專利名稱：用聯吡啶釕電致化學發光法測定痕量左旋咪唑的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用聯吡啶釕電致化學發光法測定痕量左旋咪唑的方法。
背景技術：
由于其質優價廉、廣譜抗菌活性的特點，左旋咪唑是獸藥和人用藥品中常用的驅蟲藥之一。在血液和尿液中可以檢測出左旋咪唑的藥物殘留。對于左旋咪唑最大的藥物殘余量，美國藥典有規定。因此有必要在前有的基礎上提高靈敏度來研究一種對左旋咪唑具有高選擇性的檢測方法。電致化學發光法是一種高靈敏度、高選擇性的痕量分析方法。已報道測定左旋咪唑的方法存在靈敏度低、樣品處理復雜、儀器昂貴或實際應用范圍窄等缺點。
發明內容
本發明的目的是提供一種高靈敏度、高選擇性、線性范圍寬、儀器簡單、重現性好、容易控制的用聯吡啶釕電致化學發光法測定痕量左旋咪唑的方法。構思如下:以聯吡啶釕作為電致化學發光試劑，聯吡啶釕具有水溶性好，化學性能穩定，氧化還原可逆，發光效率高，應用的PH范圍較寬，可電化學再生和激發態壽命長等特點被廣泛應用于電致化學發光法(ECL)研究中；聯吡啶釕在其氧化電位下，有微弱的發光。左旋咪唑結構中含有叔胺 基，可以有效的增強聯吡啶釕在其氧化電位下的發光強度；這樣可以通過加入左旋咪唑后聯吡啶釕溶液發光強度的變化直接檢測左旋咪唑的含量。本發明利用電致化學發光法，左旋咪唑增強聯吡啶釕發光強度，左旋咪唑濃度在2 X IO-10 I X IO-7 mol/L范圍內與聯吡啶釕發光增強成良好的線性關系。具體步驟如下:
(I)鉬電極的處理:
將鉬電極依次用1.0 i! m、0.3 i! m和0.05 u m的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在硝酸(體積百分比濃度為50%)、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘。(2)檢測方法:
將步驟(I)處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統中，直接測定發光強度；檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ^MP1-A電致化學發光檢測儀進行電致化學發光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數為4級。( 3)標準工作曲線的繪制:
在體積為350 u L的檢測池中加入含有濃度為2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L聯批唳釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液,硼砂緩沖液pH=9.0,進行電致化學發光檢測；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范圍內，IgC與發光峰增強(AJ)呈良好的線性關系，其線性回歸方程為-Al =269.6841gC-20.616，線性相關系數r =0.9977。本發明克服了已有技術在檢測時存在靈敏度低、樣品處理復雜、儀器昂貴或實際應用范圍窄等缺點，更好地提高了靈敏度和選擇性，對于低濃度的左旋咪唑的檢測易于自動化。
圖1為本發明實施例鉬電極在pH=9的12 mmol/L的硼砂緩沖溶液，聯吡啶釕濃度為5 mmol/L的發光圖。其中:a為溶液中不包含左旋咪唑；b為溶液中包含左旋咪唑。圖2為本發明實施例左旋咪唑含量與電致化學發光峰高增加量的關系圖。
具體實施例方式實施例:
(I)鉬電極的處理:
將鉬電極依次用1.0 ii m、0.3 ii m和0.05 u m的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在硝酸(體積百分比濃度為50%)、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘。(2)檢測方法:
將處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X IO^7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統中，直接測定發光強度。檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ;用MP1-A電致化學發光檢測儀進行電致化學發光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數為4級。(3)標準工作曲線的繪制:
在檢測池中加入350 u L含有不同濃度左旋咪唑和5 mmol/L聯吡啶釕的硼砂緩沖溶液(pH=9.0)，進行電致化學發光檢測；左旋咪唑在2.0X10, l.0XlO—7 mol/L范圍內，IgC與發光峰增強(AJ)呈良好的線性關系，其線性回歸方程為-Al =269.6841g^-20.616，線性相關系數r=0.9977。(4)血清樣中左旋咪唑含量的測定:
由桂林理工大學校醫院提供血清樣品中未檢出左旋咪唑，故采用加標回收實驗；取2mL血清樣品,加入2 mL飽和(NH4)2SO4溶液于離心管中,樣品在7000 rpm離心15分鐘,去上清液置于磷酸鹽緩沖溶液中(PH=7.4)透析過夜；在處理后的血清樣中分別加入濃度為
3.0X 10_9 mol/L和7.5X 10, mol/L的左旋咪唑，搖勻后直加入檢測池中，利用MP1-A電致化學發光檢測儀對待測液進行電致化學發`光測定，掃描電位0.2 1.3 V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數為4級，得到發光峰值I，根據校正曲線計算出左旋咪唑的濃度C，計算回收率，結果如表I所示:
表I加標固收試驗數據
樣品測得量加A左旋味唑量測出左旋味4總量 收率 mol Lmol 1.me 11%
~I3.0x10-:.S5-<10- P1~
I 未檢出7.540-二7.90x10--105J
權利要求
1.一種用聯吡啶釕電致化學發光法測定痕量左旋咪唑的方法，其特征在于具體步驟為: (1)鉬電極的處理: 將鉬電極依次用1.0 um>0.3 i! m和0.05 um的氧化招粉進行表面拋光處理,然后依次在體積百分比濃度為50%的硝酸、無水乙醇和純水中浸泡洗滌，取出后超聲洗滌5分鐘； (2)檢測方法: 將步驟(I)處理好的鉬電極放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑標準溶液的檢測體系統中，直接測定發光強度；檢測體系為:350 UL含有5 mmol/L聯吡啶釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液，硼砂緩沖溶液pH=9.0 ^MP1-A電致化學發光檢測儀進行電致化學發光檢測，掃描電位0.2 1.3V，光電倍增管高壓為800 V，放大倍數為4級； (3)標準工作曲線的繪制: 在體積為350 u L的檢測池中加入含有濃度為2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L聯批唳釕的12 mmol/L硼砂緩沖溶液,硼砂緩沖液pH=9.0,進行電致化學發光檢測；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范圍內，IgC與發光峰增強即AJ呈良好的線性關系，其線性回歸 方程為-Al =269.6841gC-20.616，線性相關系數r =0.9977。
全文摘要
本發明公開了一種用聯吡啶釕電致化學發光法測定痕量左旋咪唑的方法。以鉑電極為工作電極，利用左旋咪唑中含有的叔胺基對聯吡啶釕(Ru(bpy)32+)發光增強的原理，建立一種測定痕量左旋咪唑的方法。掃描電位0.2V-1.3V，光電倍增管高壓為800V，放大倍數為4級。在pH=9.0的12mmol/L硼砂底液中，左旋咪唑濃度在2×10-10~1×10-7mol/L范圍內，lgC與釕發光增強成良好的線性關系，檢出限為1.76×10-11mol/L。本發明靈敏、簡便、選擇性好，對于低濃度左旋咪唑的檢測易于自動化。
文檔編號G01N21/76GK103196898SQ201310085879
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月18日 優先權日2013年3月18日
發明者李建平, 肖穎, 魏小平 申請人:桂林理工大學