快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法及其應用，采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜檢測、并通過對已知重樓皂甙的質譜裂解規律的分析，二級質譜碎片采用高能碰撞誘導解離(HCD)方式獲得，較常規的碰撞誘導解離CID能獲得更多的低質量端碎片，對化合物的結構解析十分有用，建立了采用高分辨質譜儀對未知的滇重樓皂甙組成進行快速研究鑒定的技術方法，采用液相高分辯質譜聯機檢測鑒定技術對滇重樓中未知甾體皂甙組成進行分析鑒定，共鑒定發現了滇重樓含有17種重樓皂甙、其中發現的3種新甾體皂甙還未有報道、5種為新發現的重樓皂甙組分。
【專利說明】快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥成分的檢測方法，特別涉及一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法及其應用。
【背景技術】
[0002]滇重樓是云南珍稀藥材品種，是《中國藥典》(2010版一部)重樓藥材的兩個基源品種之一，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于癰腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打疼痛、涼風抽搐等癥，是我國五十多種名優中成藥產品的主要原料藥。重樓皂甙是滇重樓主要的藥效成分，中國藥典中列明的滇重樓皂甙組分有4種、而有文獻報道發現的的重樓皂甙組分還有5種，現在對重樓皂甙的鑒定方法主要是采用柱色譜分離手段進行單體皂甙分離收集各種單體皂甙后再用核磁共振譜儀進行結構鑒定，花費研究的時間長達數月以上、分析成本昂貴。
[0003]因此，需要對傳統的檢測方法進行改進來對滇重樓皂甙未知組成進行分析鑒定，并具有分辨率高、質量精度高、靈敏度高、質量軸穩定性好、可有效提高滇重樓皂甙組成的分析通量和分析效果，對皂甙組分的識別效率高，同時定性和定量能力強，并且檢測成本低廉，可以方便地為滇重樓人工種植的品種選育提供一種快速經濟的品質鑒定技術。
【發明內容】
[0004]有鑒于此，本發明的目的在于提供一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法及其應用，具有分辨率高、質量精度高、靈敏度高、質量軸穩定性好、可有效提高滇重樓皂甙組成的分析通量和分析效果，對皂甙組分的識別效率高，同時定性和定量能力強，并且檢測成本低廉，可以方便地為滇重樓人工種植的品種選育提供一種快速經濟的品質鑒定技術。
[0005]本發明的一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法，包括以下步驟:
[0006]a.樣品提取:稱取適量滇重樓樣品用甲醇超聲提取離心分離過微孔濾膜，制得樣品溶液；
[0007]b.采用C18色譜柱:150X 2.1mmjym,以水和乙腈為流動相，進行梯度洗脫，梯度洗脫比例為O?2min，水為95體積份，乙腈為5體積份；2?5min，水為95 — 75體積份，乙腈為5 — 25體積份；5?20min，水為75 — 67體積份，乙腈為25 — 33體積份；20?45min,水為67 — 50體積份，乙腈為33 — 50體積份；45?52min,水為50 — 5體積份，乙腈為50 — 95體積份；設置流速為0.1?0.8min,檢測波長為190?210nm，進樣量為2?20 μ L,柱溫控制在20?45°C ;
[0008]c.采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜分析，采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜分析，質譜條件為:離子化方式HESI ( + )，噴霧電壓+3.2KV/-3.0KV,鞘氣40arb，輔助氣lOarb，毛細管加熱溫度:300°C，加熱溫度350°C，掃描方式:全掃；掃描范圍m/zlOO?1500 ;裂解方式HCD ；
[0009]進一步,步驟b中，設置流速為0.4min,檢測波長為203nm,進樣量為10 μ L,柱溫控制在30°C ；
[0010]進一步，步驟C中，全掃的分辨率70，000, 二級質譜分辨率17，500，常規碰撞能量為30，并以50%遞增；
[0011]本發明還公開一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法的應用，采用所述檢測方法快速鑒定滇重樓皂甙的組成。
[0012]本發明的有益效果:采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜檢測、并通過對已知重樓皂甙的質譜裂解規律的分析，建立了采用高分辨質譜儀對未知的滇重樓皂甙組成進行快速研究鑒定的技術方法，具有分辨率高、質量精度高、靈敏度高、質量軸穩定性好、可有效提高滇重樓皂甙組成的分析通量和分析效果，對皂甙組分的識別效率高，同時定性和定量能力強，并且檢測成本低廉，可以方便地為滇重樓人工種植的品種選育提供一種快速經濟的品質鑒定技術。
【具體實施方式】
[0013]實施例一
[0014]a.樣品提取:精密稱取滇重樓樣品0.2g用5ml甲醇溶解，超聲提取30min，配成含滇重樓皂甙0.04g/ml的樣品溶液，離心分離過0.2 μ m濾膜后測定；
[0015]b.液相色譜條件:
[0016]儀器:超高相液相色譜儀
[0017]色譜柱:C18柱(150X2.1mm, 5μπι)
[0018]流動相:Α為水相:純水，B為有機相:乙腈
[0019]梯度條件:
時間(min)A (體積比)B (體積比)
0^0295—95O *>—05
02-0595—7505—25
[0020]
05-2075—6725—33
20~4567—5033—50
45-5250—0550—95
[0021]流速0.4mL/min，進樣量:10 μ L，檢測波長為203nm，柱溫為30°C
[0022]c.質譜條件
[0023]儀器:四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜
[0024]質譜參數:離子化方式HESI ( + )，噴霧電壓+3.2KV/-3.0KV，鞘氣40arb，輔助氣lOarb，毛細管加熱溫度:300°C，加熱溫度350°C，掃描方式:全掃(分辨率70，000)，二級質譜(分辨率17，500，常規碰撞能量:30，并以50%遞增)；掃描范圍m/zlOO~1500 ;裂解方式HCD)。二級質譜碎片采用高能碰撞誘導解離(HCD)方式獲得，較常規的碰撞誘導解離CID能獲得更多的低質量端碎片，對化合物的結構解析十分有用。
[0025]鑒定結果[0026]采用液相高分辯質譜聯機檢測鑒定技術對滇重樓中未知留體皂甙組成進行分析鑒定，共鑒定發現了滇重樓含有17種重樓皂甙、其中發現的3種新留體皂甙還未有報道、5種為新發現的重樓皂甙組分。相關鑒定出的滇重樓皂甙組成如下表:
[0027]表1已鑒定出的滇重樓皂甙組分
[0028]
【權利要求】
1.一種快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: a.樣品提取:稱取適量滇重樓樣品用甲醇超聲提取離心分離過微孔濾膜，制得樣品溶液； b.采用C18色譜柱:150X2.1mmjym,以水和乙腈為流動相，進行梯度洗脫，梯度洗脫比例為O?2min,水為95體積份，乙腈為5體積份；2?5min,水為95 — 75體積份，乙腈為5 — 25體積份；5?20min，水為75 — 67體積份，乙腈為25 — 33體積份；20?45min，水為67 — 50體積份，乙腈為33 — 50體積份；45?52min，水為50 — 5體積份，乙腈為50 — 95體積份；設置流速為0.1?0.8min,檢測波長為190?210nm，進樣量為2?20 μ L，柱溫控制在20?45°C ; c.采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜分析，采用四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜分析，質譜條件為:離子化方式HESI ( + )，噴霧電壓+3.2KV/-3.0KV，鞘氣40arb，輔助氣lOarb，毛細管加熱溫度:300°C，加熱溫度350°C，掃描方式:全掃；掃描范圍m/zlOO?1500 ;裂解方式HCD。
2.根據權利要求1所述的快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法，其特征在于:步驟b中，設置流速為0.4min,檢測波長為203nm，進樣量為10 μ L，柱溫控制在30°C。
3.根據權利要求2所述的快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法，其特征在于:步驟c中，全掃的分辨率70，000，二級質譜分辨率17，500，常規碰撞能量為30，并以50%遞增。
4.根據權利要求1-3任一所述的快速鑒定滇重樓皂甙組成的檢測方法的應用，其特征在于:采用所述檢測方法快速鑒定滇重樓皂甙的組成。
【文檔編號】G01N30/88GK103472165SQ201310239001
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年6月17日 優先權日:2013年6月17日
【發明者】彭迎霞, 馬曉剛 申請人:云南出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心