專利名稱：用于檢測臨床標本中白假絲酵母的特異性方法
技術領域：
本發明屬于臨床醫學檢驗領域，為一種檢測臨床標本中白假絲酵母的特異性方法。
背景技術：
念珠菌病是指由白假絲酵母(白色念珠菌)引起的原發性或繼發性感染。人類生殖器官的皮膚、粘膜被白假絲酵母感染并出現臨床癥狀稱為生殖器念珠菌病，包括念珠菌性陰道炎和龜頭炎，最常見為女性的陰道炎。念珠菌性陰道炎的診斷是根據病人的臨床癥狀、醫師體檢和實驗室檢測結果。目前臨床應用的念珠菌的檢測方法有以下幾種:
常規涂片鏡檢是最基本的細菌學檢查方法。其優點是簡便、快速和價廉，當天出結果；缺點是敏感性低，特異性差，無法辨別死菌與活菌。通常需用科瑪嘉念珠菌顯色培養基進一步證實。沙氏培養基是念珠菌感染診斷較為常用的培養基，但臨床上念珠菌感染癥有的為混合感染，不同的念珠菌在沙氏培養基上生長均呈現白色菌落，要進一步鑒定不同的菌種，有時還必須要做念珠菌的發酵試驗和芽管試驗，給實驗室的診斷帶來很大的不便。科瑪嘉(CHROM agar)培養基培養法，該培養基含有特殊顯色物質，無需通過任何儀器，僅通過觀察菌落顏色即能在24 48小時(大多為48小時，30 37°C )用肉眼對念珠菌等進行定性和定量分析。但是培養所用的時間相對較長，不利于快速診斷。另外，隨著儀器分析技術的進步和計算機的廣泛應用，微生物菌種鑒定逐漸由傳統的形態學觀察和人工生理生化實驗鑒定發展進入了基于儀器自動化分析的鑒定系統階段。如Biolog微生物自動分析系統、API 20C.ATB 32C、VITEK YBC和API Candid系統等。雖然，目前我國已累計引進Biolog微生物自動分析系統有100余臺，但這些快速鑒定系統大多數是應用于臨床細菌的鑒定分析，應用于酵母菌鑒定的研究成果很少。分析以上的一些診斷方法，雖然這些方法目前在日常醫院感染的監測與預防控制中占主導地位，但存在操作麻煩、所需時間長、成本高及影響因素多等諸多不足。
發明內容
本法明的目的就是為了解決上述現有技術存在的缺陷，而為臨床提供一種快速、簡便、檢出率較高而又經濟的檢測臨床標本，特別是陰道中的白假絲酵母的方法。
本發明的目的可以通過以下技術方案來實現:
本發明提供一種用于檢測白假絲酵母的乳膠致敏著色抗體試劑，其制備方法如下:1、抗血清制備，用含多株白假絲酵母的混合菌液免疫動物，獲得免疫血清，并進行純化得到特異性抗體；2、乳膠標記和著色處理，將特異性抗體吸附到聚苯乙烯乳膠顆粒上，制備得到致敏聚苯乙烯乳膠顆粒，再用結晶紫染料在低溫條件下使其著色，成乳膠致敏著色抗體；3、防腐處理，在著色的抗體致敏乳膠顆粒液體中加入防腐劑。其中步驟I中所述的純化是通過沉淀、離心、過柱等生物化學方法，去除雜質，得到特異性抗體；步驟2中所述的低溫條件是2 — 8°C，優選4°C;步驟3中所述的防護劑位本領域所常用的防護劑，選自化學物質氯化汞、硫柳汞、石碳酸、甲醛等
本發明提供一種快速、簡便的臨床檢測白假絲酵母的特異性方法，特別是檢測女性陰道中的白假絲酵母的方法，其特征在于:在常溫條件下將本發明提供的乳膠致敏著色抗體試劑和含白假絲酵母的標本滴加于白色凝集試驗板上，輕輕混合后，放置5 10分鐘即可出現肉眼可見的，紫色的凝集反應。與現有的各種方法相比，本發明為一種有色的快速乳膠凝集檢測法，對標本中白假絲酵母的檢出率達91%，比直接鏡檢和染色鏡檢檢出率高；比培養方法簡單，時間短，避免了細菌、真菌以及其他微生物的干擾；因為是有色反應，比一般的凝集更容易觀察，靈敏度更高。同時，本申請反應過程中染色并不是單純的物理染色，單純的物理染色將底色染綠色，將凝聚顆粒染成紅色，由于白假絲酵母凝聚后的顆粒很小，容易使得細菌和真菌和其他微生物混淆，特異性和靈敏度均不高；本申請采用結晶紫染料，不僅具有物理染色的特性，同時在檢測白假絲酵母凝聚過程中發生化學變色反應(均為藍色，底色為白色)很容易識另IJ，這樣使特異性和靈敏度均大為提高，具有實際的臨床意義；同時抗體穩定性好，保存條件要求低，保存時間長，有利于醫療實踐，更有利于醫療條件差的地區使用，所以，轉化成商品后，通過積極推廣應用，有很大的潛在市場，可產生顯著的社會效益和經濟效益。
具體實施例方式通過具體實施，對本發明作進一步說明 實施例一、臨床檢測女性陰道內白假絲酵母菌
制備乳膠致敏著色抗體試劑，1、抗血清制備，用含多株假絲酵母的混合菌液免疫動物，獲得免疫血清，從免疫動物中得到得抗體粗制品通過沉淀、離心、過柱等生物化學方法，去除雜質，得到白假絲酵母特異性抗體；2、乳膠標記和著色處理，將特異性抗體吸附到聚苯乙烯乳膠顆粒上，得到致敏聚苯乙烯乳膠顆粒，再用結晶紫染料在4°C下使其著色，成紫色；
3、防腐處理，在著色的抗體致敏乳膠顆粒液體中加入防腐劑，制備得到穩定的乳膠致敏著色抗體試劑。標本檢測階段，具體包括陰道分泌物標本的采集:用多用途無菌棉拭子，采取陰道等分泌物，將拭子插入軟試管，滴加專用緩沖液(磷酸鹽緩沖液)至0.5ml刻度(當分泌物多時加至1.0ml刻度)，攪動拭子10秒鐘充分混合標本；檢測:將試管倒置，由試管滴頭處滴加二滴(約100 ul)標本在凝集試驗反應卡片上的圈環內，再向圈環內擠滴2滴乳膠致敏著色抗體，輕輕混合后，放置5 10分鐘，用手均搖反應卡(或置于水平振蕩器)觀察有無紫色的凝集顆粒產生；
實施例二、其他培養物等標本檢測
如實施例一中所述的方法制備乳膠致敏著色抗體試劑。
標本檢測階段，取自實驗室內白假絲酵母培養物標本，用無菌拭子沾取培養物，直接混勻在含IOOul乳膠致敏著色抗體的反應卡片上，輕輕混合后，放置5 10分鐘，用手均搖反應卡(或置于水平振蕩器)，觀察到有明顯藍色的凝集顆粒產生。采用本發明檢測陰道分泌物和其他標本中的假絲酵母，不需要任何檢測設備和器材，整個檢測方法簡便、敏感性高，結果容易判斷，而且檢測過程只需5 10分鐘。
權利要求
1.用于檢測臨床標本中白假絲酵母的乳膠致敏著色抗體試劑，其制備方法如下:1)抗血清制備，用含多株白假絲酵母的混合菌液免疫動物，獲得免疫血清，并進行純化得到特異性抗體；2)乳膠標記和著色處理，將特異性抗體吸附到聚苯乙烯乳膠顆粒上，制備得到致敏聚苯乙烯乳膠顆粒，再用結晶紫染料等先行在低溫條件下使其著色，制成乳膠致敏著色抗體； 3)防腐處理，在著色的抗體致敏乳膠顆粒液體中加入防腐劑。
2.如權利要求1所述的乳膠致敏著色抗體試劑，其中步驟I中所述的純化是通過沉淀、離心、過柱等生物化學方法，去除雜質，得到特異性抗體；步驟2中所述的低溫條件是2 -8°C，優選4°C ;步驟3中所述的防護劑選自化學物質氯化汞、硫柳汞、石碳酸、甲醛等。
3.用于檢測臨床標本中白假絲酵母的特異性方法，其技術特征在于在常溫條件下將權利要求I中所述的乳膠致敏著色抗體試劑和含白假絲酵母的標本滴加于白色凝集試驗板上，輕輕混合后，放置5 10分鐘，用手均搖反應卡(或置于水平振蕩器)，觀察是否出現紫色的凝集反應。
4.如權利要求3所述的特異性方法，其特征在于乳膠致敏著色抗體試劑的制備方法中步驟I中所述的純化是通過沉淀、離心、過柱等生物化學方法，去除雜質，得到特異性抗體；步驟2中所述的低溫條件是2 - 8°C，優選4°C ;步驟3中所述的防護劑選自化學物質氯化汞、硫柳汞、石碳酸、甲醛等。
5.如權利要求1所述的乳膠致敏著色抗體試劑在臨床檢測白假絲酵母菌中的用途。
6.如權利要求5所述的用途，其特征在于用于臨床檢測女性陰道內白假絲酵母菌。
全文摘要
本發明為一種用于檢測臨床標本中白假絲酵母的特異性方法，包括抗血清制備純化，乳膠標記和著色處理，防腐處理，白假絲酵母的檢測等工藝步驟，與現有的檢測技術相比較，本發明具有快速簡單方便，敏感性高，結果容易判斷等優點。
文檔編號G01N33/531GK103196906SQ201310107169
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月29日 優先權日2013年3月29日
發明者文鳳枝 申請人:河北微拉生物科技有限公司