge.，三花龍膽(Sfefliiaaa triflora Pall.或滇龍膽rigescens Franch.的干燥根和根莖。滇龍膽，別名:滇龍膽草(滇南本草)、堅龍膽(中國高等植物圖鑒)、苦草、青魚膽、小秦艽(云南)、藍花根、炮仗花，是《中國藥典》收錄的龍膽品種之一，也是云南著名道地藥材，并收載于《滇南本草》。龍膽在《神農本草經》中作為上品收載，苦、寒；歸肝、膽經；具有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效；用于治療濕熱黃疸，陰腫陰癢，帶下，強中，濕疹瘙癢，目赤，耳聾，脅痛，口苦，驚風抽搐等癥。龍膽中主要成分為環烯醚萜苷類化合物，以龍膽苦苷、獐牙菜苦苷等為代表。該類物質具有保肝、健胃、鎮痛、抗病毒、促進細胞分裂、加快傷口愈合等多種功效。
[0003]從滇龍膽提取物中發現了十余種具有顯著類似神經生長因子活性的2，3- 二羥基苯甲酸酯類新化合物，命名 為gentisides。具有顯著的類似神經生長因子活性，神經營養作用和保護作用，是一種高效低毒的抗老年癡呆癥中藥活性組分。關于2，3-二羥基苯甲酸酯類化合物只有化學合成的脂肪鏈含碳數低于11或16個碳的文獻報道；歐洲專利(EP I930 002 Al)描述了苯甲酸酯類化合物式在治療和預防病毒感染方面的應用；中國專利(CN1411339A)和美國專利所描述的苯甲酸類化合物主要用于抑菌，作為食品添加劑等。此外，龍膽具有來源廣泛，取材便利等優點，容易獲得大量的2，3- 二羥基苯甲酸酯類化合物。對研發預防和治療老年癡呆癥等神經退行性疾病的新藥具有重要意義。
[0004]目前文獻多集中在龍膽中龍膽苦苷、獐牙菜苦苷等的高效液相色譜(HPLC)測定上，而對龍膽中的2，3- 二羥基苯甲酸酯類活性成分未見報道。液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)聯用技術具有靈敏度高、專屬性好、快速、高效的特點，已逐漸成為中藥微量成分定量分析的有效手段。因此，本專利采用LC-MS/MS負離子多反應監測(MRM)掃描模式，同時測定滇龍膽中4種苯甲酸酯類化合物的含量，為其開發利用和質量控制提供必要的保證和依據。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是針對目前仍未有檢測中藥龍膽中的主要抗老年癡呆的活性成分的方法，而提供一種液相色譜-串聯質譜法檢測龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法。
[0006]本發明通過以下技術方案實現。
[0007]本發明的檢測方法采用95%乙醇溶液超聲萃取龍膽中的苯甲酸酯類化合物，并通過微孔濾膜過濾處理，采用液相色譜-串聯質譜聯用儀(LC-MS/MS)實現龍膽中主要苯甲酸酯類化合物的測定，具體步驟如下。
[0008]a、龍膽中主要苯甲酸酯類活性成分的提取:將龍膽干燥樣品粉碎過篩，置于錐形瓶中并加入95%乙醇溶液，經超聲萃取、過濾后，濾液經0.22m微孔濾膜處理，制備樣品溶液。
[0009]b、樣品的分析:
取不同部位的龍膽樣品，按步驟a所述的方法制備供試品溶液，采用LC-MS/MS測定，記錄峰面積，分別計算樣品中 gentiside A, gentiside J, gentiside B, gentiside K 的含量，結果見表1。
【權利要求】
1.一種中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的測定方法，其特征是將中藥龍膽樣品干燥粉碎過篩，置于錐形瓶中并加入95%乙醇溶液，超聲萃取，過濾得溶液后，濾液經0.22 μ m微孔濾膜處理，采用液相色譜-串聯質譜聯用儀(LC-MS/MS)測定龍膽中苯甲酸酯類化合物的種類和含量。
2.根據權利要求1所述的液相色譜-串聯質譜法檢測中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法，其特征在于:篩孔徑為100目。
3.根據權利要求1所述的液相色譜-串聯質譜法檢測中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法，其特征在于:龍膽樣品為1.5g。
4.根據權利要求1所述的液相色譜-串聯質譜法檢測中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法，其特征在于:95%乙醇溶液體積為10mL。
5.根據權利要求1所述的液相色譜-串聯質譜法檢測中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法，其特征在于:超聲萃取時間為40min。
6.根據權利要求1所述的中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物，其特征在于:中藥龍膽中四種主要苯甲酸酯類化合物包括 gentiside A, gentiside J, gentiside B 和 gentiside K。
【文檔編號】G01N30/02GK103743828SQ201310503770
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年10月24日 優先權日:2013年10月24日
【發明者】潘俊, 肖丹, 李晚誼, 沈銳 申請人:云南省農業科學院藥用植物研究所