專利名稱：測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法
技術領域：
本發明屬于化妝品分析領域，具體地說，本發明涉及一種測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法。
背景技術：
隨著社會和經濟的發展，人們生活、工作和學習節奏不斷加快，人們承受的心理壓力日益加重,人群中脫發的發病率也越來越高,先天性脫發、雄激素性脫發、斑禿等病狀越來越普遍發生。脫發現象的愈發普遍，市場上針對脫發而產生的生發、育發產品層出不窮。在市場上、電視上、網絡上關于該類產品的廣告到處可見。然而，由于育發化妝品行業生產技術含量不高，行業準入門檻較低，加上企業對于品牌的知識產權及產品的質量與安全意識缺乏，導致目前育發化妝品行業秩序混亂，主要存在以下問題:1、產品質量良莠不齊，大量的偽劣產品充斥市場。2、虛假、過分的廣告宣傳嚴重。3、禁用藥物的非法添加。部分企業為了突出產品的功效性，虛假宣傳，往往打著中藥治脫發的名號，而事實上在產品中添加西藥作為主要功效成分。2010年所曝出的新加坡、香港的某產品查出含有違禁物“米諾地爾”成分事件就是一個典型的例子。丙酸氯倍他索為人工合成的高效局部外用糖皮質激素類藥物，具有較強的抗炎、抗瘙癢和毛細血管收縮作用，其抗炎作用為氫化可的松的112.5倍，倍他米松磷酸鈉的2.3倍，氟輕松的18.7倍。因此，丙酸氯倍他索常常作為首選藥物應用于慢性濕疹、神經性皮炎、銀屑病、掌跖膿皰病、扁平苔蘚、盤狀紅斑狼瘡等糖皮質激素外用治療有效的瘙癢性及非感染性炎癥性皮膚病。然而，由于丙酸氯倍他索具有突出的消炎效果，其經常與酮康唑、米諾地爾及其他藥物復配，被非法添加于生發育發產品中。這類藥物長時間停留在皮膚、面部、毛發等部位上，可能造成過敏反應或毒害性，對消費者的健康和安全帶來嚴重隱患，《化妝品衛生規范》(2007版)將糖皮質類激素西藥成分列為禁用物質。因此，為了規范育發化妝品行業的市場秩序，維護企業及消費者的合法權益，我們迫切需要建立一種育發化妝品中丙酸氯倍他索的高通量檢測方法，并完善相關國家及行業標準，能對其進行準確、快速的測定。
發明內容
基于此，本發明提供了一種高效的測定生發育發產品中丙酸氯倍他索含量的方法。—種測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，采用超高效液相色譜法進行測定，包括以下步驟:(I)制備供試樣品精確稱取樣品，依次加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中間層澄清液；再往原樣品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中間層澄清液；合并澄清液，力口沉淀劑，用水定容，冷凍離心，上清液過濾膜，即為供試樣品；
(2)超高效液相色譜測定將供試樣品進行超高效液相色譜測定，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:35-45O;流動相:乙腈和水，梯度洗脫；流速:0.3-0.4mL/min ;洗脫時間:2.0-3.0分鐘；檢測波長:230-240nm。在其中一個實施例中，步驟(2)中所述色譜柱的柱溫為40°C。在其中一個實施例中，步驟(2)中所述梯度洗脫程序為:0-l.5min，維持50%乙腈，
1.5-1.8min,乙臆體積由50%升至70% ； 1.8-2.5min,乙臆體積由70%降至50%。在其中一個實施例中，步驟⑵中所述流速為0.3mL/min，所述梯度洗脫的時間為
2.5min。在其中一個實施例中，所述步驟(I)為:準確稱取0.5 1.0g樣品，置于比色管中，依次準確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，充分均質，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉移至離心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重復以上步驟；將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0.2mL，再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL，用水稀釋至10mL，混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，即為供試樣品。本發明發明人經過大量的實驗摸索出了超高效液相色譜法測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的含量的最佳測得條件。采用超高效液相色譜法對丙酸氯倍他索含量的儀器檢測限(S/N=3)為0.lmg/L，平均回收率為90.4% 95.8%，相對標準偏差為5.3% 10.2%。采用本發明的方法檢測生發育發產品中丙酸氯倍他索含量，檢測限低，準確度高，前處理簡單，非常適合生發育發產品中丙酸氯倍他索的快速、批量檢測；為化妝品產品的質量控制和安全監測提供重要技術支持，具有良好的經濟與社會效益。
圖1為實施例1中丙酸氯倍他索濃度為2.0mg/L的標準溶液的色譜圖；圖2為實施例1中丙酸氯倍他索濃度一峰面積標準曲線圖；圖3為實施例2中生發液樣品的色譜圖；圖4為實施例3中添加濃度為4.0mg/kg的生發液樣品的色譜圖。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例來詳細說明本發明。以下實施例中所使用的原料均來源于市售。實施例1丙酸氯倍他索對照品色譜圖的建立包括以下步驟:(I)丙酸氯倍他索標準溶液的配制以流動相溶液(乙腈/水=1:1)為溶劑，分別配制濃度為0.1mg/L、0.2mg/L、
0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L 的丙酸氯倍他索標準溶液。
(2)超高效液相色譜檢測將標準溶液按濃度由低到高精密吸取5 μ L，依次進行超高效液相色譜檢測，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, L 7 μ m)柱(Waters)；柱溫:40°C ;流動相:乙腈和水，梯度洗脫，程序為:0-1.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ；1.8-2.5min,乙腈體積由70%降至50% ；流速:0.3mL/min ；洗脫時間'2.5分鐘；檢測波長:240nm。(3)繪制標準曲線以色譜峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標，繪制標準曲線(如圖2所示)，獲得R2值。丙酸氯倍他索濃度在0.1 20.0mg/L范圍內，濃度與其對應的峰面積值呈良好線性關系，相關系數R2 = 0.999。所得的線性方程為y=39018x-339.64。(4)丙酸氯倍他索對照品色譜圖的建立準確稱取丙酸氯倍他索對照品(德國Dr公司)，配制2.0mg/L的丙酸氯倍他索標準溶液，精密吸取5 μ L注入超高效液相色譜儀，按照步驟(2)的超高效液相色譜條件進行測定，得到丙酸氯倍他索對照品的色譜圖，如圖1所示，丙酸氯倍他索的保留時間為
1.763min。實施例2生發液樣品中丙酸氯倍他索含量的測定包括以下步驟:(I)制備供試樣品準確稱取0.5 1.0g (精確至0.0Olg)樣品，置于IOmL比色管中，依次準確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，再于均質器上充分均質，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉移至IOmL離心管中。再加3mL乙腈于原比色管中，重復以上步驟。將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0.2mL，再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL，用水稀釋至10mL，混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，供UPLC測定。(2)超高效液相色譜測定精密吸取供試樣品5 μ L注入超高效液相色譜儀，進行超高效液相色譜測定測定，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:40°C;流動相:乙腈和水，梯度洗脫，程序為:0-1.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ；1.8-2.5min,乙腈體積由70%降至50% ；流速:0.3mL/min ；洗脫時間'2.5分鐘；檢測波長:240nm。⑶測定得到的色譜圖如圖3所示。圖3表明生發液樣品中未檢測到丙酸氯倍他索。
實施例3 添加濃度為4.0mg/kg的丙酸氯倍他索的生發液樣品中丙酸氯倍他索含量的測定包括以下步驟:(I)制備供試樣品準確稱取實施例2中生發液樣品0.5g，在該樣品中加入濃度為20.0mg/L的丙酸氯倍他索標準溶液100 μ L，則該生發液樣品中丙酸氯倍他索的濃度為4.0mg/kg。后續處理同實施例2，得到供試樣品。(2)超高效液相色譜測定同實施例2。⑶測定得到的色譜圖如圖4所示。根據供試樣品所代表的樣品質量，從實施例1的標準曲線計算得到供試樣品中丙酸氯倍他索的含量。計算得到生發液樣品中的丙酸氯倍他索含量為3.82mg/kg,回收率為95.5%。丙酸氯倍他索峰出現時間為1.765min。實施例4回收率和精密度試驗根據方法的檢測限，對實施例2中的生發液樣品按照表I中的添加量，在每個樣品中添加標準溶液，進行6次實驗。平均回收率和精密度結果見于表I。表I丙酸氯倍他索在三個生發液樣品中的平均添加回收率和相對標準偏差
權利要求
1.一種測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，采用超高效液相色譜法進行測定，包括以下步驟: (1)制備供試樣品 精確稱取樣品，依次加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中間層澄清液；再往原樣品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中間層澄清液；合并澄清液，加沉淀齊U，用水定容，冷凍離心，上清液過濾膜，即為供試樣品； (2)超高效液相色譜測定 將供試樣品進行超高效液相色譜測定，條件如下:色譜柱:BEH C18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:35-45 °C ; 流動相:乙腈和水，梯度洗脫；流速:0.3-0.4mL/min ； 洗脫時間:2.0-3.0分鐘； 檢測波長:230-240nm。
2.根據權利要求1所述的測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述色譜柱的柱溫為40°C。
3.根據權利要求1所述的測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述梯度洗脫程序為:0-l.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ； 1.8-2.5min,乙腈體積由 70% 降至 50%。
4.根據權利要求1所述的測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述流速為0.3mL/min，所述梯度洗脫的時間為2.5min。
5.根據權利要求1-4任一項所述的測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，所述步驟(I)為:準確稱取0.5 1.0g樣品，置于比色管中，依次準確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，充分均質，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉移至離心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重復以上步驟；將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0 .2mL,再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL,用水稀釋至IOmL,混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，即為供試樣品。
全文摘要
本發明公開了一種測定生發育發產品中丙酸氯倍他索的方法，包括制備供試樣品、將供試樣品進行超高效液相色譜測定，采用BEH C18(2.1x50mm，1.7μm)色譜柱；柱溫35-45℃;乙腈和水作為流動相，梯度洗脫；恒流速0.3-0.4mL/min；Waters PDA作為檢測器，檢測波長230-240nm。采用本發明的方法檢測生發育發產品中丙酸氯倍他索含量，檢測限低，準確度高，前處理簡單，非常適合生發育發產品中丙酸氯倍他索的快速、批量檢測；為化妝品產品的質量控制和安全監測提供重要技術支持，具有良好的經濟與社會效益。
文檔編號G01N30/02GK103197007SQ20131010050
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月26日 優先權日2013年3月26日
發明者席紹峰, 李慧勇, 王繼才, 譚建華 申請人:廣州市質量監督檢測研究院