專利名稱：一種鼠源單克隆抗體及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及抗體技術領域。具體地說，本發明涉及一種新的重組抗人抗狂犬病毒單克隆抗體的單克隆抗體，及其制備方法和用途。
背景技術：
狂犬病是由狂犬病毒所致的自然疫源性或動物源性人畜共患急性傳染病，流行性廣，病死率幾近百分之百，對人民生命健康造成嚴重威脅。人狂犬病主要通過患病動物咬傷、抓傷或由粘膜感染引起，在特定的條件下還可通過呼吸道氣溶膠傳染。傳染動物主要是犬(超過90%)，其次是貓。根據中國疫情報告系統資料，1998年后狂犬病疫情年增長幅度越來越高，死亡人數不斷攀升。對于狂犬病毒暴露后預防，WHO推薦的處理方法是全程注射狂犬疫苗，同時合并注射抗狂犬病馬血清(ERIG)或抗狂犬病毒人免疫球蛋白(HRIG)。但HRIG由于來源限制價格昂貴，而馬血清制品則較易發生嚴重的過敏反應，所以現今國際上已經公認有必要用重組單克隆抗體取代狂犬病毒暴露后預防中使用的抗狂犬病毒血源抗體。國外研究者已經進行了廣泛的相關研究，并取得了顯著的成果。B.Dietzschold利用細胞融合技術制備了多株人抗狂犬病毒單克隆抗體，發現能特異結合狂犬病毒G蛋白的一株抗體Mab57能夠高效和廣泛地中和狂犬病毒并且對狂犬病毒攻擊的實驗室嚙齒動物可以起保護作用(J Virol.1990 June ;64 (6): 3087-3090)。B.Dietzschold 等將 Mab57 基因轉入SPBN重組病毒表達系統，在BSR細胞中制備了 S057抗體(J Immunol Methods.200IJunl ；252(1-2) =199-206, )，S057抗體重鏈和輕鏈的氨基酸序列分別見GENEBANKg1:27728677和g1:27728683.華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司把S057的基因序列在CHO細胞表達系統中表達，構建成功高效表達該 基因序列編碼抗體的工程細胞，并把得到的單抗命名為匪57，該方法操作工藝簡便、產品表達水平高(超過100毫克/升)、生產的抗體質量均一而且穩定性好，具備了產業化價值，可以取代目前所使用的抗狂犬病馬血清或人免疫球蛋白(中國專利:重組人抗狂犬病毒單克隆抗體的制備方法，公開號CN101100663A)。在匪57進行臨床前研究及臨床研究的過程中，以及將來成為藥物后患者應用的過程中，為了研究藥物代謝及保證用藥安全，必須檢測受試者(動物或人)或患者的血清匪57濃度和人抗匪57的抗體，但是目前還沒有實現該功能的檢測試劑或試劑盒出現，因此，迫切需要一種能有效、快速檢測匪57濃度和人抗匪57抗體的產品。
發明內容
本發明需要解決的第一個技術問題是提供一種抗匪57單克隆抗體，用于檢測匪57濃度和人抗匪57抗體。本發明需要解決的第二個技術問題是提供一種編碼上述抗匪57單克隆抗體的DNA分子。本發明需要解決的第三個技術問題是提供一種表達載體。
本發明需要解決的第四個技術問題是提供一種真核宿主細胞。本發明需要解決的第五個技術問題是提供一種該重組抗匪57單克隆抗體的制備方法。本發明需要解決的第五個技術問題是提供上述單克隆抗體的兩種用途。為實現上述發明目的，本發明一方面提供了一種重組抗匪57單克隆抗體，該抗體含有重鏈可變區和輕鏈可變區，其特征在于，輕鏈可變區具有SEQID NO:1所示的氨基酸序列，重鏈可變區具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。本發明另一方面提供了編碼上述單克隆抗體的DNA分子。在一個較佳的實例中，該DNA分子含有SEQ ID NO: 3所示的編碼所述單抗輕鏈可變區的核苷酸序列，以及SEQ ID N0:4所示的編碼所述單抗重鏈可變區的核苷酸序列。本發明第三方面提供了一種表達載體，該表達載體含有上述DNA分子。本發明第四方面提供了一種宿主細胞，其特征在于，它被上述表達載體轉化。在一個較佳的實例中，該宿主細胞是CHO細胞。本發明第五方面提供了一種制備上述單克隆抗體的方法，其特征在于，該方法包括:
a)構建含有權利要求2所述DNA分子的表達載體；
b)用步驟a)所述的表達載體轉化宿主細胞；
c)培養步驟b)所得的宿主細胞；
d)分離純化獲得所述單克隆抗體。本發明提供的抗體可以在體外檢測匪57的濃度和人抗匪57抗體，本發明第六方面提供了一種利用本發明所述抗體檢測NM57濃度的方法。在一個較佳的實例中，檢測方法為基于洗脫的ELISA法。該抗體可用于制備檢測試劑或者檢測試劑盒。本發明涉及一種重組抗匪57單克隆抗體，該抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，輕鏈可變區具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重鏈可變區具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。本文所用的術語“單克隆抗體(單抗)”指從一類基本均一的群體獲得的抗體，即該群體中包含的單個抗體是相同的，除少數可能存在的天然發生的突變外。單克隆抗體高特異性地針對單個抗原位點，而且，與常規多克隆抗體制劑(通常是具有針對不同決定簇的不同抗體)不同，各單克隆抗體是針對抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性外，單克隆抗體的好處還在于它們是通過基因工程手段來合成的，不會被其它免疫球蛋白污染。修飾語“單克隆”表示了抗體的特性，是從基本均一的抗體群中獲得的，這不應被解釋成需要用任何特殊方法來生產抗體。 本文所用的術語“抗體”和“免疫球蛋白”是有相同結構特征的約150，000道爾頓的異四聚糖蛋白，其由兩個相同的輕鏈(L)和兩個相同的重鏈(H)組成。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型的重鏈間的二硫鍵數目不同。每條重鏈和輕鏈也有規則間隔的鏈內二硫鍵。每條重鏈的一端有可變區(VH)，其后是多個恒定區。每條輕鏈的一端有可變區(VL)，另一端有恒定區；輕鏈的恒定區與重鏈的第一個恒定區相對，輕鏈的可變區與重鏈的可變區相對。特殊的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈的可變區之間形成界面。
本文所用的術語“可變”表示抗體中可變區的某些部分在序列上有所不同，它形成各種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性。然而，可變性并不均勻地分布在整個抗體可變區中。它集中于輕鏈和重鏈可變區中稱為互補決定區(CDR)或超變區中的三個片段中。可變區中較保守的部分稱為構架區(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區中各自包含四個FR區，它們大致上呈β-折疊構型，由形成連接環的三個⑶R相連，在某些情況下可形成部分β折疊結構。每條鏈中的⑶R通過FR區緊密地靠在一起并與另一鏈的⑶R —起形成了抗體的抗原結合部位。恒定區不直接參與抗體與抗原的結合，但是它們表現出不同的效應功能，例如參與抗體的依賴于抗體的細胞毒性。單克隆抗體可用本領域技術人員熟知的各種方法來制得。例如，單克隆抗體可用雜交瘤方法制得，或用重組DNA方法制得，也可從噬菌體抗體庫中分離獲得。本發明還提供 了編碼本發明重組抗匪57單克隆抗體的DNA分子。在一個較佳的實例中，該DNA分子含有SEQ ID NO: 3所示的編碼所述單抗輕鏈可變區的核苷酸序列，以及SEQ ID Ν0:4所示的編碼所述單抗重鏈可變區的核苷酸序列。在獲得編碼本發明重組抗匪57單克隆抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的核苷酸序列后，通常可通過以下方法來制備本發明的單克隆抗體。首先，提供含有編碼本發明單克隆抗體的核苷酸序列的表達載體。編碼本發明單克隆抗體的DNA序列可用本領域技術人員熟知的常規手段來制得。例如，可根據本發明公開的序列人工合成或用PCR法擴增得到編碼該單克隆抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的核苷酸序列。然后，用本領域熟知的各種方法通過選擇合適的酶切位點將這些核苷酸序列插入合適的表達載體中，使它們分別在表達載體所攜帶的重鏈恒定區編碼序列和輕鏈恒定區編碼序列之前，并使它們在同一閱讀框內。本發明中所用的表達載體是本領域技術人員己知的各種市售的表達載體，例如購自Qiagen或Promega公司的表達載體,或其他可購得的表達載體如ρΜΗ3 (杭州安瑞普生物制品研究有限公司)。隨后，用上述獲得的表達載體轉化合適的宿主細胞。“宿主細胞”一般包括原核細胞和真核細胞。常用的原核宿主細胞的例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、昆蟲細胞和哺乳動物細胞。在本發明中，較佳的宿主細胞是CHO細胞。用表達載體轉化宿主細胞的方法有很多種，所用的轉化程序取決于待轉化的宿主。將異源多核苷酸導入哺乳動物細胞中的方法是本領域所知的，其包括葡聚糖介導的轉染、磷酸I丐沉淀、Polybrene (1,5- 二甲基-1,5- 二氮^ 亞甲基聚甲溴化物)介導轉染、原生質體融合、電擊法、脂質體介導轉染以及將DNA直接顯微注射到胞核中。在本發明中，較佳的方法是電擊法。然后，在適合本發明單克隆抗體表達的條件下，培養轉化所得的宿主細胞。用常規的免疫球蛋白純化步驟，如蛋白A-Sepharose,輕基磷灰石層析、凝膠電泳、透析、離子交換層析、疏水層析、分子篩層析或親和層析等本領域技術人員熟知的常規分離純化手段純化得到本發明的重組抗匪57單克隆抗體。所得單克隆抗體可用常規手段來鑒定。單克隆抗體的結合特異性可用免疫沉淀或體外結合試驗，如放射性免疫測定(RIA)或酶聯免疫吸附測定(ELISA)來測定。單克隆抗體的結合親和力可用如SPR等分析方法來測定。
本發明的優點在于本發明的單克隆抗體用于檢測匪57具有特異性強、靈敏度高的優點，能在匪57進行臨床前研究及臨床研究的過程中，以及將來成為藥物后患者應用的過程中，快速、準確檢測受試者(動物或人)或患者的血清匪57濃度；還可用于檢測人抗匪57抗體。
圖1:還原SDS-PAGE電泳檢測NM57 (Fab) 2純度，泳道I為制備所得NM57 (Fab)2,泳道2為NM57。圖2:載體pMH3-L示意圖，并且標明了其中的元件及酶切位點，其中，S-271-L為輕鏈基因；polyA為多聚腺苷化信號。圖3:載體pMH3-H示意圖，并且標明了其中的元件及酶切位點，其中，S-271-H為重鏈基因，PolyA為多聚腺苷化信號。圖4:SPR法檢測抗匪57抗體親和常數，圖中為不同稀釋度的抗體結合曲線。圖5:NM57濃度-OD值擬合曲線。
具體實施例方式下面將結合實施例進一步詳細地描述本發明。然而應當理解，列舉這些實施例只是為了起說明作用，而并不是用來限制本發明。實施例中未標明來源的實驗試劑均為市售。實施例1表達抗匪57鼠單抗的雜交瘤細胞系的制備和篩選 I)抗原NM57(Fab )2的制備
將匪57 (制備方法參見中國專利:重組人抗狂犬病毒單克隆抗體的制備方法，公開號CN101100663A)用0.5 mol/L鹽酸調pH值至3.5，37 °C水浴30分鐘。將胃蛋白酶(購自Sigma-Aldrich C0.公司)與抗體樣品按1:50 (w/w)的比例混合,37°C水浴2小時,加入
0.5mol/L Na2HPO4溶液調pH值至7.0終止反應后，離心去除沉淀。用層析介質rProteinA對酶切所得NM57 (Fab) 2進行純化后，用30kD超濾膜對所得純化溶液超濾換液，保存溶液組成為lOmmol/L PB, 150mmol/L NaCl，pH6.0。根據體積加入1/200體積的10mg/ml Tween80,混勻，用0.22 μ m濾膜過濾，分裝。用還原SDS-PAGE電泳法檢測制備所得抗原匪57 (Fab)2的純度> 90% (電泳圖見圖1)。2)免疫小鼠
用步驟I)制得的匪57 (Fab)2皮下注射免疫6周齡Balb/c小鼠，首次免疫使用福氏完全佐劑，每隔兩周使用福氏不完全佐劑加強免疫一次，共免疫三次，每次每只50 μ g。取上述免疫的小鼠脾臟，制成淋巴細胞單細胞懸液。3)融合和篩選
按照《The Protein Protocols Handbook》第二版(John M.Walker 2002 HumanaPress Inc.) PART VIII MONOCLONAL ANTIBODIES 159 節 Hybridoma Production中所述方法，將步驟2)制得的淋巴單細胞與BALB/c小鼠來源的sp2/0骨髓瘤細胞進行融合及克隆培養。米用《The Protein Protocols Handbook))第二版(John M.Walker2002 Humana Press Inc.) PART VIII MONOCLONAL ANTIBODIES 第 161 節 ScreeningHybridoma Culture Supernatants Using ELISA 所述方法,使用 NM57 對克隆進行篩選,最后篩選得到一株表達抗NM57鼠源單抗的雜交瘤細胞株。實施例2抗體可變區編碼序列的克隆和測序
I)取實施例1篩選得到的雜交瘤細胞株進行懸浮培養，取細胞IO7個，于4°C以離心力200g離心5分鐘,盡棄上清,所得細胞使用Qiagen公司的RNA抽提試劑盒(MagAttract RNACell Mini M48 Kit，貨號:958236)提取總 RNA。2)以提取的RNA為模版，使用TaKaRa公司的RT-PCR試劑盒(RNA PCR Kit (AMV)Ver.3.0, code N0.:DRR019A)進行RT-PCR反應，反轉錄引物分別為:
A輕鏈擴增引物:
正向引物:
LLl:5’ ATGGAGACAGACACACTCCTGCTAT 3’
LL2:5’ ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAG 3’
LL3:5’ ATGGAGffCACAKffCTCAGGTCTTTRTA 3’ LL4:5 ’ ATGKCCCCWRCTCAGYTYCTKGT 3，
LL5:5’ ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTG 3’
反向引物:
Ck:5’ GTTGGTGCAGCATCAGC 3，
B重鏈引物:
正向引物:
VHl:5’ ATGGRATGSAGCTGKGTMATSCTCTT 3’
VH2:5’ ATGRACTTCGGGYTGAGCTKGGTTTT 3’
VH3:5’ ATGGCTGTCTTGGGGCTGCTCTTCT 3’
VH4:5 ’ ATGATRGTGTTRAGTCTTYTGTRCCTG 3，
反向引物:
C γ: 5，GGGGCCAGTGGATAGAC 3，
反應結束后取反應物在1.5%瓊脂糖凝膠電泳上進行分離，采用Qiagen公司的膠回收試劑盒(QIAquick Gel Extraction Kit,貨號:28704)提純擴增的DNA片段,進行序列測定(交由上海生工生物工程技術服務有限公司進行測定)。結果如下:SEQ ID NO:3顯示了其輕鏈可變區基因序列(5，到3’，336bp)，其氨基酸序列顯示在SEQ ID NO:1中；SEQ ID NO:4顯示了其重鏈可變區基因序列((5’到3’，363bp)，其氨基酸序列顯示在SEQ ID NO:2中。實施例3抗體的表達載體構建、表達與純化
I)用EcoR I和Not I限制性酶酶切表達載體pMH3，然后將上述抗體可變區與鼠源恒定區通過搭橋PCR拼接起來，并在兩端設計EcoR I和Not I酶切位點序列，之后與酶切的表達載體連接，從而構建得到分別含有重組抗匪57抗體輕鏈全長和重鏈全長基因的表達載體pMH3-L和pMH3-H，如圖2、3所示。2) CHO細胞轉染與篩選
上述構建的表達載體分別轉化大腸桿菌DHlOB菌種，接種于100毫升LB培養基中進行擴增，收集細胞，用Qiagen公司質粒DNA純化試劑盒(QIAGEN Plasmid Mini KU，貨號:12125)抽提質粒DNA4 μ g，采用電轉化法將上述質粒轉染CHO細胞。
轉染后的CHO細胞在MTX選擇培養基上進行克隆篩選，最后在96孔板上進行有限稀釋培養，連續進行3次。挑取單克隆細胞系在RPMI1640培養基中進行培養，用ELISA法檢測上清中的抗體表達水平，選擇表達水平最高的克隆作為工作株保存。3)抗體純化與檢測
將選定的工作株培養后，收集細胞上清或培養液，10000rpm、4°C離心20分鐘，經
0.45 μ m濾膜過濾、抽濾除氣后備用。0.lmol/L的PB緩沖液(pH7.0)作為平衡緩沖液平衡Protein A Sepharose 4 Fast Flow層析柱,流速lml/分鐘平衡10-20個柱體積至記錄儀基線穩定。將處理后的上清以同樣流速上樣，收集流穿液。上樣結束后用平衡緩沖液洗至基線平穩。用0.lmol/L的甘氨酸-鹽酸緩沖液(pH3.0)洗脫融合蛋白，流速Iml/分鐘，收集洗脫峰，用lmol/1的Tris-HCL緩沖液 調pH至中性，經超濾濃縮置換于PBS (pH7.4)緩沖液中，凍存，用于以下的進一步分析與研究中。實施例4單克隆抗體親和力測定 I)標記NM57
依照偶聯試劑盒(Amine Coupling KU，購自GE公司，貨號BR-1000-50)說明，將EDC和NHS按一定的比例加水分別溶解；CM5傳感片(GE公司)插入檢測儀Biacore 2000(GE公司)后，控制流速為 5μ I / 分鐘，用 HBS 緩沖液(10 mmol/1 HEPESU50 mmol/1 NaCU3.4mmol/1 EDTA、0.005% Tween20, pH7.4)平衡體系，待基線穩定，開始標記 NM57: (I)EDC 和NHS各100 μ L混合均勻，注射50 μ I混合液使其流過待標記通道，活化傳感片表面的羧基；
(2)注射3.0mg/L NM57溶液(溶于10 mmol/1醋酸鈉緩沖液，pH4.5)，將NM57通過氨基偶聯標記于芯片表面，標記目標8000RU;(3)注射35 μ L乙醇胺的鹽酸溶液封閉殘余的活化羧基；(4)注射10 μ I甘氨酸緩沖液洗去非鍵合的吸附蛋白和乙醇胺。2)單抗結合過程檢測
用HBS緩沖液梯度稀釋實施例3制備所得單抗(35.5 μ g/ml、17.75 μ g/ml、8.9 μ g/ml、
4.45μ g/ml,2.2μ g/ml),12 OOOrpm離心10分鐘，上機檢測。上樣30秒(流速30 μ I/分鐘)，HBS緩沖液平衡4分鐘(流速30 μ I/分鐘)，10mmol/l甘氨酸緩沖液(pH2.0)再生30秒(流速30 μ I/分鐘)，HBS緩沖液平衡3分鐘。3)親和常數計算
通過BIAeval 3.0軟件擬合結合曲線(見圖4)，計算單抗與匪57的親和常數為
2.4nmol/lο實施例5基于捕獲-洗脫的ELISA法應用單抗檢測匪57濃度
用包被液緩沖液(0.1 mol/L碳酸鹽，pH 9.6)稀釋實施例3制備所得單抗至10 μ g/ml，4 °C過夜包被酶標板，用封閉液(P/oBSA-PBS )封閉，將含有不同濃度匪57的標準品(S1-S6)和含有匪57的血清樣本(將特定量匪57樣品加入人血清中制備所得樣本X1-X3)及陰性對照品(Blank)加入孔板，37°C孵育I小時進行捕獲。洗板3遍，每孔加入300mmol/L乙酸溶液60 μ I洗脫5分鐘。從每孔中取50 μ I洗脫液，加入50 μ I中和液(含有2%BSA的lmol/L Tris-HCl緩沖液，ρΗ8.0)中進行中和。取用羊抗人IgG (Fe)抗體包被并用封閉液封閉的酶標板，將中和后的體系加入對應孔中，37°C孵育I小時。用PBS-T洗板3遍，用封閉液稀釋實施例3制備所得單抗至10 μ g/ml.加入板孔中，37°C孵育I小時。洗板3遍，加入用封閉液稀釋的人血清吸附處理的羊抗鼠IgG-HRP加入板孔中，37°C孵育I小時。洗板5遍，向板孔中加入TMB底物顯色液，37°C顯色30分鐘。加終止液(2mol/lH2SO4) 50μ1/孔，終止反應。終止后30分鐘內讀數，波長450/630nm。根據標準曲線(標準曲線見圖5 )計算樣品的匪57含量。含量測定結果實例見表I。實施
從上表數據可以看出使用該抗體能耐受人血清中存在的IgG的干擾，從人血清中特異地檢測出低至20ng/ml的匪57，且準確度高。單抗對匪57表現出了良好的特異性和親和力。實施例7應用單抗做為陽性對照檢測匪57免疫原性
用橋聯ELISA法檢測臨床實驗中注射匪57的人血清樣品(樣品1-4)中是否含有抗匪57的抗體。該法采用加入了不同濃度單抗(陽性對照品1-3)的人血清做為系列陽性對照品，采用健康人血清作為陰性對照品。試驗步驟
用包被液(0.1 mol/L碳酸鹽，pH 9.6)將NM57稀釋至2 μ g/ml，100 μ I/孔，加入酶標板，4°C過夜包被。PBS-T洗板3次，用封閉液(3%脫脂奶粉-PBS )封閉，100 μ I/孔，加入酶標板，37°C孵育I小時。PBS-T洗板3次，拍向每孔中加入90 μ I PBS,分別加對應待測樣品、陽性對照品和陰性對照品各10 μ I/孔，370C孵育2.5小時。洗板3次，用封閉液稀釋NM57-HRP 1: 10000，混勻，100 μ I/孔，加入酶標板，370C孵育2小時。洗板5次，加入TMB底物顯色液顯色，100 μ I/孔，加入酶標板，37°C顯色5分鐘。2mol/l硫酸溶液終止反應，50 μ I/孔。酶標儀雙波長450/630讀數。用Cutoff值判斷陰陽性。測定實例見表2。
權利要求
1.一種重組抗匪57單克隆抗體，它包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其特征在于，輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。
2.—種DNA分子，其特征在于，它編碼權利要求1所述的單克隆抗體。
3.根據權利要求2所述的DNA分子，其特征在于，該DNA分子含有SEQID NO: 3所示的編碼所述單抗輕鏈可變區的核苷酸序列，以及SEQ ID N0:4所示的編碼所述單抗重鏈可變區的核苷酸序列。
4.一種表達載體,其特征在于,它含有權利要求2所述的DNA分子。
5.一種真核宿主細胞，其特征在于，它被權利要求4所述的表達載體轉化。
6.根據權利要求5所述的真核宿主細胞，其特征在于，它是CHO細胞。
7.一種制備權利要求1所述的單克隆抗體的方法，其特征在于，該方法包括: a)構建含有權利要求2所述DNA分子的表達載體； b)用步驟a)所述的表達載體轉化真核宿主細胞； c)培養步驟b)所得的真核宿主細胞； d)分離純化獲得所述單 克隆抗體。
8.權利要求1所述的單克隆抗體在制備檢測匪57濃度的試劑中的應用。
9.權利要求1所述的單克隆抗體在制備檢測匪57濃度的試劑盒中的應用。
10.權利要求1所述的單克隆抗體在檢測NM57免疫原性中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種重組抗NM57單克隆抗體，輕鏈可變區具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，重鏈可變區具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。本發明還公開了編碼該抗體的DNA分子，表達該抗體的載體以及被該表達載體轉化的真核宿主細胞。本發明提供的抗NM57單克隆抗體能在NM57用藥過程中快速檢測受試者血清中NM57濃度，同時也能作為抗NM57的陽性對照抗體應用于NM57的免疫原性檢測。
文檔編號G01N33/577GK103214571SQ20131009534
公開日2013年7月24日 申請日期2013年3月22日 優先權日2013年3月22日
發明者趙偉, 魏敬雙, 王惠欣, 劉曉志, 常亮, 程立均, 李燕霞, 劉艷玲, 段迎霞, 劉祥義, 劉洪喜, 于蘭, 李玉鳳, 張靜, 高健 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司