高密度熒光染料簇的制作方法
【專利摘要】本發明涉及模塊空間增強發射染料(SEED)簇，其中將多個SEED分子附加到單一聚合物鏈上。
【專利說明】高密度熒光染料簇 技術背景
[0001] 熒光染料廣泛用于生物分析（例如，DNA和蛋白質微陣列、DNA/RNA/蛋白質印跡 等）、成像（共焦、外熒光、病理學、活的和固定的體外細胞、體內全體等）和診斷（例如，體 外診斷、夾心分析、側流分析）。增強熒光染料的信號強度對熒光的這些用途是有益的，用于 增強靈敏度（例如，發現低豐度靶分子）或增加通過量（例如，減少的成像積分時間）。提 高信號強度的最簡單方法是增加熒光團濃度。然而，這種方法對于常規熒光染料通常是不 可能的，因為染料分子在高濃度下電相互作用并猝滅信號。這是對于溶液中游離染料和結 合到生物分子或表面的染料二者的情況。因此，由于在足夠高局部濃度（例如，多個染料在 單一抗體上）猝滅，任何信號增益被信號損失抵消。傳統熒光染料的另一個缺陷包括染料 通過光源光漂白或光氧化成非熒光形式，這導致染料降解和熒光信號損失。光漂白的速率 和方式通常受與溶劑分子（例如，水）相互作用的影響。在照明下光漂白限制染料壽命，在 多個時間點需要長積分時間或圖像時，這不利地影響底物的成像或檢測。
[0002] 因此，由于傳統熒光染料的這些缺點，需要能夠產生強的長持續信號的新熒光染 料。
[0003] 發明概述 本發明涉及模塊空間增強發射染料（SEED)簇，其中將多個SEED分子附加到單一聚合 物鏈上。本發明的簇圍繞在高染料密度下猝滅的染料，因此允許較高染料密度和作為附加 到鏈的染料數的函數的較高信號強度（例如，>l〇x單獨熒光團）。通過限制染料-溶劑相 互作用的水溶性染料簇的核-殼結構，也使光漂白和氧化破壞最大限度地減小。
[0004] 附圖簡述 圖1為用于細胞標記的SEED簇（左）的一個實施方案的示意圖，顯示綴合到與共同骨 架（右）結合的SEED熒光團鏈的生物分子（抗體，中）。
[0005] 圖2為水溶性鏈-結合SEED簇的熒光光譜（左），和歸一化吸收（峰）和發射 (峰）的比較，顯示濃度和發射之間線性相關，表明在結合到各簇的分子之間正在發生SEED 效果，并且在高濃度下沒有濃度介導的猝滅。
[0006] 發明詳述 本文所述的本發明的簇避免常規熒光染料的幾個關鍵缺點。一個優點是增加每簇亮 度，因為多個染料分子結合到單一簇。簇包含用于連接到生物分子或其它主體的綴合部位， 使得簇可按與常規熒光團相同的方式連接。另外，本發明的簇的光穩定性以兩種方式改善。 首先，本發明的染料分子相對疏水，并以聚集狀態存在于水溶液中，這使染料分子不易受溶 劑介導的光氧化反應影響。其次，在單一簇中結合多個染料分子保證在簇內單一染料隨機 閃爍或光漂白的情況下，簇整體上亮度僅僅略微下降，而不是完全消失（完全消失是常規 熒光團的情況），使得用簇標記的靶能夠對于成像或檢測保持可見。
[0007] 本發明的染料簇的另一個優點包括其模塊性質，這使得能夠以控制方式整合不同 的功能性，以產生多功能探針。例如，結合光穩定部分增加壽命，結合環境響應部分能夠感 測，小分子靶向劑提高特異性。預料結合多種染料產生分化，并提高信號強度，同時保持那 些染料的已知光學和化學性質。這些模塊簇的所得性質促進工作流，并改善分析結果。
[0008] 在本發明中使用的染料分子包括可以"空間增強發射染料"（SEED)或者"聚集誘 導發射體"（AIE)為特征的任何染料。SEED是一類染料，其顯示隨增加染料濃度，熒光量子 產額的非線性增加，而沒有如常規染料中見到的由于猝滅導致的信號損失（見Y. Hong， J. Lam, B. Z. Tang, ''Aggregation-Induced Emission: Phenomenon, Mechanism and Applications〃（聚集誘導發射：現象、機理和應用），ChemComm, 2009，4332-4353，其教 導全文通過引用結合到本文中）。不希望受理論限制，SEED分子一般包含綴合到分子的熒 光中心但能夠圍繞鍵軸旋轉的取代基。作為溶液中的游離染料，這種旋轉對于染料吸收的 能量產生非輻射衰減通道，從而導致染料在溶液中游離時實質上為非熒光性。當通過與相 鄰染料分子相互作用或包封在剛性基質來阻止分子內旋轉時，分子的熒光量子產額顯著增 力口，同時側基防止與相鄰染料的電子作用，使得染料分子能夠發射而不猝滅。除非另外說 明，在本文中對"染料"的引用是指能夠歸類為SEED分子的染料。
[0009] 本文所述的簇包括結合到聚合物的一些單體單元上的多個SEED分子。由于SEED 分子的疏水性，在水性條件下，它們傾向于避免與水相互作用，從而形成由疏水相互作用結 合在一起的簇。簇形成使SEED分子相互分子接觸，這抑制染料的旋轉（非福射）衰減方式， 并產生密集的染料分子簇，各簇在（或接近）其峰量子效率下獨立發射。多個SEED分子連 接到單一聚合物骨架使得能夠達到很高的局部染料密度，因此例如允許數十個染料分子結 合到生物分子。相反，在染料猝滅開始限制信號增益前，常規技術一般限于每個生物分子有 1-3個染料分子。
[0010] 本發明的簇相對于至今合成的SEED-聚合物是有利的。SEED聚合物一般為非 水溶性的高分子量聚合物。另外，這些SEED-聚合物的熒光性質需要通過以下誘導：首 先使SEED-聚合物溶于溶劑（例如，非水溶劑，例如THF)，然后通過增加其中SEED-聚 合物不可溶的非溶劑（例如，水）的濃度誘導SEED-聚合物聚集。這樣聚集成顆粒產生 SEED-聚合物的突光（見 C_T. Lai, J-L. Hong, ''Aggregation Induced Emission in Tetraphenylthiophene-derived organic molecules and vinyl polymer〃（四苯基喔 吩衍生有機分子和乙烯基聚合物中的聚集誘導發射）J. Phys. Chern. B，2010，114， 10302-10310 和 k. Qin et al. ^Luminogenic polymers with aggregation-induced emission characteristics, 〃（具有聚集誘導發射特性的發光聚合物），Progress in Polymer Science, 37 (2012) 182-209，二者的全部教導通過引用結合到本文中）。相反， 本發明的簇為低分子量，水溶性，并且能夠在不改變溶劑混合物下發熒光。
[0011] 本發明的一個實施方案包括一種簇，所述簇包括：包含兩個或更多個任選被取代 的單體單元的聚合物骨架；增溶劑；綴合部位；和沿著聚合物骨架布置的多個空間增強發 射染料分子。
[0012] 本發明的一個實施方案包括一種持續發射高密度發光簇，所述發光簇包括：包含 兩個或更多個任選被取代的單體單元的聚合物骨架；增溶劑；綴合部位；和多個空間增強 發射染料分子，所述染料分子沿著聚合物骨架布置，以便抑制旋轉衰減，并且發射在水溶液 中持續。
[0013] 本發明的一個實施方案包括一種持續發射高密度發光簇，所述發光簇對應于：
[B] v [S-B-F]w [B-F] X [B-S] y [B-C] z,其中 B為任選被取代的單體單元； S-B-F為連接有空間增強發射染料和增溶劑的單體單元； B-F為連接有空間增強發射染料的單體單元； B-S為連接有增溶劑的單體單元； B-C為連接有綴合部位的單體單元； v+w+x+y+z 為 3-100, w+x 大于或等于 3。
[0014] 在一個優選的實施方案中，v+w+x+y+z為5-80, w+x大于或等于3,在一個更優選的 實施方案中，v+w+x+y+z為15-50, w+x大于10。"持續發射"是指保持突光性質，而不由于 漂白或氧化而顯著損失信號。
[0015] "簇"是指包括至少兩個SEED分子、增溶劑和連接到聚合骨架的生物綴合部位的化 合物。
[0016] "高密度"是指簇包括多于一個SEED分子。在至少一個實施方案中，簇包括2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個染料分子。在至少一個實施方案中， 簇包括10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個染料分子。在至少一個實施方案中，簇包 括10-50個染料分子。染料分子可相同或不同。"發光簇"是指簇通過熒光或磷光發光。
[0017] "聚合物"為包含可相互相同或不同的單體單元的化合物。在至少一個實施方案 中，聚合物包含3至100個單體單元。在一個具體實施方案中，聚合物包含10至50個單體 單元。也可用流體動力學直徑限定聚合物的大小。本文所用聚合物的"流體動力學直徑" 為液體（優選含水）環境中聚合物的有效直徑，假定聚合物在溶液中形成球形物體。流體 動力學直徑可通過本領域的技術人員已知的不同技術測定，包括動態光散射（DLS)和/或 熒光相關光譜（FCS)。聚合物的流體動力學直徑隨組成聚合物的單體的類型和次序而變化。 因此，即使具有相同單體數的聚合物也可根據組成而具有不同的流體動力學直徑。在至少 一個實施方案中，化合物的流體動力學直徑小于l〇〇nm。在一個具體實施方案中，化合物的 流體動力學直徑為2-15nm。
[0018] 聚合物可包括相同的單體單元，或者可包括不同的單體單元。在任一情況下，單體 單元由選自以下的基團形成：烯基（例如，乙烯基）、丙烯酸酯（例如，丙烯酸酯、甲基丙烯 酸酯或甲基丙烯酸烷基酯）、醚（例如，環氧化物等）、胺（例如，氨基甲酸酯、尼龍類型聚合 等）或它們的組合。在一個具體實施方案中，單體單元由選自丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、乙 烯基、氨基甲酸酯、環氧化物或它們的組合的基團形成。
[0019] 在至少一個實施方案中，染料和增溶劑連接到相同的單體單元。或者，染料和增溶 劑連接到不同的單體單元。在至少一個實施方案中，形成的聚合物可由以下形成：包括染料 和增溶劑二者的單體單元、分別包括染料和增溶劑的單體單元或它們的組合。在另一個實 施方案中，聚合物也任選包括取代基。
[0020] 包括由[B]表示的那些的單體單元可任選用一個或多個取代基取代。這些任選 取代基可連接到也包括增溶劑、染料或二者的單體單元。用于單體單元的適合取代基包括 燒基（例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基）、醇（例如，輕甲基、 羥乙基、羥丙基、低聚（烷基醇）等）、低聚醚（例如，低聚（環氧乙烷）、低聚（環氧丙烷） 等）、鹽（例如，氯化銨、溴化銨、磺酸鈉等）、胺（氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基等）、硫酸 酯、磺酸酯、磷酸酯、膦酸酯、羧酸酯、酮、醛、疊氮、硫醇、胺（伯、仲或叔）、烯烴、炔烴、酯或 它們的組合。可離開單體單元或在簇的末端之一處結合的另一類任選的取代基包括光穩定 齊IJ、環境響應部分和/或小分子靶向劑。這些取代基可作為單體單元的唯一連接存在，或者 可連接到包括本文所述其它單體連接（例如，染料、增溶劑等）的單體單元。
[0021] 光穩定劑，其用于通過防止產生光反應性物類（例如，自由基或單線態氧）或減小 其濃度而防止光漂白。本文所用"光穩定劑"包括自由基清除劑、單線態氧清除劑等。在此 類中包括自由基清除劑（例如，（2, 2, 6, 6-四甲基哌啶-1-基）氧自由基，TEMPO)和單線態 氧清除劑（例如，α-生育酚等）。在一個具體實施方案中，任選被取代的單體B包括光穩 定部分，例如自由基清除劑、三線態猝滅劑或單線態氧清除劑。在一個具體實施方案中，任 選被取代的單體包括光穩定部分，例如自由基清除劑、三線態猝滅劑或單線態氧清除劑。
[0022] "環境響應部分"使得能夠感測簇環境中的化學分析物或物理變量，例如pH或溫 度。
[0023] "小分子靶向劑"提高簇的特異性。
[0024] "水性增溶劑"或"增溶劑"為提高它連接到的基質的水溶解度的部分。在至少一 個實施方案中，增溶劑在聚合物的一個或多個單體單元連接（具體地講，共價連接）到聚合 物。
[0025] 在所給簇內，增溶劑可相同或可不同。增溶劑選自親水空間排斥基團（例如，低 聚（乙二醇）、低聚糖等）、帶陽離子的基團（例如，胺）、帶陰離子的基團（例如，磺酸鹽、 羧酸、膦酸鹽、磷酸鹽等）和帶兩性離子的基團（例如，氨基-膦酸鹽、氨基-磺酸鹽，例如， N，N-二甲基-N-丙烯酰氧基乙基-N- (3-磺基丙基）-銨甜菜堿、N，N-二甲基-N-丙烯酰胺 基丙基N-(3_磺基丙基）_銨甜菜堿、2_(甲基硫基）乙基甲基丙烯酰-S-(磺基丙基）_硫 銷甜菜堿、2_[(2_丙烯酰基乙基）二甲基銨基]乙基2-甲基磷酸鹽、2-(丙烯酰氧基乙 基）-2'_(三甲基銨）乙基磷酸鹽、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰基膽堿（MPC)、2-[(3-丙 烯酰胺基丙基）二甲基氨基]乙基2'-異丙基磷酸鹽（AAPI)、1-乙烯基-3-(3-磺基丙 基）氫氧化咪唑鐘、1 _ (3-橫基丙基）-2_乙烯基批聢|||甜菜喊、N-(4-橫基丁基）-N-甲 基-N，N-二烯丙基胺銨甜菜堿（M DABS)、N，N-二烯丙基-N-甲基N-(2-磺基乙基）銨甜 菜堿、N，N-二甲基-N-(3-甲基丙烯酰胺基丙基）-N-(3-磺基丙基）銨甜菜堿、N，N-二 甲基-N-丙烯酰氧基乙基-N-(3-磺基丙基）銨甜菜堿、N，N-二甲基-N-丙烯酰胺基丙 基-N- (2-羧基甲基）-銨甜菜堿、N，N-二甲基-N-甲基丙烯酰氧基乙基-N- (3-磺基丙基） 銨甜菜堿和N, N-二甲基-N- (3-甲基丙烯酰氨基丙基）-N- (3-磺基丙基）銨甜菜堿）或它 們的組合。
[0026] 在至少一個實施方案中，各空間增強發射染料獨立地直接或通過連接基連接到所 述一個或多個單體單元。連接基部分可以為任何能夠使染料部分共價連接到單體的雙或多 官能基團。具體地講，連接基部分可包含烷基鏈、環氧烷鏈（例如，環氧乙烷/乙二醇）和 用于染料綴合的適合官能基團（例如，胺、硫醇、烯烴、炔烴、疊氮、生物綴合化學基團等）。 在一個優選的實施方案中，連接基化學性質為雙官能（即，對單體和對染料為反應性），并 且疏水。在一個供選的實施方案中，連接基為多官能（例如，三官能或四官能），包含用于 SEED分子連接的多個結合部位和用于單體連接的至少一個部位。在另一個供選的實施方 案中，連接基為多官能，并且包含用于SEED分子和單體二者的多個結合部位，使得單體能 夠在SEED簇合成后交聯。用于使染料分子連接到聚合物的單體的連接基可與用于使綴合 部位連接到聚合物的連接基相同或不同。在另一個供選的實施方案中，多官能連接基包含 多個不同配位化學組成，使得不同的SEED分子能基于使用特定化學組成以特定比率（2:1、 1:1、3:1等）連接，以使各類型的染料分子共價連接到SEED簇。
[0027] 可通過改變所用染料-單體單元數調整每簇亮度和大小（即，流體動力學直徑）， 可通過適當選擇染料調節吸收和發射波長。在至少一個實施方案中，簇內的各空間增強發 射染料是相同的。或者，在簇內有至少兩種或更多種不同的空間增強發射染料。在一個具 體實施方案中，不同的空間增強發射染料具有不同的吸收和/或發射波長。
[0028] 波長是指染料的吸收或激發波長。波長范圍可包括單一染料或多種染料的吸收或 激發波長二者，或者可以指單一染料或多種染料的僅吸收波長或激發波長。包括單一染料 或多種染料的吸收或激發波長二者的代表性波長包括300至800nm。具體地講，單一染料 或多種染料的吸收或激發波長為400至750nm。包括單一染料或多種染料的吸收波長的代 表性波長包括450至750nm。具體地講，單一染料或多種染料的吸收或激發波長為450至 650nm。包括單一染料或多種染料的激發波長的代表性波長包括380至420nm。包括單一染 料或多種染料的激發波長的代表性波長包括450至520nm。包括單一染料或多種染料的激 發波長的代表性波長包括500至550nm。包括單一染料或多種染料的激發波長的代表性波 長包括600至650nm。具體地講，單一染料或多種染料的吸收或激發波長為650至800nm。
[0029] 簇的總體性質可通過控制不同組分之比來調節。在一個實施方案中，控制各簇中 不同空間增強發射染料之間的比率。在一個具體實施方案中，在簇內存在等量（1:1比率） 的兩種不同染料。或者，兩種染料以例如但不限于1:2、1:3、1:4或1:5的比率存在。在本 發明的另一個實施方案中，簇包括二、三、四或五種不同的空間增強發射染料。在本發明的 另一個實施方案中，簇包括四種不同的空間增強發射染料。在本發明的另一個實施方案中， 簇包括三種不同的空間增強發射染料。在本發明的另一個實施方案中，簇包括兩種不同的 空間增強發射染料。當簇中存在多于兩種染料時，也可控制這些染料的比率。例如，簇可包 含均為等量（例如，1:1:1)或不同量（例如，1:2:1)的三種不同染料。因此，預期在包含多 于兩種染料的簇中染料比率的類似控制。
[0030] 類似地控制各簇中空間增強發射染料（無論相同還是不同）和增溶劑（無論全 部相同還是不同）之間的比率。在一個具體實施方案中，空間增強發射染料和增溶劑以等 量（1:1比率）存在于簇內。或者，可在簇內存在不等量的空間增強發射染料和增溶劑。例 如，空間增強發射染料和增溶劑可以例如但不限于1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或 1:10的比率存在。染料與增溶劑之比取決于很多因素，例如簇的總體大小、染料的大小、單 體的疏水性或簇中的染料分子數。
[0031] 可在本發明中使用包含具有SEED分子性質的任何染料。用于制備SEED分子的基 本熒光團分子可選自任何已知的有機熒光團種類，例如菁、咕噸（若丹明、熒光素）、硼-二 吡咯亞甲基、硼聯吡啶、萘、香豆素、吖啶、吖啶f|!、四吡咯、四苯基乙烯、噁嗪、芘、噁二唑、亞 酞菁、碳批陡（carbopyridin)、苯并批陡纟_ (benzopyridinium)、酞菁等，并且用多個能夠 分子內旋轉的懸垂綴合基（例如，苯基）適當官能化。
[0032] 代表性SEED分子包括以下：
【權利要求】
1. 一種簇，所述簇包含： 包含兩個或更多個任選被取代的單體單元的聚合物骨架； 增溶劑； 綴合部位；和 沿著所述聚合物骨架布置的多個空間增強發射染料分子。
2. 權利要求1的簇，其中將至少兩種空間增強發射染料連接到一個或多個所述單體 單元。
3. 權利要求1的簇，其中所述聚合物包含3至100個單體單元。
4. 權利要求3的簇，其中所述聚合物包含10至40個單體單元。
5. 權利要求1的簇，其中所述簇的流體動力學直徑小于100nm。
6. 權利要求5的簇，其中所述簇的流體動力學直徑為2-15nm。
7. 權利要求1的簇，其中各單體單元由獨立選自以下的基團形成：烯基、丙烯酸酯、醚 和胺或它們的組合。
8. 權利要求7的簇，其中所述單體單元由選自以下的基團形成：丙烯酸酯、甲基丙烯 酸酯（methylacyrylate)、乙烯基、氨基甲酸酯和環氧化物或它們的組合。
9. 權利要求1的簇，其中所述增溶劑選自包含以下的基團：親水空間排斥基團、帶陽 離子的基團、帶陰離子的基團和帶兩性離子的基團或它們的組合。
10. 權利要求1的簇，其中各空間增強發射染料獨立地直接或通過連接基連接到所述 一個或多個單體單元。
11. 權利要求1的簇，其中所述簇內各空間增強發射染料是相同的。
12. 權利要求1的簇，其中至少兩種或更多種不同的空間增強發射染料在所述簇內。
13. 權利要求12的簇，其中不同的空間增強發射染料具有不同的吸收和/或發射波 長。
14. 權利要求13的簇，其中所述波長在300和850nm之間。
15. 權利要求14的簇，其中各簇中不同空間增強發射染料之間的比率受控制。
16. 權利要求1的簇，其中各空間增強發射染料獨立選自若丹明、熒光素、曙紅、菁、硼聯 批陡、咕噸、碳批陡（carbopyrinins)、卩丫聢_、苯并批陡鐵（benzopyriniums)或卩丫聢趨。
17. 權利要求1的簇，其中各簇中空間增強發射染料和增溶劑之間的比率受控制。
18. 權利要求1的簇，其中所述綴合部位為選自以下的反應性基團：生物素、羧基、琥 珀酰亞胺基酯、磺基-琥珀酰亞胺基酯、N-羥基琥珀酰亞胺基酯、尸胺、異硫氰酸酯、異氰酸 酯、馬來酰亞胺、鹵代乙酰胺（例如，溴乙酰胺）、酰鹵、酰肼、肼、乙烯基砜、二氯三嗪、亞磷 酰胺、磺酰鹵、烷基酰亞胺基酯、芳基酰亞胺基酯、碳二亞胺、酐和酰疊氮；或選自以下的官 能團：伯胺、仲胺、肼衍生物、羥胺衍生物、吡唑啉酮、巰基、羧基、羥基、硫醇、咪唑、硫代磷酸 酯和包括醛和酮的羰基。
19. 權利要求18的簇，其中所述綴合部位在所述聚合物的末端或沿著所述聚合物的 骨架。
20. 權利要求18的簇，其中所述綴合部位可結合到靶。
21. 權利要求20的簇，其中所述靶為生物分子。
22. 權利要求21的簇，其中術語"生物分子"包括核酸（例如，DNA或RNA);核苷酸；包 含或衍生為包含一個或多個氨基、巰基、羰基、羥基、羧基和硫代磷酸酯基團的核苷酸；包含 或衍生為包含一個或多個氨基、巰基、羰基、羥基、羧基和硫代磷酸酯基團的含氧聚核酸或 脫氧聚核酸；微生物細胞，外膜囊泡；病毒；藥物；激素；細胞；細胞膜；毒素；寡核苷酸；適 配子；蛋白質；蛋白質片段；抗體；抗原；抗體片段（例如，Fab);糖類、蛋白聚糖、凝集素、月旨 類、肽、小分子（例如，生物素、生長因子、激素、維生素、治療劑、藥物）；聚合物顆粒或玻璃 珠粒。
23. -種持續發射高密度發光簇，所述發光簇包括： 包含兩個或更多個任選被取代的單體單元的聚合物骨架； 增溶劑； 綴合部位；和 多個空間增強發射染料分子，所述染料分子沿著所述聚合物骨架布置，以便抑制旋轉 衰減，并且使發射持續。
24. -種持續發射高密度發光簇，所述發光簇對應于： [B] v [S-B-F]w [B-F] X [B-S] y [B-C] z,其中 B為任選被取代的單體單元； S-B-F為連接有空間增強發射染料和增溶劑的單體單元； B-F為連接有空間增強發射染料的單體單元； B-S為連接有增溶劑的單體單元； B-C為連接有綴合部位的單體單元； v+w+x+y+z 為 3-100, w+x 大于或等于 3。
25. 權利要求24的簇，其中任選被取代的單體B包括光穩定部分，例如自由基清除劑、 三線態猝滅劑或單線態氧清除劑。
26. 權利要求24的簇，其中任選被取代的單體B包括環境感測體，例如熒光pH感測 體、溫度感測體或離子感測體。
27. -種標記靶分子的方法，所述方法包括在一定條件下培育要用權利要求1或權利 要求23的簇標記的靶分子，所述條件使得所述簇變得與所述靶分子結合。
28. 權利要求27的方法，其中所述靶分子為生物分子。
【文檔編號】G01N33/58GK104114646SQ201280070451
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2012年12月19日 優先權日:2011年12月23日
【發明者】P.J.麥克洛斯基, S.賈因, A.納塔拉詹, A.A.P.伯恩斯 申請人:通用電氣公司