一種賴氨酸發酵液的分析方法
【專利摘要】本發明公開了一種賴氨酸發酵液的分析方法，所述賴氨酸發酵液中含有賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮，其中，該方法包括：采集多個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖；分別獲得所述多個標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量；分別得到賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量與各自對應的近紅外吸光度值的多元線性回歸方程；計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。通過上述技術方案，實現了同步、快速、安全的測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的目的。
【專利說明】一種賴氨酸發酵液的分析方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種賴氨酸發酵液的分析方法。
【背景技術】
[0002]在賴氨酸的發酵中，賴氨酸是主要的代謝產物，其含量是判斷發酵水平的重要指標；賴氨酸的發酵主要是利用發酵菌種將糖轉化為賴氨酸，發酵菌種的生長情況直接影響著賴氨酸的產量，發酵過程中通常通過發酵菌種的OD值來了解發酵菌種在發酵液中的密度分布情況，并以此判斷發酵菌種的生長階段，以調整供氧和營養，所以發酵菌種的OD值是衡量發酵菌種生長狀況的重要指標；還原糖和氨基氮在發酵液中一般作為發酵菌種的碳源和氮源等必需的營養元素存在，因此在發酵過程中通過監控還原糖和氨基氮的含量，來了解發酵過程中營養物的充足情況，以保證生產的穩定，并達到高產賴氨酸的目的。所以，在賴氨酸發酵過程中以及發酵終點對發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的分析至關重要。
[0003]目前關于賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的分析，通常是單獨分析。賴氨酸的含量的測定方法采用的是茚三酮比色法，即通過將樣品稀釋定容、蒸煮、再定容、冷卻、測吸光度等步驟進行測定，每次測定均需制作標準曲線，操作繁瑣、耗時長、所用試劑雜多且配制過程繁瑣；發酵菌種的OD值的測定主要是通過樣品的光密度反應菌體的密度情況，而對于發酵菌種的OD值的測定，通常將發酵液按照一定的倍數進行稀釋，并測定稀釋后樣品中發酵菌種的OD值，而不同的稀釋倍數下測定的發酵菌種的OD值在換算為發酵原液中發酵菌種的OD值后也有所不同，致使不同廠家在生產中對發酵菌種的OD值的控制不統一；還原糖的含量的測定采用的是費林氏滴定法，原理是在堿性溶液中，還原糖能將Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金屬離子還原，糖本身被氧化為糖酸及其他產物，然而，費林法測定還原糖含量，耗時長，同時由于要在沸騰的條件進行，操作過程危險性大；氨基氮的檢測，采用的是凱氏定氮法或簡易定氮裝置法，所需試劑種類多，操作時間長，產生的廢液量大，耗時長，且需加入濃堿，并在沸騰狀態下蒸煮，危險性大。
[0004]目前，尚無可以同步且快速、安全的測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的方法，因此，亟需開發一種能夠同步、快速、安全的測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的方法。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是為了克服現有技術測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量不同步、耗時長且危險性高的缺點，提供一種能夠同步、快速、安全的測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的賴氨酸發酵液的分析方法。
[0006]為了實現上述目的，本發明提供了一種賴氨酸發酵液的分析方法，所述賴氨酸發酵液中含有賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮，其中，該方法包括:
[0007]采集多個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖，分別得到每個標準樣品的一系列的近紅外吸光度值，每個賴氨酸發酵液標準樣品中所含的上述同一種物質的濃度均不同；
[0008]分別獲得所述多個標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量；
[0009]根據獲得的多個一系列的吸光度值的變化趨勢，分別獲得分別與賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量變化趨勢一致的吸光度值，并根據該獲得的吸光度值分別與和其對應的賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行多元線性擬合，分別得到賴氨酸的含量與其近紅外吸光度值、發酵菌種的OD值與其近紅外吸光度值、還原糖的含量與其近紅外吸光度值和氨基氮的含量與其近紅外吸光度值的多元線性回歸方程；
[0010]采集賴氨酸發酵液待測樣品的近紅外光譜圖，并根據建立的所述多元線性回歸方程分別計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
[0011]通過上述技術方案，實現了同步、快速、安全的測定賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的目的。
[0012]本發明的其他特征和優點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013]圖1為本發明一種優選實施方式中對賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行測定的流程示意圖。
【具體實施方式】
[0014]以下對本發明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。
[0015]術語“擬合”是指已知某函數的若干離散函數值{fl，f2，...，fn}，通過調整該函數中若干待定系數f (入1，λ 2,, λ η)，使得該函數與已知點集的差別(最小二乘意義)最小。“多元線性回歸”指兩個或兩個以上的影響因素作為自變量來解釋因變量的變化，且當多個自變量與因變量之間是線性關系時，所進行的回歸分析就稱為多元線性回歸。
[0016]根據本發明提供的賴氨酸發酵液的分析方法，所述賴氨酸發酵液中含有賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮，其中，該方法包括:
[0017]采集多個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖，分別得到每個標準樣品的一系列的近紅外吸光度值，每個賴氨酸發酵液標準樣品中所含的上述同一種物質的濃度均不同；
[0018]分別獲得所述多個標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量；
[0019]根據獲得的多個一系列的吸光度值的變化趨勢，分別獲得分別與賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量變化趨勢一致的吸光度值，并根據該獲得的吸光度值分別與和其對應的賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行多元線性擬合，分別得到賴氨酸的含量與其近紅外吸光度值、發酵菌種的OD值與其近紅外吸光度值、還原糖的含量與其近紅外吸光度值和氨基氮的含量與其近紅外吸光度值的多元線性回歸方程；
[0020]采集賴氨酸發酵液待測樣品的近紅外光譜圖，并根據建立的所述多元線性回歸方程分別計算得到所述賴氨酸發酵待測液樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
[0021]本發明中，分別獲得所述多個標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的方法可以采用本領域常規的方法獲得，例如，當有測定待測物質的國標方法時，采用國標方法測定待測物質的含量；當沒有測定待測物質的國標方法時，采用本領域技術人員公知的行業統一的方法測定待測物質的含量。因此，優選情況下，利用茚三酮比色法測定賴氨酸的含量，本領域技術人員公知，茚三酮溶液在PH值為1.0-2.0的條件下測定賴氨時可專一性的與賴氨酸反應形成絡合物；利用酶標儀或分光光度計測定發酵菌種的OD值；利用GB_T5009.7-2003測定還原糖的含量；利用GB/T5009.5-1985測定氨基氮的含量。
[0022]近紅外光主要是對物質中的含氫基團X — H (X=C, N、O)振動的倍頻和合頻吸收，其中包含了大多數類型的有機化合物的組成和分子結構的信息。由于不同的有機物含有不同的基團，不同的基團有不同的能級，不同的基團和同一基團在不同物理化學環境中對近紅外光的吸收波長都有明顯差別，因此近紅外光譜可作為獲取信息的一種有效的載體。近紅外光照射時，頻率相同的光線和基團將發生共振現象，光的能量通過分子偶極矩的變化傳遞給分子；而近紅外光的頻率和樣品的振動頻率不相同，該頻率的紅外光就不會被吸收。因此，選用連續改變頻率的近紅外光照射某樣品時，由于樣品中不同的基團或不同樣品中的同一基團對不同頻率近紅外光的選擇性吸收，通過樣品后的近紅外光線在某些波長范圍內會變弱，透射出來的紅外光線就會攜帶所測物質的組分和結構的信息，也即，所測物質在不同頻率的近紅外光處的一系列吸光度值。當選取含量變化的大量的某樣品作為標準樣品時，結合大量該一系列吸光度值和含量值，將該一系列吸光度值和所測物質的含量進行擬合，便可得到出該物質的含量和其近紅外吸光度值的多元線性回歸方程。然后再通過測定待測物質的近紅外光譜信息以及根據所擬合的多元線性回歸方程，便可計算得出待測物質的含量。本發明中，近紅外光譜圖采集方法為本領域技術人員所公知，在此不再贅述。
[0023]如上所述的某物質的一系列近紅外光吸光度值和其含量之間建立起的--映射
的關系，也即所述多元線性回歸方程，通常稱之為“模型”。
[0024]因此，基于以上原理，本發明通過采集多個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光全光譜圖，分別得到每個標準樣品的一系列的近紅外吸光度值，并測定所述多個賴氨酸標準樣品中每個樣品的賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量，其中，每個賴氨酸發酵液標準樣品中所含的上述同一種物質的含量均不同。
[0025]由于所述賴氨酸發酵液標準樣品中同時含有賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮，所以所獲得的每個標準樣品中的 一系列近紅外光吸光度值包含了賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮的近紅外光吸光度值。所以，需要分析所述多個賴氨酸標準樣品中在每一個波長處的吸光度值的變化趨勢，分別尋找到所述多個一系列的近紅外光譜中吸光度值變化趨勢分別與賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量變化趨勢一致的I個或多個吸光度值。并根據該獲得的I個或多個吸光度值分別與和其對應的賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行多元線性擬合，得到賴氨酸的含量與其近紅外吸光度值、發酵菌種的OD值與其近紅外吸光度值、還原糖的含量與其近紅外吸光度值和氨基氮的含量與其近紅外吸光度值的多元線性回歸方程。
[0026]然后，再采集賴氨酸發酵液待測樣品的近紅外光譜圖，并根據建立的所述多元線性回歸方程分別計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量，從而實現本發明的目的。
[0027]通常情況下，當賴氨酸待測樣品所處的環境不同時(例如氣溫)，賴氨酸待測樣品的溫度也會有所變化，但一般情況下，賴氨酸待測樣品的最低溫不會低于24°C，最高溫不會高于33°C。所以，優選情況下，在測定賴氨酸發酵液標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的參考值以及采集近紅外光譜圖之前，先將賴氨酸發酵液標準樣品在24-33°C的溫度范圍內進行溫恒。
[0028]理論情況下，在24_33°C的溫度范圍內的溫度計可讀的每個有效溫度值下均應擬合所述多元線性回歸方程，然后根據賴氨酸發酵液待測樣品的溫度選擇與其溫度對應的多元線性回歸方程，分別計算得到賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
[0029]但一般情況下，根據本領域技術人員的實際操作經驗，在一定的溫度范圍內，賴氨酸發酵液中同一物質含量的測量值以及紅外光譜圖的變化很小，均在誤差允許的范圍內(賴氨酸含量符合GB8245 - 87《飼料級L 一賴氨酸鹽酸鹽》兩個平行試樣之差不得大于
0.2% ;還原糖符合GB_T5009.7-2003中重復性條件下兩次獨立測定結果差值不得超過算術平均值的10% ;氨基氮GB5009.5-2010中重復性條件下兩次獨立測定結果差值不得超過算術平均值的10%，OD沒有形成相關標準，但一般情況下，規定其相對誤差在±0.5%以內)。因此，為了節約時間以及簡化操作，優選情況下，將賴氨酸發酵液標準樣品按照24°C到小于260C，260C到小于28°C，28°C到小于30°C，30-33°C劃分為四個不同的溫度范圍；并根據所述賴氨酸發酵液標準樣品的溫度分別擬合上述4種不同物質在不同溫度范圍內的多元線性回歸方程。然后根據賴氨酸發酵液待測樣品的溫度選擇包括該溫度的溫度范圍的多元線性回歸方程，分別計算得到賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
[0030]根據本發明，為了保證賴氨酸發酵液標準樣品的代表性。優選情況下，在每個溫度范圍內所述賴氨酸發酵液標準樣品的樣品數至少為30個；更優選地至少為60個。所述賴氨酸發酵液標準樣品的選擇應該滿足待測物質的濃度分布均勻且包含整個發酵過程中待測物質濃度的最低值和最高值。一般情況下，整個發酵過程中，賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量在0-20重量％之間；發酵菌種的OD值在0-2之間；還原糖的含量在0-3重量％之間；氨基氮的含量在0-0.3重量％之間。因此，所述賴氨酸發酵液標準樣品中賴氨酸的含量在0-20重量％之間；發酵菌種的OD值在0-2之間；還原糖的含量在0-3重量％之間；氨基氮的含量在0-0.3重量％之間。其中，當所取賴氨酸發酵液樣品中以上某物質含量為O時，將其作為空白對照，并以此為基礎測定賴氨酸發酵液標準樣品中該物質的其它濃度。
[0031]根據本發明，在擬合所述多元線性回歸方程之前，為了去除明顯偏離測量結果的樣品以及去除樣品中的噪音信息，該方法還包括對得到的標準樣品的近紅外光譜圖，也即近紅外吸光度值進行前處理。所述前處理的方法為本領域技術人員所公知，例如，利用unscrambler軟件的user-defined程序或導數法進行數據的前處理，其中unscrambler軟件來源于挪威CAMO公司。
[0032]根據本發明，為了保證賴氨酸發酵液標準樣品以及待測樣品測量值和采集的近紅外光譜圖的準確性和代表性，優選情況下，每次測量及采集均重復3次，并以三次的均值作為代表值。
[0033]所述擬合的方法為本領域技術人員所公知,例如,使用所述unscrambler軟件并根據其說明書中的說明進行擬合。
[0034]根據本發明一種優選的實施方式,使用unscrambler軟件自動對所測定的賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖以及該發酵液標準樣品中以上4種物質的化學參考值進行多元線性回歸方程的擬合。該軟件能夠根據所選定的標準樣品的圖譜信息和變化規律以及各物質含量的變化規律，自動選取與各物質的含量變化規律最匹配的圖譜信息，以進行多元線性回歸方程的擬合。該方法還包括將含有所述擬合的多元線性回歸方程的計算機與近紅外分析儀進行關聯。所述進行關聯的方法為本領域技術人員所公知，例如，將同一溫度下擬合的以上4種物質的多元線性回歸方程共同創建一個CDF文件，然后將含有該文件的計算機與近紅外分析儀進行關聯。在這種情況下，當在近紅外分析儀中測定賴氨酸待測樣品的近紅外光譜圖時，并選定與其對應的溫度范圍內的CDF文件，CDF文件中的模型便可自動根據所測定的近紅外光譜圖信息選擇與其匹配的相對應的信息，分別進行以上4種物質的含量的計算，最后在計算機上直接顯示所述賴氨酸待測樣品中以上4種物質的含量。其中，⑶F文件是模型和樣品分析時的媒介，也即是樣品信息和數據庫對應的一條樞紐。通過媒介CDF文件將模型與應用軟件相聯，通過應用軟件掃出的光譜信息并將光譜通過CDF文件傳輸給模型數據庫，數據庫將掃描的信息通過與數據庫信息進行優選比對，從而得出結果O
[0035]以下將通過實施例對本發明進行詳細描述。
[0036]以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明并不限于上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思范圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發明的保護范圍。
[0037]另外需要說明的是，在上述【具體實施方式】中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合。為了避免不必要的重復，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。
[0038]此外，本發明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。
[0039]以下實施例中近紅外分析儀購自瑞典波通儀器有限公司(PERTENINATRUMENTSAB)，型號為DA7200 ;測定發酵菌種OD值所用分光光度計購自上海精密科學儀器有限公司，型號為7230G ；unscrambler軟件來源于挪威CAMO公司。
[0040]實施例
[0041](一)CDF文件的建立
[0042](I)將賴氨酸發酵液標準樣品分別維持在24°C到小于26°C，26°C到小于28°C，28°C到小于30°C，30-33°C四個不同的溫度范圍內，每個溫度范圍內賴氨酸發酵液標準樣品數為60。其中，賴氨酸的含量在0-20重量％之間；發酵菌種的OD值在0-2之間；還原糖的含量在0-3重量％之間；氨基氮的含量在0-0.3重量％之間。并且每個溫度范圍內所取賴氨酸發酵液標準樣品中所測定的物質在含量為O的基礎上，賴氨酸的含量以0.2-0.4重量％的含量差依次遞增；發酵菌種的OD值以約0.02-0.04的差值依次遞增；還原糖的含量以約
0.02-0.06重量％的含量差依次遞增；氨基氮的含量以約0.002-0.006重量％的含量差依次遞增，直至達到以上所述的最大值。
[0043]( 2 )使用近紅外分析儀采集每個溫度范圍內每個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖，每個標準樣品重復3次并取均值。
[0044](3)利用茚三酮比色法(茚三酮溶液pH值為1.5)測定賴氨酸的含量，利用分光光度計測定發酵菌種的OD值，利用GB/T5009.7-2008測定還原糖的含量，利用GB/T5009.5-1985測定氨基氮的含量，每個標準樣品重復3次并取均值。得到步驟(1)中每個溫度范圍內每個賴氨酸發酵液標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的化學參考值。
[0045](4)利用unscrambler軟件的user-defined程序對在每個溫度范圍內得到的標準樣品的近紅外光譜圖進行前處理，并利用unscrambler軟件將處理后的紅外光譜圖和測得的化學參考值分別進行多元線性擬合，得到每個溫度范圍內賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量與近紅外吸光度值的多元線性回歸方程。
[0046](5)將步驟(4)中每個溫度段內擬合的四種物質的多元線性回歸方程通過創建CDF文件，最終將含有所述擬合的多元線性回歸方程的CDF文件的計算機與近紅外分析儀進行關聯。也即，共創建4個不同溫度段的CDF文件。
[0047](6)按照《糧油檢驗近紅外分析定標模型驗證和網絡管理與維護通用規則》對步驟
(4)中擬合的多元線性回歸方程進行評價，其中，在24°C到小于26 °C的溫度范圍內建立的多元線性回歸方程的評價結果見表1。
[0048]表1
[0049]
多元線性回歸方程I建模數據數量(個)fpc[rmse
賴氨酸多元線性回歸方程 6040.43
OD值多元線性回歸方程608004
還原糖多元線性回歸方程 605?ΤΤ?
氨氮標多元線性回歸方程 60I0.023
標準要求多元線性回歸方程^^30^8此值越低越好
[0050]PC值是反映主成份分析的指標，RMSE指的是校正標準偏差，反映模型的精度，在PC值符合的條件下RMSE越低，模型精度越好。
[0051]其余溫度范圍內的多元線性回歸方程評價結果與表1相似，因此，以上擬合的賴氨酸發酵液中各物質的多元線性回歸方程均符合標準。
[0052](二)測定賴氨酸待測發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量:
[0053](I)隨機選取5個賴氨酸待測發酵液樣品，分別標號為樣品1、樣品2、樣品3、樣品4和樣品5。測定賴氨酸待測樣品的溫度，所述5個待測樣品的溫度分別為25°C、26°C、28°C、30°C和33°C。根據測定的賴氨酸待測樣品的溫度選擇(一)的步驟(5)中相對應溫度范圍的CDF文件。
[0054](2)利用近紅外分析儀與步驟(1)中選定的⑶F文件對賴氨酸待測發酵液樣品進行賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量的測定，其中，對賴氨酸待測發酵液樣品重復測定3次，分別記作測定值1、測定值2和測定值3，記錄數據，結果見表 2-5。
[0055](3)按照(一)的步驟(3)中的方法對每個賴氨酸待測發酵液樣品中的賴氨酸的含量、酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行測定，其中，每個樣品重復測定3次并取均值，記錄數據并將其記作標準值。
[0056]圖1為按照本實施例的方法對賴氨酸發酵液中賴氨酸的含量、發酵菌種OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行測定的流程示意圖。
[0057](4)檢驗采用本發明的方法測定的賴氨酸的含量是否符合《中華人民共和國國家標準GB/T18868-2002飼料中水分、粗蛋白質、粗纖維、粗脂肪、賴氨酸、蛋氨酸快速測定近紅外光譜法》的規定；測定的OD值的平行樣品間的標準偏差以及測定值與標準值之間的相對誤差是否在±0.5%之內；測定的還原糖的含量是否符合《GB/T5009.7-2003中華人民共和國國家標準食品中還原糖的測定》的規定；測定的氨基氮的含量是否符合《中華人民工和國城鎮建設行業標準城市污水氨氮的測定CJ/T75-1999》和《中華人民共和國國家標準GB5009.5-2010食品安全國家標準食品中蛋白質的測定》的規定，結果見表2_5。
[0058]表 2
[0059]
【權利要求】
1.一種賴氨酸發酵液的分析方法，所述賴氨酸發酵液中含有賴氨酸、發酵菌種、還原糖和氨基氮，其特征在于，該方法包括: 采集多個賴氨酸發酵液標準樣品的近紅外光譜圖，分別得到每個標準樣品的一系列的近紅外吸光度值，每個賴氨酸發酵液標準樣品中所含的上述同一種物質的含量均不同； 分別獲得所述多個標準樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量； 根據獲得的多個一系列的吸光度值的變化趨勢，分別獲得分別與賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量變化趨勢一致的吸光度值；并根據該獲得的吸光度值分別與和其對應的賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量進行多元線性擬合，分別得到賴氨酸的含量與其近紅外吸光度值、發酵菌種的OD值與其近紅外吸光度值、還原糖的含量與其近紅外吸光度值和氨基氮的含量與其近紅外吸光度值的多元線性回歸方程； 采集賴氨酸發酵液待測樣品的近紅外光譜圖，并根據建立的所述多元線性回歸方程分別計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，利用茚三酮比色法測定標準樣品中賴氨酸的含量，利用酶標儀或分光光度計測定標準樣品中發酵菌種的OD值，利用GB/T5009.7-2008測定標準樣品中還原糖的含量，利用GB5009.5-2010測定標準樣品中氨基氮的含量。
3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述賴氨酸發酵液標準樣品中賴氨酸的含量在0-20重量％之間；發酵菌種的OD值在0-2之間；還原糖的含量在0-3重量％之間；氨基氮的含量在0-0.3重量％之間。
4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述賴氨酸發酵液標準樣品的溫度為24-33°C。
5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，該方法還包括，測定賴氨酸發酵液待測樣品的溫度，并根據該溫度下的所述多元線性回歸方程，分別計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
6.根據權利要求4所述的方法，其中，所述賴氨酸發酵液標準樣品的溫度為24°C到小于 26°C，26°C到小于 28°C，28°C到小于 30。。和 30-33。。。
7.根據權利要求1-4和6中任意一項所述的方法，其中，該方法還包括，測定賴氨酸發酵液待測樣品的溫度，并根據該溫度所在溫度范圍內的所述多元線性回歸方程，分別計算得到所述賴氨酸發酵液待測樣品中賴氨酸的含量、發酵菌種的OD值、還原糖的含量和氨基氮的含量。
【文檔編號】G01N21/3577GK103487398SQ201310461690
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月30日 優先權日:2013年9月30日
【發明者】熊結青, 盧宗梅, 陳影, 沈愛芳 申請人:中糧生物化學（安徽）股份有限公司