專利名稱：一種檢測食醋中所含氨基酸的方法
技術領域：
本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，更具體的涉及蒸餾法、固相萃取柱提取凈化與離子色譜-電化學檢測器聯用技術檢測食醋中氨基酸含量的方法。
背景技術：
食醋作為一種調味品，在日常生活中為人們所必須；隨著食醋所具有的諸如消除疲勞、抗衰老以及軟化血管，降血脂，降低膽固醇等保健作用的凸顯，食醋在生活中也顯得越來越重要。醋中含有0.05% -3%的蛋白質，含氨基酸18種，其中人體必需的8種氨基酸均具備。醋的味道鮮美，醋味圓潤、柔和，這些均是氨基酸的功勞。多種氨基酸混合產生醋的美味和有機酸的酸味混合產生醋的芳香。食醋按生產工藝分有釀造食醋與配制食醋:(I)、釀造食醋在GB18187-2000國家標準中定義是單獨或混合使用各種含有淀粉、糖的物料或酒精，經微生物發酵釀制而成的液體調味品；其發酵工藝分為兩類:一類是固態發酵食醋，另一類是液態發酵食醋；(2)、配制食醋在SB10337-2000商業部標準中定義是以釀造食醋為主體，與冰乙酸、食品添加劑等混合配制而成的調味食醋，且配制食醋中釀造食醋的比例(以乙酸計)不得少于50%。由于釀造食醋周期長、成本高，加之我國的標準比較落后，使得一些不法之徒有機可乘，用食用冰醋酸勾兌成配制食醋用來冒充釀造食醋以牟取暴利，更可恨的是工業冰醋酸勾兌成人工醋(簡稱合成醋)這種劣質食醋不僅無營養價值，而且嚴重危害身體健康。根據現行的國家標準，釀造食醋的理化指標主要有:總酸(以乙酸計)、不揮發酸(以乳酸計)、可溶性無鹽固形物，無法制約冰醋酸勾兌成配制食醋和人工合成醋。使制假者用冰醋酸兌水稀釋后加入少量釀造食醋、焦糖色素、添加劑等就能達到釀造食醋的理化指標標準，披上“合格”的外衣進行銷售，給食品監管帶來困難。現有檢測方法一般通過柱前或柱后對氨基酸衍生后采用高效液相色譜對進行測定，這種方法衍生試劑費用較高，試驗操作較復雜，穩定性差。采用離子色譜法進行測定氨基酸一般通過大量的稀釋樣品來進行測定，靈敏度較低，一些微量的氨基酸無法進行檢測。因此急需一種檢測方法來準確定量檢出釀造食醋中18種氨基酸的含量特征指標，用以鑒別釀造食醋與配制食醋及合成醋，從而規范食醋行業，使其健康發展，確保食醋質量安全。
發明內容
為了鑒別釀造食醋與配制食醋及合成醋，本發明的目的在于公開了一種分析檢測食醋中18種氨基酸的方法，具體來說提供了一種利用蒸餾法濃縮富集、固相萃取柱提取凈化與離子色譜-電化學檢測器聯用技術檢測食醋中氨基酸化合物的方法，以對食醋中氨基酸進行定性和定量分析。本發明的目的是通過以下技術方案實現的:
一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟:(I)、對食醋待測樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測樣品中的揮發酸，并對氨基酸進行了濃縮富集；(2)、對步驟(I)的提取物用固相萃取柱進行提取凈化；(3)、對步驟(2)的凈化產物用離子色譜-電化學檢測器進行檢測，經過離子色譜分析后得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；(4)、配備18種氨基酸標準溶液，經過離子色譜分析后，得到18種氨基酸標準溶液色譜圖，所述離子色譜分析的條件與步驟(3)中的離子色譜分析的條件相同；(5)、將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進行對照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類；本技術方案中18種氨基酸標準溶液的配制過程為:分別稱取18種氨基酸單標樣(0.1g)用超純水配制成l OOOymol/L標準儲備溶液；分別量取18種氨基酸標準儲備溶液
5.0mL,用超純水定容至IOOmL,搖勻備用，配制成18種氨基酸標準溶液(50 μ mol/L)。上述技術方案所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(I)的具體過程為:吸取食醋試樣2mL進行水蒸汽蒸餾，當接收液到達ISOmL時，結束蒸餾，用超純水定容至IOmL，得到提取物。上述技術方案所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(2)的具體過程為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個固相萃取過程流速不超過lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮氣吹干，然后用去離子水溶解并稀釋，得到供離子色譜測定的凈化產物。上述技術方案所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(3)的具體過程為:對步驟(2)得到的凈化產物離子色譜-電化學檢測器聯用技術進行檢測，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；其中離子色譜條件為色譜柱=Amino PacPA-10 (2 X 250mm)；進樣量:25 μ L ;分析時間:52min。上述技術方案所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其中，所述步驟(3)中離子色譜的梯度淋洗液程序為:流動相流速為0.25ml/min，A通道流動相為去離子水，B通道流動相為250mmol/L氫氧化鈉溶液，C通道流動相為lmol/L乙酸鈉溶液；從O 6min，A通道流動相比例占88 %，B通道流動相比例占12 %，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ;從6min 12.1Omin, A通道流動相比例從88%逐漸下降為68.0%，B通道流動相比例從12%逐漸上升為32.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ；12.10 16.0min, A通道流動相比例占68%，B通道流動相比例占32%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為8 ;從16.0Omin 24.0Omin, A通道流動相比例從68%逐漸下降為36.0%，B通道流動相比例從32%逐漸下降為24.0%，C通道流動相比例逐漸上升為40%，梯度曲線為5 ;從24.00 39.00min,A通道流動相比例占36 %，B通道流動相比例占24%，C通道流動相比例占40 %，梯度曲線為8 ;從39.00 39.1Omin, A通道流動相比例從36%下降為20.0%，B通道流動相比例從24.0%逐漸上升為80.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ;從39.10 41.1Omin, A通道流動相比例^ 20%, B通道流動相比例^ 80%, C通道流動相比例占0，梯度曲線為8;從41.10 41.20min, A通道流動相比例從20%上升為88.0%，B通道流動相比例從80.0%逐漸下降為12.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5;從41.20 52.0min，A通道流動相比例占88%，B通道流動相比例占12%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5。本發明具有以下有益效果:1、本發明首次將蒸餾法提取、強陽離子固相萃取柱(SCX)進行凈化與離子色譜-電化學檢測器相結合的方法，建立了高效、準確、靈敏的檢測食醋中18種氨基酸的分析方法。2、與傳統的濃縮技術相比，本發明采用水蒸氣蒸餾法富集食醋中部分微量氨基酸并除去食醋待測樣品中的揮發酸，使得最終的檢測結果更加準確；而經傳統的濃縮技術處理的樣品中仍然會有有大量的乙酸和糖類物質對氨基酸的結果產生干擾。3、本發明采用強陽離子固相萃取柱凈化提取，有效提高食醋中氨基酸檢測方法的重現性、靈敏度和回收率；另外采用電化學檢測器-離子色譜，該方法靈敏度高，成本低，克服了以往分析方法中的諸多不足。4、本發明公開的食醋中氨基酸的方法開發和應用，將有利于規范食醋企業生產、提高產品質量安全，同時為鑒別釀造食醋、配制食醋及合成醋做了初步研究。因此，本發明對于促進我國食醋行業發展和保護消費者利益等方面具有重要的現實意義。
:1、圖1為18種氨基酸標準溶液色譜圖。2、圖2為食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖。
具體實施方式
:為使本發明的技術方案便于理解，以下結合具體試驗例對本發明的檢測方法作進一步的說明。實施例1:一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟:(I)、對市場購買的食醋待測樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測樣品中的揮發酸，并對氨基酸進行了濃縮富集；具體步驟為:吸取食醋待測樣品2mL進行水蒸汽蒸餾，當接收液到達180ml時，結束蒸餾，用超純水定容至10mL，得到提取物；(2)、對步驟⑴的提取物用固相萃取柱進行提取凈化，具體步驟為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個固相萃取過程流速不超過lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮氣吹干，然后用去離子水溶解并稀釋至一定體積，得到供離子色譜測定的凈化產物；(3)、對步驟(2)的凈化產物用離子色譜-電化學檢測器進行檢測，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖，具體步驟為:對步驟(2)得到的凈化產物離子色譜-電化學檢測器聯用技術進行檢測，其中離子色譜條件為色譜柱=Amino Pac PA-10 (2 X 250mm);進樣量:25 μ L ;分析時間:52min ;所述離子色譜的梯度淋洗液程序如表I所示；得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖，結果如圖2所示，圖2中在不同時間出現的1-14號波峰分別代表食醋待測樣品中所含有的14種不同的氨基酸；
表I 梯度淋洗液設定程序
權利要求
1.一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟: (1)、對食醋待測樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測樣品中的揮發酸，并對氨基酸進行了濃縮富集； (2)、對步驟(I)的提取物用固相萃取柱進行提取凈化； (3)、對步驟(2)的凈化產物用離子色譜-電化學檢測器進行檢測，經過離子色譜分析后得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖； (4)、配備18種氨基酸標準溶液，經過離子色譜分析后，得到18種氨基酸標準溶液色譜圖，所述離子色譜分析的條件與步驟(3)中的離子色譜分析的條件相同； (5)、將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進行對照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類。
2.根據權利要求1所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(I)的具體過程為:吸取食醋試樣2mL進行水蒸汽蒸餾，當接收液到達180ml時，結束蒸餾，用超純水定容至10mL，得到提取物。
3.根據權利要求1所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(2)的具體過程為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個固相萃取過程流速不超過lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮氣吹干，然后用去離子水溶解并稀釋，得到供離子色譜測定的凈化產物。
4.根據權利要求1所述的一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(3)的具體過程為:對步驟(2)得到的 凈化產物離子色譜-電化學檢測器進行檢測，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；其中離子色譜條件為色譜柱=Amino Pac PA-1O (2 X 250mm);進樣量:25μ L ;分析時間:52min。
5.根據權利要求4所述的一種檢測食醋所含氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟(3)中離子色譜的梯度淋洗液程序為:流動相流速為0.25ml/min, A通道流動相為去離子水，B通道流動相為250mmol/L氫氧化鈉溶液，C通道流動相為lmol/L乙酸鈉溶液；從0 6min，A通道流動相比例占88%，B通道流動相比例占12%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為.5 ;從6min 12.1Omin, A通道流動相比例從88%逐漸下降為68.0%，B通道流動相比例從12%逐漸上升為32.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ；12.10 16.0min, A通道流動相比例占68%，B通道流動相比例占32%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為8 ;從.16.0Omin 24.0Omin, A通道流動相比例從68%逐漸下降為36.0%，B通道流動相比例從.32 %逐漸下降為24.0 %，C通道流動相比例逐漸上升為40 %，梯度曲線為5 ;從24.00 .39.0Omin7A通道流動相比例占36 %，B通道流動相比例占24%，C通道流動相比例占40 %，梯度曲線為8 ;從39.00 39.1Omin, A通道流動相比例從36%下降為20.0%，B通道流動相比例從24.0 %逐漸上升為80.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ;從39.10 .41.1Omin, A通道流動相比例^ 20%, B通道流動相比例^ 80%, C通道流動相比例占0，梯度曲線為8 ;從41.10 41.20min, A通道流動相比例從20%上升為88.0%，B通道流動相比例從80.0%逐漸下降為12.0%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5 ;從41.20 .52.0min，A通道流動相比例占88%，B通道流動相比例占12%，C通道流動相比例占0，梯度曲線為5。
全文摘要
本發明一種檢測食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟(1)對食醋待測樣品用水蒸氣蒸餾提取；(2)對步驟(1)的提取物用固相萃取柱進行提取凈化；(3)對步驟(2)的凈化產物用離子色譜-電化學檢測器進行檢測，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；(4)配備18種氨基酸標準溶液，經過離子色譜分析后，得到18種氨基酸標準溶液色譜圖；(5)將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進行對照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類。本發明具有將蒸餾法提取、強陽離子固相萃取柱(SCX)進行凈化與離子色譜-電化學檢測器相結合的方法，建立了高效、準確、靈敏的檢測食醋中18種氨基酸的分析方法的優點。
文檔編號G01N30/88GK103197022SQ20131014541
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月25日 優先權日2013年4月25日
發明者梁寶愛, 張素娟, 姚春孝, 武向勇, 劉玉玲, 孫麗萍, 賈策, 趙海霞 申請人:山西省食品質量安全監督檢驗研究所