羅漢果止咳糖漿的質量檢測方法
【專利摘要】本發明提供一種羅漢果止咳糖漿的質量檢測方法，其是一種方法簡化、省時節能的、可操作性強的質量控制方法，十分有利于工業化生產的應用。
【專利說明】羅漢果止咳糖漿的質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于中藥的質量控制，具體涉及羅漢果止咳糖漿的質量控制方法。
【背景技術】
[0002]羅漢果止咳糖漿收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑》第二十冊177頁，標準代號為WS3-B-3882-98，具祛痰止咳的功能，用于感冒咳嗽及支氣管炎。羅漢果止咳糖漿在臨床上應用多年，取得比較令人滿意的療效。羅漢果止咳糖漿處方由中藥材羅漢果46g、枇杷葉176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g組成，按以下工藝制成:以上七味，除薄荷油外，其余羅漢果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次I小時,合并煎液,濾過,濾液濃縮至約200ml，放冷，加入4倍量乙醇，攪拌，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，濾過，濾液與上述濃縮液混合，加入枸櫞酸Ig及適量的薄荷油乙醇溶液、防腐劑和香精，再加水至1000ml,攪勻，即得。處方中羅漢果為葫蘆科植物羅漢果Siraiti grosvenorii (Swin gle)C.Jeffrey ex A.Μ.Lu et Z.Y.Zhang的干燥果實；枇杷葉為薔薇科植物枇杷Er1botryajaponica(Thunb.) I, indl.的干燥葉；桑白皮為桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮；白前為蘿蘑科植物柳葉白前Cynanchum stauntonii (Decne.) Schltr.ex Levl.或芫花葉白前Cyn, anchum glaucescens (Decne.) Hand.-Mazz.的干燥根莖和根；百部為百部科植物直立百部 Stemona sessilifolia(Miq.)Miq.蔓生百部 Stemona japonica(Bl.)Miq.或對葉百部Stemona tuberosa Lour.的干燥塊根；桔梗為桔梗科植物桔梗Platycodongrandiflorus(Jacq.)A.DC.的干燥根；薄荷油本品為無色或淡黃色的澄清液體，系唇形科植物薄荷Menthahaplocalyx Briq.的新鮮莖和葉經水蒸氣蒸懼、冷凍、部分脫腦加工提取的揮發油，是薄荷的主要成分之一。
[0003]羅漢果止咳糖漿原質量標準僅用常規檢查對產品質量進行控制，故需對其質量控制方法進行研究，制定確實可行的方法保證產品質量和臨床療效。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種方法簡化、省時節能的、可操作性強的羅漢果止咳糖漿的質量控制方法，十分有利于工業化生產的應用。
[0005]本發明以如下技術方案解決上述技術問題:
[0006]羅漢果止咳糖漿的質量控制方法包括以下步驟中的一種或多種:
[0007]1、用薄層色譜法對藥物中的羅漢果進行定性鑒別:
[0008]取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取羅漢果對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4?8μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0009]2、用薄層色譜法對藥物中的白前進行定性鑒別:
[0010]取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。取白前對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成白前對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4?8μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(5: 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0011]3、用高效液相色譜法測定該藥物中羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量:
[0012]照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。
[0013]色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(52: 48)為流動相；用蒸發光散射檢測器檢測。理論塔板數按羅漢果苷V峰計算應不低于 2000。
[0014]對照品溶液的制備取羅漢果苷V對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Iml分別含0.lmg、0.4mg的溶液，即得。
[0015]供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去洗脫液，繼用稀乙醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用流動相溶解，轉移至1ml量瓶中，力口流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。
[0016]測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20μ 1，供試品溶液5?20 μ I，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計算，即得。
[0017]本發明羅漢果止咳糖漿的質量控制方法，通過大量試驗研究對比，是一種方法簡化、省時節能的、可操作性強的羅漢果止咳糖漿的質量控制方法，十分有利于工業化生產的應用。
【具體實施方式】
[0018]本發明的質量控制方法是經過大量的試驗篩選得到的最佳方案，以下試驗研究為本發明的優選過程。
[0019]一、羅漢果的薄層色譜鑒別
[0020]供試品、對照藥材溶液的制備同前文
【發明內容】
(以下簡稱“前文”)，陰性對照溶液是按處方比例稱取除羅漢果外其余藥味，按制法制成陰性制劑，再按前文供試品溶液的方法制備。展開及檢視條件同前文。三批樣品(5310001、5310002、5310003)試驗結果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的綠色斑點。薄層色譜分離效果好，斑點清晰，比移值適中(Rf = 0.27)，重現性和專屬性好，陰性對照無干擾。
[0021]葫蘆素烷三萜類皂苷是羅漢果的主要有效成分之一，約占干果的3%，試驗中對以下提取純化方法進行了對比:
[0022]①取本品20ml，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0023]②取本品40ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0024]③取本品20ml，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加水5ml使溶解，加于DlOl型大孔吸附樹脂柱(內徑0.9cm,高15cm)上,用40%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液,蒸干,殘洛加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0025]④取③中用40%乙醇洗脫后的柱子繼續用70%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0026]⑤取本品50ml，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，棄去乙酸乙酯液，取水液，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去洗滌液，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0027]結果方法①③雜質較多，背景深，方法④未能將特征斑點成分提取出來，方法②⑤與前文收載方法效果相當，因前文收載方法能與白前鑒別用同一供試液，故采用。
[0028]試用了以下展開系統和檢視方法:
[0029]①正丁醇-乙醇-水(8: 2: 3)，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；
[0030]②三氯甲烷-甲醇-水(13: 7: 2)的下層溶液，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視；
[0031]③正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。
[0032]結果方法①③供試品色譜中背景較深，方法②重現性不好，特征斑點不夠明顯，而前文收載方法分離效果較好，特征斑點清晰，故采用。
[0033]二、白前的薄層色譜鑒別
[0034]供試品、對照藥材溶液的制備同前文，陰性對照溶液是按處方比例稱取除白前外其余藥味，按制法制成陰性制劑，再按前文供試品溶液的方法制備。三批樣品(5310001、5310002,5310003)試驗結果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃綠色熒光斑點(Rf = 0.55)。薄層色譜分離效果好，斑點清晰圓整，比移值適中，重現性和專屬性好，陰性對照無干擾，故收入前文。
[0035]試驗中還對以下提取方法進行了研究:
[0036]①取本品40ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液(同上述羅漢果項下提取方法②)；
[0037]②取本品20ml，用氫氧化鈉試液調節pH值至10，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0038]③取本品30ml，加入0.1 %鹽酸溶液20ml，搖勻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0039]結果方法③特征斑點不夠明顯，方法①②與前文收載方法相當，因前文收載方法能與羅漢果鑒別用同一供試液，故采用。
[0040]展開系統試用了:
[0041]①用1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板，正己烷-三氯甲烷-甲醇(5: 5: 0.2)；
[0042]②硅膠G薄層板，環己烷-乙酸乙酯-丙酮(5:1: 2)。
[0043]結果方法①比移動值偏低，邊緣效應大，方法②與前文收載方法相當，但前文收載方法為二元展開劑，較簡便，故采用。
[0044]三、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定方法研究
[0045]I儀器、試藥與樣品
[0046]儀器:日本島津LC-1OAtvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜工作站；美國奧泰ELSD2000ES蒸發光散射檢測器；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(HypersilG0LD4.6X250mm)，菲羅門C184.0X3.0mm保護柱；梅特勒-托利多AB265-S電子天平；阿修羅AXLC1820超純水機。
[0047]試藥:羅漢果苷V化學對照品(含量測定用，批號:111754-200601，中國食品藥品檢定研究院提供)，純度經檢查符合含量測定用化學對照品的技術要求，含量為100%，純度檢查詳見后；甲醇(色譜純)，水(自制超純水)，AB-8型大孔吸附樹脂(天津市光復精細化工研究所)。
[0048]樣品:羅漢果止咳糖漿(批號:5310001、5310002、5310003、101201)及不含羅漢果藥材的陰性對照樣品，廣西靈峰藥業有限公司。
[0049]2供試品溶液制備方法選擇
[0050]2.1樣品溶液的制備
[0051]對照品溶液的制備精密稱取羅漢果苷V對照品9.92mg，置1ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻(0.992mg/ml);精密量取1.0ml,3.5ml分別置1ml量瓶，加流動相至刻度，搖勻，即得(99.2 μ g/ml、347.2 μ g/ml)。
[0052]供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB_8型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脫，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去兩次洗脫液，繼續用稀乙醇10ml洗脫，收集稀乙醇洗脫液，蒸干，殘渣用流動相溶解，轉移至1ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。
[0053]陰性樣品溶液的制備陰性樣品溶液是按處方比例稱取除羅漢果外其余輔料，按制法制成羅漢果陰性樣品，再取此陰性樣品按上述“供試品溶液的制備”方法制備不含羅漢果的陰性樣品溶液。
[0054]在供試品溶液制備方法研究中，對水洗脫量、20%乙醇洗脫量進行了考察。結果以10ml水及100ml20%乙醇洗脫除雜為佳。
[0055]2.2色譜條件與系統適用性試驗
[0056]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(Hypersil G0LD4.6X250mm)，菲羅門C184.0X3.0mm保護柱；流動相:甲醇-水(52: 48)，流速:lml/min ;漂移管溫度:100°C，空氣流速:2.5L/min ;柱溫:室溫。
[0057]分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20 μ 1，供試品溶液及不含羅漢果的陰性樣品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，繪制色譜圖。此條件下羅漢果苷V與其它組分達到基線分離，分離度R > 1.5，理論塔板數按羅漢果苷V計算大于2000，羅漢果苷V保留時間約為12分鐘，見表1。陰性樣品溶液在色譜相應位置無吸收峰，可見陰性無干擾。
[0058]表1理論塔板數、分離度、保留時間數據
[0059]
【權利要求】
1.一種具有祛痰止咳作用的羅漢果止咳糖漿的質量檢測方法，其中該糖漿由中藥材羅漢果46g、枇杷葉176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g組成,按以下工藝制成:以上七味，除薄荷油外，其余羅漢果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次I小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約200ml，放冷，加入4倍量乙醇，攪拌，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，濾過，濾液與上述濃縮液混合，加入枸櫞酸Ig及適量的薄荷油乙醇溶液、防腐劑和香精，再加水至1000ml，攪勻，即得。該藥物的質量檢測方法其特征在于:該方法包括以下全部或部分內容:羅漢果的薄層色譜定性鑒別、白前的薄層色譜定性鑒別、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定。 a、羅漢果的薄層色譜定性鑒別: 取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取羅漢果對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4?8μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。 b、白前的薄層色譜定性鑒別: 取本品50ml，用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水洗液，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。取白前對照藥材lg，加水50ml，加熱回流I小時，放冷，用棉花濾過，取濾液，自“用氨試液飽和的正丁醇振搖提取2次”起，同法制成白前對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4?8μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(5: 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。 C、羅漢果特征成分羅漢果苷V的含量測定: 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(52: 48)為流動相；用蒸發光散射檢測器檢測。理論塔板數按羅漢果苷V峰計算應不低于 2000。 對照品溶液的制備取羅漢果苷V對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Irnl分別含.0.lmg、0.4mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備精密量取本品15ml，通過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm，柱高10cm)，以水10ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇10ml洗脫，棄去洗脫液，繼用稀乙醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用流動相溶解，轉移至1ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，即得。 測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20 μ 1，供試品溶液5?20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計算，即得。
【文檔編號】G01N30/90GK104034838SQ201310072531
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2013年3月7日 優先權日:2013年3月7日
【發明者】廖展葦, 陳曉軍, 丘偉業, 黃園, 周凱華, 鄧昶, 阮碧芳, 梁霞, 梁月釗 申請人:廣西靈峰藥業有限公司