一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準品，試劑R1包含：緩沖液濃度為10～500mM，pH范圍是5.5～9.0；表面活性劑濃度為0.5～5g/L；電解質濃度為5～50g/L；高分子促進劑濃度為2～100g/L；防腐劑濃度為1～10g/L；試劑R2包含：緩沖液濃度為10～500mM，pH范圍是5.5～9.0；抗人α1-酸性糖蛋白抗體濃度為10～30％(w／v)；電解質濃度為5～50g/L；防腐劑濃度為1～10g/L；穩定劑濃度為5～50g/L；校準品包含：α1-酸性糖蛋白抗原濃度為0.05～5.0g/L；穩定劑濃度為5～50g/L；防腐劑濃度為1～10g/L。本試劑盒準確度高、重復性好、檢測快速、穩定性強，能夠滿足臨床快速高通量檢測樣本的要求，具有很高的臨床應用價值。
【專利說明】一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫學免疫體外診斷領域，涉及一種免疫透射比濁檢測試劑盒，特別是涉及一種用免疫透射比濁法檢測血清中α 1-酸性糖蛋白含量的試劑盒。
【背景技術】
[0002]α 1-酸性糖蛋白(α 1-acid glycoprotein, a 1-AGP, ΑΑΡ),分子量約 40000,是一種非特異性急性時相反應蛋白(acute phase protein, APP),也是人類血清中含糖量最多(含糖約45% )、酸性最強(PI為2.7?3.5)糖蛋白。主要由肝臟巨噬細胞和粒細胞產生，癌細胞也可合成。它與C反應蛋白一起被認為是反映炎癥活動活急性狀態的敏感指標。正常人血清AAP的值為450-950mg/L。在某些疾病中，特別是自身免疫性疾病中，其值升高很大。
[0003]α 1-酸性糖蛋白是目前較為敏感的急性期反應的炎癥標志物，是急性時相反應物之一。其對炎癥、感染反應早于體溫及白細胞數的變化，故廣泛用于臨床:(I) α 1-酸性糖蛋白含量升高:病理情況下，白介素I刺激吞噬細胞釋放出脂多聚糖，可促進α 1-酸性糖蛋白的合成使血中水平升高，故α 1-酸性糖蛋白是一種最穩定的早期呈陽性的急性時相反應物。如感染(炎癥)、外傷、燒傷、手術、急性心肌梗死時α 1-酸性糖蛋白含量升高。另外類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡、克隆病、惡性腫瘤也增高，在癌轉移時升高更明顯。(2)α 1-酸性糖蛋白濃度降低:肝細胞病變晚期、腎病綜合癥或其他原因所致尿中濾過的蛋白質量丟失、遺傳因素和營養不良等疾病。
[0004]現有技術中常用的α 1-酸性糖蛋白檢測方法是放射免疫分析法、酶聯免疫法。這些技術存在諸多不足，如需要特殊的設備，樣本需要預處理，不能上全自動生化分析儀進行批量檢測分析等。放射免疫分析存在放射線輻射和污染等問題。酶聯免疫法應用比較普遍，但該方法為非均相免疫檢測系統，測定過程較為繁瑣，耗時長，缺少單位測試運行時間；自動化程度不高，批間差和重復性相對較大；需要配備多種專門設備，一定程度上增加了成本。
[0005]隨著樣本檢驗數量的不斷增加，臨床上迫切需要一種更為簡便、快捷的方法來進行規模化批量操作。免疫比濁法檢測α 1-酸性糖蛋白可直接在全自動生化分析儀上完成批量樣本分析，操作簡單、可實現快速、高通量樣本的檢測。另外，為了提高試劑穩定性，特別添加了一種穩定劑用于改善試劑性能，可以保存更長時間。
【發明內容】
[0006]針對現有技術存在的缺點與不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，操作簡單、重復性好、能夠進行批量樣本全自動化檢測的免疫透射比濁法檢測α 1-酸性糖蛋白的試劑盒。
[0007]為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是，一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準品，所述試劑Rl包含如下組分:緩沖液，濃度為10?500mM，pH范圍是5.5?9.0 ;表面活性劑，濃度為0.5?5g/L ;電解質，濃度為5?50g/L ;高分子促進劑，濃度為2?100g/L ;防腐劑，濃度為I?10g/L ;所述試劑R2包含如下組分:緩沖液，濃度為10?500mM，緩沖液的pH范圍是5.5?9.0 ;抗人α 1-酸性糖蛋白抗體，濃度為10?30% (w / V);電解質,濃度為5?50g/L ;防腐劑,濃度為I?10g/L ;穩定劑,濃度為5?50g/L ;所述校準品包含如下組分:α 1-酸性糖蛋白抗原，濃度為0.05?5.0g/L ;穩定劑，濃度為5?50g/L ;防腐劑，濃度為I?10g/L。
[0008]上述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的緩沖液為TRIS緩沖液；所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體選自兔抗人或羊抗人抗體，抗體種類為多克隆抗體或單克隆抗體，抗體濃度為10?30% (w / v);所述的電解質為氯化鈉；所述的高分子促進劑為聚乙二醇(PEG)，分子量為6000?10000 ;所述表面活性劑選自Tween系列；所述防腐劑為疊氮鈉；所述穩定劑選自海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白中的一種或幾種。
[0009]上述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的緩沖液優選TRIS緩沖液，緩沖液濃度優選20?lOOmM，緩沖液的pH值范圍優選7.0?8.0 ;所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體優選兔抗人α 1-酸性糖蛋白多克隆抗體，抗體濃度優選12?20%(w / V);所述的電解質為氯化鈉，電解質濃度優選5?15g/L;所述的高分子促進劑優選PEG6000，濃度優選50?100g/L ;所述的表面活性劑優選TWeen20，濃度優選I?5g/L ;所述的防腐劑優選疊氮鈉，濃度優選I?5g/L ;所述的穩定劑優選海藻糖，濃度為5?10g/L。
[0010]上述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的校準品包括α 1-酸性糖蛋白抗原0.05?5.0g/L、穩定劑5?50g/L、防腐劑I?10g/L。
[0011]上述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的α 1-酸性糖蛋白抗原濃度優選0.1?3.0g/L,所述的抗原穩定劑優選牛血清白蛋白，濃度為10g/L,抗原防腐劑為lg/L疊氮鈉。
[0012]上述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的校準品制備成高濃度單點校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成6個不同濃度的參考校準品，或者直接制備成6個不同濃度的參考校準品。
[0013]本發明的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒采用免疫比濁法是抗原抗體結合動態測定方法，其基本原理是:樣本中的α 1-酸性糖蛋白抗原和試劑R2中的α 1-酸性糖蛋白抗體發生相應的免疫反應，形成不溶性的抗原-抗體復合物，使反應液產生一定的濁度。反應液中α 1-酸性糖蛋白抗體過量時，形成的免疫復合物的量隨著樣本中α 1-酸性糖蛋白抗原量的增加而增加，反應液的濁度也相應增加。在特定波長下測定該復合物的吸光值，與校準品標定的校準曲線比較，即可計算出樣本中的α 1-酸性糖蛋白的含量。
[0014]相較于現有技術，本發明提供的用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒具有如下優點及有益效果:使用簡便快速，能夠滿足臨床快速高通量檢測樣本的要求，檢測效率明顯提高，試劑更穩定，適合臨床推廣。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1為本發明測定血清α 1-酸性糖蛋白含量的方法示意圖；
[0016]圖2為本發明實施例2的α1-酸性糖蛋白校準品的標準曲線；[0017]圖3為本發明試劑實施例2與實施例3穩定性試驗對比；
[0018]圖4為本發明試劑實施例2與實施例3穩定性試驗對比。
【具體實施方式】
[0019]以下就本發明提供的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒做進一步說明。
[0020]實施例1
[0021]1.配制試劑:
[0022]試劑Rl:
[0023]
【權利要求】
1.一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準品，其特征在于: 所述試劑Rl包含如下組分: 緩沖液，濃度為10~500mM，pH范圍是5.5~9.0 ; 表面活性劑，濃度為0.5~5g/L ； 電解質，濃度為5~50g/L ； 高分子促進劑，濃度為2~100g/L ； 防腐劑，濃度為I~IOg / L; 所述試劑R2包含如下組分: 緩沖液，濃度為10~500mM，緩沖液的pH范圍是5.5~9.0 ; 抗人α 1-酸性糖 蛋白抗體，濃度為10~30% (w / V); 電解質，濃度為5~50g/L ； 防腐劑，濃度為I~10g/L ； 穩定劑，濃度為5~50g/L ； 所述校準品包含如下組分: α 1-酸性糖蛋白抗原，濃度為0.05~5.0g/L ； 穩定劑，濃度為5~50g/L ； 防腐劑，濃度為I~10g/L。
2.根據權利要求1所述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于: 所述的緩沖液為TRIS緩沖液； 所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體選自兔抗人或羊抗人抗體，抗體種類為多克隆抗體或單克隆抗體； 所述的電解質為氯化鈉； 所述的高分子促進劑為聚乙二醇(PEG)，分子量為6000~10000 ； 所述表面活性劑選自Tween系列； 所述防腐劑為疊氮鈉； 所述穩定劑選自海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白中的一種或幾種。
3.根據權利要求1或2所述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于: 所述的緩沖液優選TRIS緩沖液，緩沖液濃度優選20~lOOmM，緩沖液的pH值范圍優洗·7.0 ~8.0 ; 所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體優選兔抗人α 1-酸性糖蛋白多克隆抗體，抗體濃度優選 12 ~20% (w / V); 所述的電解質為氯化鈉，電解質濃度優選5~15g / L ; 所述的高分子促進劑優選PEG6000，濃度優選50~100g/L ； 所述的表面活性劑優選Tween20,濃度優選I~5g/L ； 所述的防腐劑優選疊氮鈉，濃度優選I~5g/L ； 所述的穩定劑優選海藻糖，濃度為5~10g/L。
4.根據權利要求1所述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的校準品包括ct 1-酸性糖蛋白抗原0.05~5.0g/L、穩定劑5~50g/L、防腐劑I~10g/L。
5.根據權利要求4所述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的ct 1-酸性糖蛋白抗原濃度優選0.1~3.0g/L,所述的抗原穩定劑優選牛血清白蛋白，濃度為10g/L,抗原防腐劑為lg/L疊氮鈉。
6.根據權利要求1、4和5所述的一種用于檢測血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的校準品制備成高濃度單點校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成6個不同濃度的參考校準品，或者直接制備成6個不同濃度的參考校準品。
【文檔編號】G01N33/68GK103529221SQ201310496162
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月22日 優先權日:2013年10月22日
【發明者】路克國, 溫云飛 申請人:青島金洋生物技術有限公司