一種穿王消炎膠囊hplc指紋圖譜的建立方法
【專利摘要】一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，涉及中藥制劑質量控制方法。穿王消炎膠囊用甲醇溶液超聲波提取，以穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯為對照品，以了哥王及穿心蓮為對照藥材，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫程序為梯度洗脫程序。本發明建立的穿王消炎膠囊指紋圖譜與相應的對照圖譜進行相似度評價，其相似度大于0.90，能有效的表征產品質量，更有利于監控產品的質量，能更有效的保證產品質量的長期穩定性，進而保障療效的安全性和有效性。
【專利說明】一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥制劑質量控制方法，特別是涉及一種用高效液相色譜法對穿王消炎膠囊制劑指紋圖譜的構建方法。
【背景技術】
[0002]穿王消炎膠囊是由穿王消炎片改變劑型而制得，按國家新藥審批辦法規定為中藥九類新藥。穿王消炎膠囊處方由穿心蓮和了哥王二味中藥組成，其中穿心蓮穿心蓮為爵床科植物穿心蓮如i/rograMk paniculata (Burm.f.)的干燥地上部分,為《中國藥典》及地方藥品標準收載。主要有效成分為穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯等二萜類化合物和黃酮類化合物，具有細胞分化誘導作用、保肝降酶作用和提高膽汁分泌量等藥理作用。穿王消炎膠囊具有消炎解毒。用于痰熱咳喘，腹痛，以及急慢性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎，急性腸胃炎、急性菌痢見以上癥狀者。
[0003]中藥指紋圖譜建立的是全面反映中藥所含有內在化學成分的種類與數量，進而反映中藥的質量，尤其是在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確，采用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質量。指紋圖譜作為質量控制的方法已成為業界人士的共識，國際上也多采用指紋圖譜對植物藥進行質量控制。
[0004]隨著現代醫藥的高速發展，現行的穿王消炎膠囊的質量控制標準已不能真實反映穿王消炎膠囊的內在品質及批與批之間產品質量的一致性。建立穿王消炎膠囊的指紋圖譜，對指紋圖譜主要特征峰的面積和比例的控制，能夠有效控制產品的質量，確保產品質量的穩定性。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，該方法用高效液相色譜法對穿王消炎膠囊的多種指標成分進行檢測，獲得指紋圖譜，用于評價和控制穿王消炎膠囊的質量，確保穿王消炎膠囊的安全性和有效性。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明采用以下的技術方案。
[0007]—種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法:穿王消炎膠囊用甲醇溶液超聲波提取，以穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯為對照品，以了哥王及穿心蓮為對照藥材，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫程序為梯度洗脫程序。
[0008]進一步的，前述穿王消炎膠囊指紋圖譜的建立方法如下:穿王消炎膠囊用甲醇溶液超聲波提取，濾過，取續濾液；以穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯對照品，對照品加甲醇溶解；以了哥王及穿心蓮為對照藥材，了哥王對照藥材用水煎煮后濃縮干燥，加甲醇溶液溶解，濾過，取續濾液；穿心蓮對照藥材先用濃度(V/V)為20飛0%的甲醇溶液浸泡，而后超聲波提取，濾過，取續濾液；照高效液相色譜法建立指紋圖譜。
[0009]前述方法中所述高效液相色譜法的色譜條件為:0DS C18色譜柱；流動相A為乙腈；流動相B為磷酸水溶液；檢測波長22(T300nm ;柱溫:15~40°C ;流速:1.0ml mirT1 ;洗脫程序為梯度洗脫程序。
[0010]具體的，前述穿王消炎膠囊指紋圖譜的建立方法如下:
Ca)供試品溶液制備:精密稱取穿王消炎膠囊內容物0.2~lg，加甲醇2(T50ml，稱定重量，超聲波提取15~30分鐘，冷卻至室溫，用甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液；
(b)對照品溶液制備:精密稱取穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯對照品各5~15mg，分別置IOml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得對照品溶液；
(c)對照藥材溶液制備:
了哥王對照藥材溶液:取了哥王藥材5~50g，加5~50倍量水煎煮f 3次，每次2~7小時，合并煎煮液，濾過，濃縮后減壓干燥成浸膏狀，取0.5^2g,加甲醇5(T200ml溶解，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得了哥王對照藥材溶液。
[0011]穿心蓮對照藥材溶液:取穿心蓮藥材粉末0.flg，精密稱定，至100mL錐形瓶中，精密加2(T50ml，2(T60%甲醇稱定重量，浸泡0.5~2h，超聲提取10~60 min，用20~60%甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得穿心蓮對照藥材溶液；
(d)色譜條件:色譜柱為ODSC18 (4.6.ιΧ250πιπι，5μπι)柱；流動相A為乙腈；流動相B為0.2%磷酸水溶液；檢測波長270nm ;柱溫:25°C ;流速:1.0ml mirT1 ;洗脫程序為梯度洗脫程序。
[0012](e)測定:精密吸取供試品溶液5~20μ I注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到穿王消炎膠囊的指紋圖譜。
[0013]前述穿王消炎膠囊指紋圖譜的最佳建立方法如下:
Ca)供試品溶液制備:精密稱取穿王消炎膠囊內容物0.4g，加甲醇40ml，稱重，超聲提取20分鐘，冷卻至室溫，用甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液；
(b)對照品溶液制備:精S稱取芽心連內酷及脫水芽心連內酷對照品各IOmg,分別直IOml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得對照品溶液；
(C)藥材對照溶液制備:
了哥王藥材對照溶液:取了哥王藥材20g，加20倍量的水煎煮2次，每次5小時，合并煎煮液，濾過，濃縮后減壓干燥成浸膏狀，取lg，加甲醇100mL溶解，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得了哥王藥材對照溶液；
穿心蓮藥材對照溶液:取穿心蓮藥材粉末0.5g，精密稱定，至100mL錐形瓶中，精密加25ml 40%甲醇稱定重量，浸泡I h，超聲提取30 min，用40%甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得穿心蓮藥材對照溶液；
(d)色譜條件:依利特ODS C18 (4.6mmX 250mm，5 μ m);流動相A為乙腈；流動相B為0.2%磷酸水溶液；檢測波長270nm ;柱溫:25°C ;流速:1.0ml mirT1 ;洗脫程序為梯度洗脫程序;
Ce)測定:精密吸取供試品溶液10 μ I注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到穿王消炎膠囊的指紋圖譜。
[0014]前述方法中所述的微孔濾膜是用0.45 μ m的微孔濾膜。[0015]前述方法的梯度洗脫程序的體積比濃度為:
洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例
Omin10%90%
20 min20%80%
55 min35%65%
70 min44%56%。
[0016]方法學驗證。
[0017]1、線性試驗。
[0018]分別精密量取濃度為1.048mg/ml的穿心蓮內酯對照品溶液，用甲醇分別配成濃度為 0.2096,0.1572,0.1048,0.0524,0.03144,0.02096,0.01048mg/ml 的對照品溶液。分別注入液相色譜儀中，記錄色譜峰面積，以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，R2=0.9999，結果見表1。結果表明，穿心蓮內酯在0.2096~0.01048mg間，穿心蓮內酯量
與峰面積呈良好線性關系。
[0019]表1線性關系考察結果。
【權利要求】
1.一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:穿王消炎膠囊用甲醇溶液超聲提取，以穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯為對照品，以了哥王及穿心蓮為對照藥材，照高效液相色譜法建立指紋圖譜；高效液相色譜法的色譜條件為:ODS C18色譜柱；流動相A為乙腈；流動相B為磷酸水溶液；檢測波長22(T300nm ;柱溫:15~40°C ;流速:1.0ml mirT1 ;洗脫程序為梯度洗脫程序。
2.根據權利要求1所述的一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:穿王消炎膠囊內容物用甲醇溶液超聲提取，濾過，取續濾液；以穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯為對照品，對照品以甲醇溶解；用了哥王及穿心蓮為對照藥材，了哥王對照藥材用水煎煮后濃縮干燥，加甲醇溶液溶解，濾過，取續濾液；穿心蓮對照藥材先以濃度為2(T60%，V/V的甲醇溶液浸泡，后超聲波提取，濾過，取續濾液測定；照高效液相色譜法建立指紋圖譜，其中梯度洗脫的程序如以下體積比濃度配置進行: 洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例 Omin10%90%20 min20%80%55 min35%65%70 min44%56%。
3.根據權利要求2所述的一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于: Ca)供試品溶液制備:精密稱取穿王消炎膠囊內容物0.2~lg，加甲醇2(T50ml，稱定重量，超聲提取15~30分鐘，冷卻至室溫，用甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液； (b)對照品溶液制備:精密稱取穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯對照品各5~15 mg，分別置IOml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得對照品溶液；(C)對照藥材溶液制備: 了哥王對照藥材溶液:取了哥王藥材5~50g，加5~50倍量水煎煮f 3次，每次2~7小時，合并煎煮液，濾過，濃縮后減壓干燥成浸膏狀，取0.5~2g，加甲醇5(T200ml溶解，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得了哥王對照藥材溶液； 穿心蓮對照藥材溶液:取穿心蓮藥材粉末0.flg，精密稱定，至100mL錐形瓶中，精密加20~60%，V/V的甲醇2(T50ml，稱定重量，浸泡0.5~2h，后超聲波提取10~60 min,用20-60%甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得穿心蓮對照藥材溶液； (d)色譜條件:0DS C18 (4.6mmX 250mm，5 μ m)色譜柱；流動相A為乙腈；流動相B為0.2%磷酸水溶液；檢測波長25(T280nm ;柱溫:20^30 °C ;流速:1.0ml mirT1 ； Ce)測定:精密吸取供試品溶液5~20 μ m注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到穿王消炎膠囊的指紋圖譜。
4.根據權利要求3所述一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于: (a)供試品溶液制備:精密稱取穿王消炎膠囊內容物0.4g，加甲醇40ml，稱重，超聲提取20分鐘，冷卻至室溫，用甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液； (b)對照品溶液制備:精S稱取芽心連內酷及脫水芽心連內酷對照品各IOmg,分別直IOml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得對照品溶液；(C)藥材對照溶液制備: 了哥王藥材對照溶液:取了哥王藥材20g，加20倍量的水煎煮2次，每次5小時，合并煎煮液，濾過，濃縮后減壓干燥成浸膏狀，取lg，加甲醇100mL溶解，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得了哥王藥材對照溶液； 穿心蓮藥材對照溶液:取穿心蓮藥材粉末0.5g，精密稱定，至100mL錐形瓶中，精密加.25ml 40%甲醇稱定重量，浸泡I h，超聲提取30 min，用40%甲醇補足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得穿心蓮藥材對照溶液； (d)色譜條件:依利特ODS C18 (4.6mmX 250mm，5 μ m);流動相A為乙腈；流動相B為.0.2%磷酸水溶液；檢測波長270nm ;柱溫:25°C ;流速:1.0ml min-1 ； Ce)測定:精密吸取供試品溶液10μ I注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到穿王消炎膠囊的指紋圖譜。
5.根據權利要求3或4所述一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(a)、(b)和(c)中所述微孔濾膜是用0.45 μ m的微孔濾膜濾過。
6.根據權利要求3或4所述一種穿王消炎膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:穿王消炎膠囊指紋圖譜中有7個特征共有峰，其中第5號峰來自了哥王藥材，為了哥王藥材的特征峰；第7號峰來自穿心蓮藥材，為穿心蓮藥材的特征峰脫水穿心蓮內酯；圖譜總長度為65min ； 指紋圖譜中所述的7個特征共有峰的平均保留時間(min)如下:
峰 I:7.26±1.34% -M 2:26.35±0.97% ;峰 3:30.38±1.23% ;峰 4:39.56±0.83% ;峰.5:46.13±0.56% ;峰6:47.49±0.42% ;峰 7:61.49±1.03%。
【文檔編號】G01N30/02GK103969350SQ201310035217
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年1月30日 優先權日:2013年1月30日
【發明者】肖軍平, 康興東, 尹文娟, 楊偉慶, 劉立鼎 申請人:江西普正制藥有限公司