一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法

一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法
【專利摘要】本發明公開了一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。該試劑盒包括反應緩沖液和Lambda游離輕鏈抗體溶液，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫-20的濃度為11～16ml/L。本發明的試劑盒解決了Lambda游離輕鏈比濁測定中的非特異反應問題，為臨床醫生提供可靠的Lambda游離輕鏈測定結果作為診斷參考，以便充分發揮膠乳增強免疫比濁方法學速度快、通量高的優勢，縮短檢測時間，利于臨床應用和病人診斷。
【專利說明】一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物【技術領域】，尤其涉及一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。
【背景技術】
[0002]免疫球蛋白(Ig)輕鏈分為K (kappa)和λ (lambda) 2個型別，每個Ig分子上只有一個型別的輕鏈，人類K (kappa)和λ (lambda)的比例為6:4。輕鏈為能自由通過腎小球基底膜的小分子蛋白質，在腎小管被重吸收回到血液循環中，所以正常人尿中只有少量輕鏈存在。當人體發生代謝失調和多發性骨髓瘤時，血液中出現大量游離輕鏈，并由尿中排出，即為Bence-Jones蛋白(本周蛋白)。在正常人體內，血清κ型游離輕鏈為3?19mg/L, λ型游離輕鏈為6?26mg/L, κ/λ比值為0.26?1.65。異常情況的κ型游離輕鏈以及和K/λ比值、或異常λ型游離輕鏈和K /λ比值、或同時三者均異常等情況，對單克隆性Y球蛋白增多癥(monoclonal gammopathies, MGP)的敏感性為88%?98% ;對非分泌性骨髓瘤(nonsecretory myeloma, NSM)的敏感性為65%?70%,有助于單克隆輕鏈病、AL-淀粉樣變的早期診斷，也可用于化療或自身外周血干細胞移植后是否復發的監測，如果化療或移植效果好，則病患血清K型游離輕鏈、λ型游離輕鏈以及K/λ比值均在正常水平或相比治療前有明顯改善。
[0003]膠乳增強比濁方法可在全自動生化儀上測定λ型游離輕鏈，速度快、通量高。對于游離輕鏈的測定，國內目前主要使用英國Binding site公司的Freelite系列測定試齊U，可以通過膠乳增強比池方法測定Lambda游離輕鏈；但在臨床應用中，Freelite系列的Lambda游離輕鏈測定試劑存在大量的非特異反應，造成很多結果與病人實際情況不符合，不僅不能給醫生診斷帶來參考，還容易誤導醫生判斷，目前在國內醫院推廣應用很有限。
[0004]同時，發明人使用按照常規方式制備的Lambda游離輕鏈試劑，在未使用該特殊發明方法時也出現與Freelite試劑類似的非特異反應情況；由于不論是Freelite系列Lambda游離輕鏈測定試劑還是發明人自行制備的Lambda游離輕鏈試劑,均存在臨床測定非特異反應嚴重的問題，因此，可以認為非特異反應嚴重是Lambda游離輕鏈比濁測定試劑盒制備中一大共同難點。

【發明內容】

[0005]本發明所要解決的技術問題在于為了克服現有的Lambda游離輕鏈測定非特異反應的缺陷，提供了一種測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒及方法。本發明的測定方法可以得到可靠的Lambda游離輕鏈測定結果。
[0006]本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的:
[0007]本發明提供了一種采用膠乳增強比濁方法測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒，其包括反應緩沖液(Rl試劑)和Lambda游離輕鏈抗體溶液(R2試劑)，其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫-20的濃度為11?16ml/L。[0008]其中，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中的Lambda游離輕鏈抗體較佳地為兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體,更佳地為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體(即 Dako 公司的 Polyclonal Rabbit Ant1-Human Lambda Free Light Chains,貨號為AOlODo
[0009]其中，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液的組成較佳地為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體(貨號為A0101) 0.5mg/ml、膠乳微球3mg/ml、吐溫-2011?16ml/L和防腐劑Proclin-3000.3ml/L。上述組成中，膠乳微球可購于國際知名膠乳供應商，如Bangslab公司或JSR公司。
[0010]其中，所述的反應緩沖液可為本領域Lambda游離輕鏈濃度測定方法中膠乳增強比濁方法常規使用的反應緩沖液，優選反應緩沖液的組成為4-羥乙基哌嗪乙磺酸(Hepes)100mmol/L、氯化鈉 150mmol/L、吐溫 _201ml/L 和防腐劑 Proclin_300 0.3ml/L。
[0011]本發明還提供了一種測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其包括下述步驟:采用膠乳增強比濁方法，將待測樣品與上述反應緩沖液和Lambda游離輕鏈抗體溶液混合后，計算吸光度變化ΛΑ，與標準品的工作曲線比較即可得到待測樣品的Lambda游離輕鏈濃度，其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫-20的濃度為11?16ml/L。
[0012]本發明中，所述的膠乳增強比濁方法是指一種在全自動生化儀上測定Lambda游離輕鏈濃度的常用方法，一般在相同的基本參數下(波長、方法學、樣本試劑比例、反應時間)，先使用確定濃度的標準品在全自動生化儀使用對應的測定試劑進行校準測試，得到對應的測定試劑的校準曲線(工作曲線)，然后，使用相同的測定試劑，在全自動生化儀上測試待測樣品，由全自動生化儀對照校準曲線自動計算出待測樣品中被測物含量；具體操作可參見《全國臨床檢驗操作規程第三版》(東南大學出版社，書號:9787564105839，2006年11月)及各儀器使用說明書。
[0013]其中，所述的全自動生化儀較佳地為型號為Olympus AU480或Hitachi7170的全
自動生化儀。
[0014]其中，所述的反應緩沖液可為本領域Lambda游離輕鏈濃度測定方法中膠乳增強比濁方法常用的反應緩沖液(Rl試劑)；所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液可為本領域Lambda游離輕鏈濃度測定方法中膠乳增強比濁方法常用的Lambda游離輕鏈抗體溶液(R2試劑)。
[0015]其中，所述的吸光度變化ΛΑ可由下述方法得到:將待測樣品與反應緩沖液混合后，37°C恒溫5分鐘，再加入Lambda游離輕鏈抗體溶液，30秒后測定吸光度為A1 ;37°C恒溫4分30秒，測定吸光度為A2,計算吸光度變化Λ A=A2-Ap
[0016]其中，所述的工作曲線可由下述方法得到:將確定濃度的標準品與反應緩沖液混合后，37°C恒溫5分鐘，再加入Lambda游離輕鏈抗體溶液，30秒后測定吸光度為Atll ;37°C恒溫4分30秒，測定吸光度為Atl2，計算吸光度變化AAci=Aci2-Atll,以AAtl與標準品的確定濃度作圖，即可。
[0017]其中，所述的待測樣品較佳地為血清和/或骨髓分離血清。
[0018]在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
[0019]本發明所用試劑和原料均市售可得。[0020]本發明的積極進步效果在于:
[0021](I)本發明解決了 Lambda游離輕鏈比濁測定中的非特異反應問題，為臨床醫生提供可靠的Lambda游離輕鏈測定結果作為診斷參考，以便充分發揮膠乳增強免疫比濁方法學速度快、通量高的優勢，縮短檢測時間，利于臨床應用和病人診斷。
[0022](2)本發明使用的方法簡單有效，原料無毒且方便購買，利于生產放大和推廣應用。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1為A試劑盒的工作曲線。
[0024]圖2為Α-a試劑盒的工作曲線。
[0025]圖3為Α-b試劑盒的工作曲線。
[0026]圖4為A-a試劑盒與A_b試劑盒的測定結果的相關性曲線。
【具體實施方式】
[0027]下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0028]下述實施例中的全自動生化儀為型號為Olympus AU480的全自動生化儀。
[0029]本發明采用膠乳增強比濁方法在全自動生化儀上測定Lambda游離輕鏈濃度的操作可參見《全國臨床檢驗操作規程第三版》(東南大學出版社，書號:9787564105839，2006年11 月)。
[0030]A試劑盒(購于上海艾柯特醫療產品有限公司)中的反應緩沖液(Rl試劑)和Lambda游離輕鏈抗體溶液(R2試劑)的組成如下:
[0031]A試劑盒中反應緩沖液(Rl試劑)的組成
[0032]
【權利要求】
1.一種采用膠乳增強比濁方法測定Lambda游離輕鏈濃度的試劑盒，其包括反應緩沖液和Lambda游離輕鏈抗體溶液,其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中吐溫_20的濃度為11?16ml/L。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中的Lambda游離輕鏈抗體為兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體。
3.如權利要求2所述的試劑盒,其特征在于,所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液中的Lambda游離輕鏈抗體為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體。
4.如權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述的Lambda游離輕鏈抗體溶液的組成為Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游離輕鏈抗體0.5mg/ml、膠乳微球3mg/ml、吐溫-2011 ?16ml/L 和防腐劑 Proclin-3000.3ml/L。
5.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的反應緩沖液的組成為4-羥乙基哌嗪乙橫酸 100mmol/L、氯化鈉 150mmol/L、吐溫 _201ml/L 和防腐劑 Proclin-3000.3ml/L。
6.一種測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其包括下述步驟:采用膠乳增強比濁方法，將待測樣品與如權利要求1?5中任一項所述的反應緩沖液和Lambda游離輕鏈抗體溶液混合后，計算吸光度變化Λ A，與標準品的工作曲線比較即可得到待測樣品的Lambda游離輕鏈濃度。
7.如權利要求6所述的測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其特征在于，所述的吸光度變化ΛΑ由下述方法得到:將待測樣品與反應緩沖液混合后，37°C恒溫5分鐘，再加入Lambda游離輕鏈抗體溶液，30秒后測定吸光度為A1 ;37°C恒溫4分30秒，測定吸光度為A2,計算吸光度變化AA=A2-A115
8.如權利要求6所述的測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其特征在于，所述的工作曲線由下述方法得到:將確定濃度的標準品與反應緩沖液混合后，37°C恒溫5分鐘，再加入Lambda游離輕鏈抗體溶液，30秒后測定吸光度為Atll ;37°C恒溫4分30秒，測定吸光度為Atl2，計算吸光度變化ΛAci=Aci2-Atll，以AAtl與標準品的確定濃度作圖，即可。
9.如權利要求6所述的測定Lambda游離輕鏈濃度的方法，其特征在于，所述的待測樣品為血清和/或骨髓分離血清。
【文檔編號】G01N21/31GK103698284SQ201310396462
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年9月3日 優先權日:2013年9月3日
【發明者】王金鳳, 蔣欣 申請人:柏榮診斷產品（上海）有限公司