氟甲喹快速檢測試紙卡及制備方法

氟甲喹快速檢測試紙卡及制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種氟甲喹快速檢測試紙卡及制備方法，試紙卡包括外殼和試紙芯，試紙芯包括底板和底板上的樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，膠體金標記墊吸附有氟甲喹的特異性抗體，檢測反應區設有氟甲喹偶聯載體蛋白溶液印制的檢測印跡，以及用羊或（兔）抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG溶液印制的對照印跡；氟甲喹特異性抗體為膠體金標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體。制備時底座和面板嵌合在一起，面板上檢測窗與試紙芯檢測反應區對應，加樣孔與試紙芯樣品墊對應。該試紙卡特異性強、敏感性高，檢測簡便、快速、時效性強，結果顯示形象、直觀、準確，檢測費用低，適用范圍廣，便于推廣。
【專利說明】氟甲喹快速檢測試紙卡及制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種檢測氟甲喹的器具，特別是涉及一種快速檢測氟甲喹的試紙卡及制備方法。
技術背景
[0002]氟甲喹是氟喹諾酮類抗生素，具有抗菌普廣、殺菌活性強、體內分布廣泛等等特點，并且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性。目前，廣泛應用于畜禽和水產養殖中。氟甲喹作為用于食品類動物中的藥物，其在動物可食性組織和產品中的殘留致癌毒性備受關注。國家對其在不同肉品中最高殘留量做了嚴格的規定。因為氟甲喹價格低廉，抗菌普廣、殺菌活性強，養殖戶盲目追求預防和治療效果，人為超量添加，造成在肉品中殘留超標的現象普遍存在。因此，精確檢測肉品中氟甲喹殘留量非常重要。
[0003]目前，測定氟甲喹的方法多為高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用、毛細管區帶電泳與質譜聯用、酶聯免 疫試劑盒等法。這些方法檢測時間一般較長，檢測不方便，檢測成本高，對檢測人員素質要求高，嚴重制約了在實際檢測中的應用，難以推廣。由于這些方法的局限性和嚴重滯后性，使監控氟甲喹的非法使用變得困難，無法保證食品安全監控的有效性。

【發明內容】

[0004]本發明要解決的技術問題:提供一種特異強、靈敏度高，能快速、簡便地檢測氟甲喹的試紙卡及制備方法。
[0005]本發明的技術方案是:
一種氟甲喹快速檢測試紙卡，含有外殼和位于外殼內的試紙芯，試紙芯包括底板，底板上依次固定黏貼有樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，所述膠體金標記墊吸附有氟甲喹的特異性抗體，所述檢測反應區設有氟甲喹偶聯載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對照印跡；所述氟甲喹特異性抗體為膠體金標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體。
[0006]所述氟甲喹偶聯載體蛋白溶液是由以下方法制備的:
稱取2 mg氟甲喹溶解于500 μ?的DMF溶劑中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室溫避光反應24h，得到活化的氟甲喹液；稱取載體蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，將活化的氟甲喹液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h ;將反應產物置于4°C層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天,離心除去沉淀,得到氟甲喹載體蛋白的偶聯物，分裝，_20°C保存，備用。
[0007]所述氟甲喹偶聯載體蛋白為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血藍蛋白。
[0008]所述底板由硬質塑膠條或不吸水的硬紙條制成；所述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水墊用吸水濾紙或濾油紙制成；所述檢測反應區用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成；所述膠體金標記墊用玻璃纖維、聚酯膜、醋酸纖維或尼龍膜制成。
[0009]所述外殼由底座和面板構成，底座和面板通過嵌合連在一起，底座上設有放置試紙芯的凹槽，面板上設有檢測窗、加樣孔，檢測窗與試紙芯的檢測反應區相對應，加樣孔與試紙芯的樣品墊相對應。
[0010]所述隱形檢測印跡和隱形對照印跡的排列方式為“ I |”、“ + + ”或“.?”。
[0011]所述氟甲喹快速檢測試紙卡的制備方法，包括以下步驟:
(O氟甲喹與載體蛋白的偶聯:
稱取2 mg氟甲喹溶解于500 μ?的DMF溶劑中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室溫避光反應24h，得到活化的氟甲喹液；稱取載體蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，將活化的氟甲喹液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h ;將反應產物置于4°C層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天,離心除去沉淀,得到氟甲喹載體蛋白的偶聯物，分裝，_20°C保存，備用；
(2)抗氟甲喹特異性抗體的制備； (3)氟甲喹特異性抗體的制備；
在沸騰的200mL 0.01-0.02%氯金酸溶液中加入新鮮配制的I %檸檬酸鈉8mL，獲得直徑為10-20nm的膠體金溶液，用0.lmol/L的K2CO3調pH值至8.5-9.5，置2-8°C保存，備用；以1:2000的標記比將待標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體加入pH8.5-9.5的金溶膠中，標記IOmin后加入20 %的PEG10000至終濃度為0.05 %，4°C、1500-3000rpm離心20min,除去未結合的膠體金顆粒,4°C、15000rpm離心Ih,棄上清,獲初步純化的膠體金標記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進行分離純化，獲得氟甲喹膠體金標記抗體；
(4)羊抗或兔抗小鼠IgG抗體的制備；
用氟甲喹特異性抗體制備膠體金標記墊；用氟甲喹偶聯載體蛋白溶液印制隱形檢測印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗體溶液印制隱形對照印跡；然后在底板上依次固定黏貼樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，組裝成試紙芯，將試紙芯裝于外殼中進而組裝成試紙卡。
[0012]本發明的檢測試紙卡具有下列優點:
①特異性強，敏感性高。該膠體金層析檢測試紙卡以膠體金標記高親和力的單克隆抗體或多克隆抗體為基礎制備而成，膠體金標記物中金顆粒與抗體分子之間無共價鍵形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結合，膠體金標記對抗體的特異性和親和力影響很小，且具有較高的標記率。因此，試紙卡具有較強的特異性和較高的敏感性，檢出氟甲喹最低限量可達到IOppb。
[0013]②簡便、快速、時效性強。使用該檢測試紙卡，無需任何其它試劑和儀器，可現場操作，試紙卡加入被檢樣品液后，在5分鐘內即可判定檢測結果。
[0014]③結果顯示形象、直觀、準確。試紙卡以顯示紅色線“ I ”和“ I I ”作為檢測結果的陽性和陰性標記，即在檢測反應區上顯示一條紅色線“ I ”時，表示在被檢樣品中含有氟甲喹；顯示兩條紅色線“ I I ”時，表示在被檢樣品中不含氟甲喹。結果判定形象、直觀、準確，簡單明了，不易出現假陽性和假陰性等人為誤判。[0015]④節省費用，適用范圍廣，便于推廣。使用檢測試紙卡，比用儀器分析和進口 ELISA試劑盒的費用大幅下降。此種檢測工具不需要專業人員操作，可快速準確檢測樣品的氟甲喹的含量，彌補了分光光度高效液相色譜檢測的不足。另外，試紙卡適用范圍廣，可滿足不同層次人員需要，包括實驗室檢驗、口岸檢驗、集貿市場衛生監督、加工企業和養殖場戶等，便于推廣應用，具有廣闊的市場前景和明顯的經濟社會效益。
[0016]⑤本發明采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，該方法反應過程比較溫和，可在常溫和中性PH條件下進行，易于操作和控制。采用EDC法制備氟甲喹載體蛋白偶聯物，該方法操作步驟只需兩步就可完成，減少了對樣品的處理過程，利于提高偶聯的效率。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1、氟甲喹快速檢測試紙卡俯視結構示意圖；
圖2、圖1的試紙卡剖面結構示意圖；
圖3、氟甲喹與載體蛋白偶聯的反應原理圖。
[0018]圖中，1:底板 ，2:樣品墊，3:膠體金標記墊，4:檢測反應區，5:隱形檢測印跡，6:隱形對照印跡，7:吸水墊，8:加樣孔，9:檢測窗，10:面板，11:固定槽，12:底座，13:凹槽。
【具體實施方式】
[0019]本發明中如沒有特別說明，其中的百分含量均為重量含量。
[0020]實施例一:氟甲喹快速檢測試紙卡,參見圖1、圖2,包括外殼和位于外殼內的試紙芯，圖中底板1、樣品墊2、膠體金標記墊3、檢測反應區4、隱形檢測印跡5、隱形對照印跡6和吸水墊7共同組成試紙芯；試紙卡外殼材料為工程塑料，底座12上設有試紙芯的固定槽11 ;面板10上的加樣孔8與試紙芯的樣品墊2相對應；面板10上設有和底座相結合的凹槽13，在面板10上的檢測窗9與試紙芯的檢測反應區4相對應，是觀察判定結果的窗口，其旁邊印有T和C，分別與檢測反應區4上的隱形檢測印跡5和隱形對照印跡6相對應。試紙卡的底座和面板通過嵌合連在一起，檢測卡外殼為長條形扁平狀塑料殼，長7cm，寬0.6cm,厚
0.3cm,殼壁厚 0.1cm。
[0021]膠體金標記墊3采用有膠體金標記的抗氟甲喹多克隆抗體；檢測反應區4采用硝酸纖維素膜；隱形檢測印跡5用氟甲喹-載體蛋白偶聯物在檢測反應區4上印制，載體蛋白為牛血清白蛋白BSA ;隱形對照印跡6用兔抗小鼠IgG抗體溶液在檢測反應區4上印制，兩條線平行排列組合為“ I I ”;吸水墊7用吸水濾紙制成。將樣品墊2、膠體金標記墊3、檢測反應區4、吸水墊7從右至左依次粘貼固定在底板I上，彼此之間交界處纖維互相搭接。
[0022]要制成氟甲喹檢測試紙卡，首先要制備偶聯氟甲喹載體蛋白和氟甲喹膠體金標記物，從而制備隱形檢測印跡和膠體金標記物；其次需制備羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體，用于制備隱形對照印跡。
[0023](I)氟甲喹與載體蛋白偶聯
采用EDC法與牛血清蛋白合成氟甲喹完全抗原，反應原理參見圖3。
[0024]稱取2 mg氟甲喹溶解于500 μ?的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入2 mg NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)和2 mg EDC (1_ (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)，室溫避光反應24h，得到活化的氟甲喹液；稱取牛血清蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，將活化的氟甲喹液逐滴加入BSA溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h ;將反應產物置于4°C層析柜中用0.0lmol/L的PBS透析3天,離心除去沉淀,得到氟甲喹載體蛋白的偶聯物，分裝，_20°C保存，備用。
[0025](2)抗氟甲喹多克隆抗體的制備
用氟甲喹載體蛋白偶聯物免疫新西蘭白兔，免疫劑量為200μg~500μg/次，背部皮下分4~6點注射。首免，用無菌PBS溶解氟甲喹載體蛋白偶聯物，與等量FCA混合，充分乳化；加強免疫，用無菌PBS溶解氟甲喹載體蛋白偶聯物，與等量FIA混合，充分乳化，首免后2~3周進行，連續免疫4~5次，每次間隔2~3周，最后一次免疫后10~15天，以ELISA法測定其效價達到IO5以上時，采血并分離收集高免血清。以飽和硫酸銨鹽析法提取IgG抗體，即取I份高免血清加2份PBS (pH7.2)混勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，再以適量PBS (pH7.2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度33%，置4°C冰箱2h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，以適量PBS (pH7.2)溶解沉淀，置4°C冰箱內用PBS (pH7.2)透析48~72h，中間換液數次，4°C、12000rpm離心15min，收集上清，得純化的抗氟甲喹多克隆抗體，-20°C凍存，用于制備膠體金標記墊。
[0026]( 3)氟甲喹膠體金標記物和膠體金標記的玻璃纖維棉的制備
采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，即在沸騰的200mL 0.01~0.02%氯金酸溶液中加入新鮮配制的1%檸檬酸鈉8mL，獲得直徑約15nm的膠體金溶液，用0.lmol/L K2CO3調pH值至8.5~9.5，置2~8°C保存備用。以1:2000的標記比將待標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體加入PH8.5~9.5的金溶膠中，標記IOmin后，加入20%的PEG10000至終濃度為0.05%, 4°C、1500~3000rpm離心20min,除去未結合的膠體金顆粒,4°C、15000rpm離心Ih,棄上清,獲初步純化的膠體金標記物蛋白混合物,再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進行分離純化，獲得氟甲喹膠體金標記抗體。
[0027]將1:100~500稀釋的膠體金標記抗體吸附于精制玻璃纖維棉中，4°C低溫真空干燥，制備氟甲喹膠體金標記物玻璃纖維棉。
[0028](4)羊抗或兔抗小鼠IgG抗體的制備
以飽和硫酸銨提取氟甲喹陰性小鼠血清IgG，即取I份小鼠血清加2份PBS (pH7.2)混勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，再以適量PBS (pH7.2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度33%，置4°C冰箱2h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，以適量PBS (pH7.2)溶解沉淀，置4°C冰箱內用PBS (pH7.2)透析48h，中間換液3次，4°C、12000rpm離心15min，收集上清，以紫外分光光度計測定其蛋白濃度，以50Pg~100Pg/kg體重的小鼠血清IgG經皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3~4次,末次注射10天后，以ELISA測定其血清效價達到1:2000以上時，心臟或動脈采血，分離收集高免血清，以飽和硫酸銨提取羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體(方法與提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，用于試紙卡隱形對照印跡的制備。[0029](5)檢測反應原理
當試紙卡的加樣孔加入待測樣品溶液后，待測溶液通過虹吸作用帶動待測氟甲喹及膠體金標記物中的膠體金標記物一起向檢測反應區擴散，并最終滲入吸水墊。在擴散過程中，待測氟甲喹可與膠體金標記物相結合，進而封閉膠體金標記物上氟甲喹的抗原結合點，阻止膠體金標記物與纖維素膜上偶聯氟甲喹載體蛋白的隱形檢測印跡結合，不顯示隱形檢測印跡，而羊或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體則可與膠體金標記物結合，形成紅色隱形對照印跡“ I ”，即顯示一條紅色線“ I ”為陽性表示。反之樣品溶液中無氟甲喹則不能阻止膠體金標記物與纖維素膜上偶聯氟甲喹載體蛋白的隱形檢測印跡結合，顯示紅色隱形檢測印跡“ I ”，同樣羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體也與膠體金標記物結合，顯示紅色隱形對照印跡“ I ”，形成兩條紅色線“ I I ”為陰性表示。如果纖維素膜上沒有紅色線顯示，則表明試紙卡已失效。
[0030](6)樣品制備和檢測方法
檢測樣品為肉樣:取肉品2g，加入IOmL的提取液(提取液采用6.8g的KH2PO4溶解在500 mL的雙蒸水中，將其pH調節到7.0)，均質I分鐘，然后以4000轉/分的轉速離心10分鐘；收集上清，沉淀物再抽提一次；將兩次的上清混合，以10000轉/分的轉速離心10分鐘，取上清用于檢測。
[0031]檢測時，將試紙卡平放，從加樣孔滴加待測樣品液,5分鐘內從檢測窗判定檢測結
果O
[0032]結果判定:如在檢測反應區對應T的位置顯示有一條紅色線“ I ”時，表示檢測結果為陽性，說明在待測樣品中含有氟甲喹；如在檢測反應區對應T、C的位置顯示有兩條紅色線“ I I ”時，表示檢測結果為陰性，說明待測樣品不含氟甲喹；如在檢測反應區沒有紅色線顯示，則表明試紙卡已失效。
[0033]實施例二:檢測試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在于:以抗氟甲喹單克隆抗體替代抗氟甲喹多克隆抗體，制備氟甲喹膠體金標記物和膠體金標記墊；偶聯氟甲喹的載體蛋白為雞卵清白蛋白0VA，用羊抗兔IgG替代兔抗小鼠IgG抗體溶液在檢測反應區上制備對照印跡。隱形檢測印跡和隱形對照印跡排列為“ + ”或“.?”。
`[0034]其它包括檢測樣品、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
[0035]實施例三:檢測試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在于:
底板用硬質塑膠條制成；樣品墊用尼龍膜制成；檢測反應區采用純硝酸纖維素膜；氟甲喹載體蛋白為雞卵清白蛋白；隱形對照印跡用羊抗小鼠IgG抗體溶液印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
[0036]實施例四:檢測試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在于:
底板用不吸水的硬紙條制成；樣品墊用聚偏二氟乙烯膜制成；檢測反應區采用純硝酸纖維素膜；氟甲喹載體蛋白為人血清白蛋白；隱形對照印跡用羊抗小鼠IgG抗體溶液印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
[0037]實施例五:檢測試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在于:
底板用不吸水的硬紙條制成；樣品墊用聚酯膜制成；以抗氟甲喹單克隆抗體制備氟甲喹膠體金標記物；檢測反應區采用羧化纖維素膜；氟甲喹載體蛋白為人血清白蛋白；隱形對照印跡用羊抗兔IgG抗體溶液印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
【權利要求】
1.一種氟甲喹快速檢測試紙卡，含有外殼和位于外殼內的試紙芯，試紙芯包括底板，底板上依次固定黏貼有樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，其特征是:所述膠體金標記墊吸附有氟甲喹的特異性抗體，所述檢測反應區設有氟甲喹偶聯載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對照印跡；所述氟甲喹特異性抗體為膠體金標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征是:所述氟甲喹偶聯載體蛋白溶液是由以下方法制備的: 稱取2 mg氟甲喹溶解于500 μ?的DMF溶劑中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室溫避光反應24h，得到活化的氟甲喹液；稱取載體蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，將活化的氟甲喹液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h ;將反應產物置于4°C層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天,離心除去沉淀,得到氟甲喹載體蛋白的偶聯物，分裝，_20°C保存，備用。
3.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征是:所述氟甲喹偶聯載體蛋白 為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血藍蛋白。
4.根據權利要求1-3任一項所述的試紙卡，其特征是:所述底板由硬質塑膠條或不吸水的硬紙條制成；所述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水墊用吸水濾紙或濾油紙制成；所述檢測反應區用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成；所述膠體金標記墊用玻璃纖維、聚酯膜、醋酸纖維或尼龍膜制成。
5.根據權利要求1 -3任一項所述的試紙卡，其特征是:所述外殼由底座和面板構成，底座和面板通過嵌合連在一起，底座上設有放置試紙芯的凹槽，面板上設有檢測窗、加樣孔，檢測窗與試紙芯的檢測反應區相對應，加樣孔與試紙芯的樣品墊相對應。
6.根據權利要求1-5任一項所述的試紙卡，其特征是:所述隱形檢測印跡和隱形對照印跡的排列方式為“ I I ”、“ ++”或“..”。
7.權利要求1所述氟甲喹快速檢測試紙卡的制備方法，其特征是:所述制備方法包括以下步驟: (O氟甲喹與載體蛋白的偶聯: 稱取2 mg氟甲喹溶解于500 μ?的DMF溶劑中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室溫避光反應24h，得到活化的氟甲喹液；稱取載體蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13的mol/L的PBS溶液中，將活化的氟甲喹液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h ;將反應產物置于4°C層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天,離心除去沉淀,得到氟甲喹載體蛋白的偶聯物，分裝，_20°C保存，備用； (2)抗氟甲喹特異性抗體的制備； (3)氟甲喹特異性抗體的制備； 在沸騰的200mL 0.01-0.02%氯金酸溶液中加入新鮮配制的I %檸檬酸鈉8mL，獲得直徑為10-20nm的膠體金溶液，用0.lmol/L的K2CO3調pH值至8.5-9.5，置2-8°C保存，備用；以1:2000的標記比將待標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體加入pH8.5-9.5的金溶膠中，標記IOmin后加入20 %的PEG10000至終濃度為0.05 %，4°C、1500-3000rpm離心20min,除去未結合的膠體金顆粒,4°C、15000rpm離心lh,棄上清,獲初步純化的膠體金標記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進行分離純化，獲得氟甲喹膠體金標記抗體； (4)羊抗或兔抗小鼠IgG抗體的制備； 用氟甲喹特異性抗體制備膠體金標記墊；用氟甲喹偶聯載體蛋白溶液印制隱形檢測印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗體溶液印制隱形對照印跡；然后在底板上依次固定黏貼樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，組裝成試紙芯，將試紙芯裝于外殼中進而組裝成試紙卡。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征是:所述氟甲喹特異性抗體的制備方法如下: 在沸騰的200mL 0.0l-0.02%氯金酸溶液中加入新鮮配制的I %檸檬酸鈉8mL，獲得直徑為10-20nm的膠體金溶液，用0.lmol/L的K2CO3調pH值至8.5-9.5，置2-8°C保存，備用；以1:2000的 標記比將待標記的氟甲喹單克隆抗體或多克隆抗體加入pH8.5-9.5的金溶膠中，標記IOmin后加入20 %的PEG10000至終濃度為0.05 %，4°C、1500-3000rpm離心20min,除去未結合的膠體金顆粒,4°C、15000rpm離心lh,棄上清,獲初步純化的膠體金標記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進行分離純化，獲得氟甲喹膠體金標記抗體。
9.根據權利要求7所述的的制備方法，其特征是:所述氟甲喹偶聯載體蛋白為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血藍蛋白。
10.根據權利要求7所述的的制備方法，其特征是:所述底板由硬質塑膠條或不吸水的硬紙條制成；所述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水墊用吸水濾紙或濾油紙制成；所述檢測反應區用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成，所述膠體金標記墊用玻璃纖維、聚酯膜、醋酸纖維或尼龍膜制成； 所述外殼由底座和面板構成，底座和面板通過嵌合連在一起，底座上設有放置試紙芯的凹槽，面板上設有檢測窗、加樣孔，檢測窗與試紙芯的檢測反應區相對應，加樣孔與試紙芯的樣品墊相對應。
【文檔編號】G01N33/566GK103454422SQ201310334458
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月3日 優先權日:2013年8月3日
【發明者】王方雨, 張改平, 劉珍, 胡驍飛, 李青梅, 滕蔓, 邢廣旭 申請人:河南省農業科學院