一種化學藥物中有關物質的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種化學藥物中有關物質的檢測方法，作為化學原料藥，有關物質主要包括起始原料、工藝雜質和降解雜質，該檢測方法包括對該化學原料藥中以上雜質的定性及其定量測定。本發明為該原料藥及其制劑提供了一套可靠、穩定、全新的有關物質檢測方法，使該原料藥的合成及其制劑的工藝控制更加嚴格合理，質量更加穩定，為患者用藥的有效性、安全性提供了保障。
【專利說明】一種化學藥物中有關物質的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明是一種化學藥物奧拉西坦中有關物質的檢測方法，屬于化藥的【技術領域】。【背景技術】
[0002]奧拉西坦由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，該藥是一類能促進學習記憶能力的新型中樞神經系統藥物，能選擇性的作用于大腦皮層和海馬，激活、保護或促進神經細胞的功能恢復，而本身無直接血管活性，也無中樞興奮作用，對學習記憶能力的改善是一種持久的促進作用。奧拉西坦僅作用于中樞神經系統，能改善腦代，增強和促進青少年智力，改善老年大腦功能不全和記憶力障礙，治療神經官能癥和精神行為紊亂，尤其是老年癡呆癥，是美國FDA批準的用于治療老年癡呆的藥物之一。也可用于腦外傷、腦炎等腦部疾病的康復治療。
[0003]奧拉西坦劑型較多，如常用的注射液適用于腦損傷及引起的神經功能缺失、記憶與智能障礙等癥的治療，對高血壓腦出血患者、中、重型顱腦損傷患者、輕、中度阿爾茨海默病、癡呆癥、兒童腦癱患者及慢性精神分裂癥患者均有一定的療效。對照實驗結果顯示，奧拉西坦療效優于同類益智藥吡拉西坦。且奧拉西坦毒性極低，有極好的耐受性以及具有吡拉西坦所沒有的抗凝血酶III的作用，具有極其廣闊的應用前景。
[0004]無論是化學原料藥還是藥物制劑，都必須要在保證產品質量穩定可控的基礎之上，才能不斷的更新發展。化學藥物在起始原料、工藝合成、制劑及存放的過程中都可能帶入或產生新的有機雜質，因此找到方法簡便、專屬性強、重現性好、準確度高的檢驗方法，確保藥物在任何途徑下產生的雜質都能被準確檢出，才能保證人民的用藥安全，對企業和檢驗部門來說，也是非常理想的選擇。化學藥品，其雜質主要包括起始原料、工藝雜質、降解雜質。為了確保產品質量，要將任何途徑產生的雜質都一一檢出，需要客觀有效的檢測方法。奧拉西坦的起始原料甘氨酰胺及4-氯-3-羥基-丁酸乙酯，在生產的過程中可能帶入最終的產品當中，奧拉西坦的降解雜質是酰胺鍵水解后產生的奧拉西坦酸，在生產過程中和貯藏過程中容易產生。
[0005]目前奧拉西坦的有關物質檢測方法，主要是對奧拉西坦產品當中所檢測出來的雜質進行了總量控制，并未對單個雜質進行定性、定量的分析。本發明提供了一種檢測方法，針對可能被帶入奧拉西坦終產品中的起始原料甘氨酰胺及4-氯-3-羥基-丁酸乙酯；奧拉西坦的降解產物奧拉西坦酸進行了定性及定量分析，并進行了系統的方法學驗證。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于:提供一種化學藥物有關物質的檢測方法，這種方法針對如下產品向相關的生產、檢測機構提供檢測的指標、檢測的手段、技術方法等，以便更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，所針的對產品為奧拉西坦原料及其制劑。
[0007]本發明是這樣構成的:采用高效液相色譜法檢測化學藥物奧拉西坦中的有關物質甘氨酰胺和奧拉西坦酸。用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；酸性NaH2PO4.2H20溶液為流動相；主成分自身對照法或者標準曲線法進行定量。采用的檢測波長205nm-215nm，優選為210nm。所述的流動相酸性NaH2PO4.2H20溶液(pH2.5-4.0)濃度為0.01-0.02M，優選為
0.02M NaH2P04*2H20(pH2.8-3.5)。所述的流動相流速為0.4_0.6ml/min。采用的色譜柱柱溫 25-40°C。
[0008]采用高效液相色譜法檢測化學藥物奧拉西坦中的有關物質4-氯-3-羥基-丁酸乙酯，用氰基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水溶液為流動相；主成分自身對照法進行定量。采用的檢測波長為205nm-215nm，優選為210nm。所述的流動相甲醇-水溶液配比為35-45: 55-65，優選為38-42: 58-62。所述的流動相流速為0.4-0.8ml/min，優選為
0.5-0.7ml/min。采用的色譜柱柱溫為25_40°C。
[0009]進一步說，化學藥物奧拉西坦中的有關物質甘氨酰胺和奧拉西坦酸的測試方法如下:照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；0.01-0.02MNaH2P04.2Η20(ρΗ2.5-4.0)為流動相；檢測波長210±5nm ;柱溫25_40°C ;流量0.4-0.6ml/min ;精密稱取奧擔西坦原料藥或制劑適量(相當于奧拉西坦36mg)，加去離子水溶解并稀釋至每Iml含奧拉西坦3.6mg的溶液，作為供試品溶液。將供試品溶液稀釋1000倍，作為對照溶液。再精密量取供試溶液及對照溶液各10_20μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍以上。采用主成分自身對照法或者標準曲線法進行定量檢測。
[0010]化學藥物奧拉西坦中的有關物質4-氯-3-羥基-丁酸乙酯的測試方法如下:照高效液相色譜法，用氰基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(35-45:55-65)為流動相；檢測波長210±5nm ;柱溫25_40°C ;流量0.4-0.8ml/min ;精密稱取奧擔西坦原料藥或制劑適量(相當于奧拉西坦40mg)，加去離子水溶解并稀釋至每Iml含奧拉西坦4mg的溶液，作為供試品溶液。將供試品溶液稀釋1000倍，作為對照溶液。再精密量取供試溶液及對照溶液各10-20μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍以上。采用主成分自身對照法進行定量檢測。
[0011]具體測試方法，甘氨酰胺和奧拉西坦酸的測試方法如下:照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；0.01-0.02Μ NaH2PO4.2Η20(ρΗ2.5-4.0)為流動相；檢測波長210±5nm ;柱溫25_40°C ;流量0.4-0.6ml/min ;精密稱取奧擔西坦原料藥或制劑適量(相當于奧拉西坦36mg)，置IOml量瓶中，加去離子水溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。精密量取Iml，置IOOml量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，搖勻，精密量取Iml，置IOml量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液20 μ 1，注入高效液相色譜儀，調節檢測器靈敏度，使主成分峰高為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各20μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍以上。采用主成分自身對照法或者標準曲線法進行定量檢測。
[0012]4-氯-3-羥基-丁酸乙酯的測試方法如下:照高效液相色譜法，用氰基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(35-45:55-65)為流動相；檢測波長210±5nm ;柱溫25_40°C ;流量
0.4-0.8ml/min ;精密稱取奧拉西坦原料藥或制劑適量(相當于奧拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去離子水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液20 μ I，注入液相色譜儀，調節檢測器靈敏度，使主成分峰高為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各20 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍以上。采用主成分自身對照法進行定量檢測。
[0013]本 申請人:經過大量實驗研究，所提供的方法適合本產品的檢測方法。在有關物質甘氨酰胺和奧拉西坦酸的測試方法中，比如柱溫的選擇:采用柱溫20°C進行檢測，柱溫偏低，柱壓較高，得到峰型不理想；采用柱溫50°C進行檢測時，色譜峰保留時間較短，造成色譜峰分離度達不到要求，因此，柱溫在20°C和50°C時都達不到檢測要求。比如流動相流速的選擇:采用流量0.3ml/min進行檢測，流速減慢，色譜峰保留時間較長，峰型嚴重拖尾；采用流動相流速為0.7ml/min進行檢測時，色譜峰保留時間較短，造成色譜峰分離度達不到要求，因此，流量在0.3ml/min和0.7ml/min時都達不到檢測要求。
[0014]在有關物質4-氯-3-羥基-丁酸乙酯的測試主法中，比如柱溫的選擇:采用柱溫20°C進行檢測，色譜峰保留時間較長，峰型拖尾；采用柱溫50°C進行檢測時，色譜峰保留時間較短，造成色譜峰分離度達不到要求，因此，柱溫在20°C和50°C時都達不到檢測要求。比如流動相的選擇，采用甲醇-水(30:70)進行檢測，色譜峰保留時間較長，峰型不對稱；采用甲醇-水(50:50)進行檢測，色譜峰出峰較快，峰與峰之間達不到完全分離，因此流動相在甲醇-水(30:70)和甲醇-水(50:50)時都達不到檢測要求。
[0015]實驗例有關物質檢驗的方法研究
[0016]本品作為原料藥，雜質主要包括起始原料、工藝雜質和降解雜質。起始原料為甘氨酰胺及4-氯-3-羥基-丁酸乙酯，根據本品結構特點，本品主要的降解雜質是酰胺鍵水解后產生的奧拉西坦酸，在生產過程中和貯藏過程中容易產生，針對奧拉西坦的有關物質，我們建立了有效的檢測方法，并進行全面的方法學驗證。
[0017]1、色譜條件的擬定
[0018]檢測波長確定:采用紫外分光光度計對奧拉西坦及其所含雜質奧拉西坦酸、甘氨酰胺及4-氯-3-羥基-丁酸乙酯在190-400nm之間進行了紫外光譜掃描，結果顯示最大吸收在190nm至200nm。考慮到末端吸收干擾較多,選定210nm作為檢測波長。
[0019]另外考慮到4-氯-3-羥基-丁酸乙酯的極性較小，本實驗選擇甲醇-水(40: 60)為流動相，柱溫30°C，流速為0.6ml/min。在此條件下，4-氯-3-羥基-丁酸乙酯與奧拉西坦主峰分離度較優，分離比較完全。
[0020]下面分別對兩種檢測條件進行方法學驗證。
[0021]2、方法學驗證
[0022]2.1雜質奧拉西坦酸、甘氨酰胺的檢測
[0023]2.1.1色譜條件
[0024]流動相:0.02M NaH2P042H20 (pH3.0)
[0025]流速:0.5ml/min
[0026]柱溫:30°C。
[0027]2.1.2專屬性考察
[0028]奧拉西坦、甘氨酰胺、奧拉西坦酸分離度
[0029]取奧拉西坦、甘氨酰胺、奧拉西坦酸各適量，用去離子水溶解并稀釋制成混合溶液，取20 μ I，注入高效液相色譜儀，結果顯示各峰之間的分離度均符合要求。
[0030]2.1.3最低檢測限和最小定量限[0031]參照中國藥典2010版二部附錄XIX A檢測限下的信噪比法進行測定。精密稱取奧拉西坦、甘氨酰胺、奧拉西坦酸標準品，用去離子水溶解并逐級稀釋，量取待測溶液20 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄峰高，取信噪比為10的濃度為最小定量限，信噪比為3的濃度為最小檢測限。測得結果為:奧拉西坦最小檢測限為3.4ng，最小定量限為6.Sng ;奧拉西坦酸最小檢測限1.2ng,最小定量限為2.6ng ;甘氨酰胺最小檢測限為7ng,最小定量限為14ng。
[0032]2.1.4線性關系
[0033]精密稱取奧拉西坦酸8.0mg，去離子水定容到50ml容量瓶中，得到0.16mg/ml的對照品母液。分別配制 48 μ g/ml、32 μ g/ml、24 μ g/ml、14.4 μ g/ml、12 μ g/ml、7.92 μ g/ml,4.75 μ g/ml、1.6 μ g/ml的奧拉西坦酸對照品溶液。分別吸取20 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)，進樣濃度為橫坐標(X)，得到線性回歸方程為:Υ=33.92Χ-2.807，相關系數r=0.9997，結果表明在1.6 μ g/ml-48 μ g/ml濃度范圍內有良好的線性關系，具體數據見表1。
[0034]表1奧拉西坦酸線性關系數據
[0035]
【權利要求】
1.一種化學藥物奧拉西坦中有關物質的檢測方法，其特征在于:采用高效液相色譜法，分別以十八烷基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠為填充劑，在205-215nm波長處檢測，采用主成分自身對照法或者標準曲線法進行定量。
2.按照要求I所述的以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的檢測方法，其特征在于:流動相為酸性 NaH2PO4.2H20 溶液，濃度為 0.01-0.02M, pH 為 2.5-4 ;流速 0.4-0.6ml/min ;柱溫25-40。。。
3.按照要求I所述的以氰基鍵合硅膠為填充劑的檢測方法，其特征在于:流動相為甲醇-水溶液，配比為 35-45:55-65 ;流速 0.4-0.8ml/min ;柱溫 25-40。。。
4.按照要求2所述的以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的檢測方法，其特征在于:流動相為酸性 NaH2PO4.2H20 溶液，濃度為 0.02M, pH 為 2.8-3.5 ;流速 0.4-0.6ml/min ；柱溫30-40。。。
5.按照要求3所述的以氰基鍵合硅膠為填充劑的檢測方法，其特征在于:流動相為甲醇-水溶液，配比為 38-42:58-62 ;流速 0.5-0.7ml/min ;柱溫 30-40°C。
6.按照要求I所述的檢測方法，其特征在于:檢測波長優選為210nm。
【文檔編號】G01N30/02GK103969345SQ201310030753
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年1月28日 優先權日:2013年1月28日
【發明者】不公告發明人 申請人:北京六盛合醫藥科技有限公司