專利名稱：一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物學檢測技術領域，具體涉及一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒。
背景技術：
流行性出血熱(EHF)又稱腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever withrenal syndrome, HFRS ),是由布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Hantavirus)中某些病毒引起，并以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。臨床上以發熱、休克、充血性出血和急性腎功能衰竭為主要表現，并常伴有腔道出血、中樞神經系統并發癥、肺水腫等多種并發癥。腎綜合征出血熱分布于全世界30多個國家，疫源地分布于五大洲70多個國家，已成為世界公共衛生問題。我國是受腎綜合征出血熱危害最為嚴重的國家，年報告發病人數約為4 6萬，占世界報告病例總數的90%以上，高發疫區發病率在50/10萬左右，偶有暴發流行，病死率高達30%。該病在我國分布范圍廣、疫區類型復雜，是我國最嚴重的蟲媒傳染病之一 O漢坦病毒為分節段的負鏈RNA病毒，其基因組由大(L)、中(M)和小(S)三個RNA片段組成，分別編碼依賴RNA的RNA多聚酶、包膜糖蛋白(Gl和G2)和核殼體蛋白。漢坦病毒基因組RNA的5’端和3’端的15 30個堿基互補，這些互補序列可以保持RNA的穩定性，并可能在轉錄或復制的過程中被RNA聚合酶識別，啟動合成新的RNA。11個堿基的最末端序列“TAGTAGTAGAC”為所有漢坦病毒所共有，是漢坦病毒的重要基因特征之一，是區分漢坦病毒和布尼亞病毒科其它病毒的重要依據。漢坦屬病毒和布尼亞病毒科其它病毒在血清學上沒有交叉反應。目前流行性出血熱病毒抗體傳統的檢測方法是采用血清學診斷方法，包括間接酶免吸附試驗檢測EHF IgG抗體、膠體金法、免疫熒光試驗檢測雙份血清IgG抗體等，這些方法均在一定程度上易出現假陽性或假陰性現象，給流行性出血熱的臨床診斷帶來一定干擾。ELISA法IgM捕獲法檢測EHF IgM抗體，若待測血清中含有流行性出血熱病毒，則流行性出血熱病毒IgM抗體即與EHF酶結合物、兔抗人-1gM單抗結合，并結合在微孔壁表面，通過底物作用顯色，用以特異性的檢測待測血清中的流行性出血熱IgM抗體，該檢測方法靈敏度高、特異性強。
實用新型內容本實用新型所要解決的技術問題是:提供一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，應用IgM捕獲ELISA法檢測EHF IgM抗體，以減少假陽性或假陰性現象對臨床診斷帶來的干擾，并且使該試劑盒能夠對流行性出血熱進行快速、準確的檢測，同時誤差小、檢測靈敏度高、對檢測設備要求低。為解決上述技術問題，本實用新型的技術方案是:[0008]所述盒體內設有EHF酶標板、封板膜、EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶，所述盒體內部設有一個橫向隔斷，使所述盒體分成一個上部的用于容納所述EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶的空腔和一個底部的用于容納所述EHF酶標板的空腔；所述EHF酶標板上設有至少5個具有抗人IgM單抗層的透明反應孔。優選的，所述EHF酶標板上設有5 95個反應孔。更進一步優選的,所述EHF酶標板上設有48個反應孔。優選的，所述EHF酶標板包括板架和多個可拆卸安裝在所述板架上的反應板條，所述反應孔設置在所述反應板條上。優選的，所述盒體上部的空腔設有還一個縱向隔斷，所述底物A溶液瓶和底物B溶液瓶放入其中的一個空腔，所述EHF酶結合物溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶放置于另一個空腔。采用上述技術方案后，本實用新型的有益效果是:由于本實用新型采用ELISA法IgM捕獲法檢測EHF IgM抗體，與ELISA法間接法等其他方法相比，本實用新型靈敏度高、特異性強，實驗操作僅需一步即可出結果，因此，本實用新型不但減少了假陽性或假陰性現象對臨床診斷帶來的干擾，使該試劑盒能夠對流行性出血熱進行快速、準確的檢測，而且誤差小、檢測靈敏度高、對檢測設備要求低。
圖1為本實用新型實施例打開后俯視圖；圖2為本實用新型實施例內部正視示意圖；圖3為本實用新型實施例酶標板的示意圖；其中，1、盒體；2、EHF酶結合物溶液瓶；3、底物A溶液瓶；4、底物B溶液瓶；5、EHF陰性對照溶液瓶；6、EHF陽性對照溶液瓶；7、終止液溶液瓶；8、透明反應孔；9、板架；10、反應板條；11、橫向隔斷；12、縱向隔斷。
具體實施方式
實施例1一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒如圖1、圖2和圖3所示，本實施例試劑盒包括盒體1，盒體I內設有EHF酶標板(如圖3所示)、封板膜、EHF酶結合物溶液瓶2、底物A溶液瓶3、底物B溶液瓶4、EHF陰性對照溶液瓶5、EHF陽性對照溶液瓶6和終止液溶液瓶7 ；EHF酶標板上設有多個包被有固相兔抗人IgM單克隆抗體的透明反應孔8 ；EHF酶標板上設有48個反應孔。EHF酶標板包括板架9和多個可拆卸安裝在板架9上的反應板條10，透明反應孔8設置在反應板條10上。盒體I內部設有一個橫向隔斷11，使盒體分成一個上部用于容納溶液瓶的空腔和一個底部用于容納板架9的空腔，橫向隔斷11為硬質材料，盒體I上部空腔設有還一個縱向隔斷12，底物A溶液瓶3和底物B溶液瓶4放入其中的一個空腔，其他溶液瓶放置于另一個空腔。實施例2—種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒本實施例中:EHF酶標板上設有5個反應孔。其余同實施例1。實施例3一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒本實施例中:EHF酶標板上設有95個反應孔。其余同實施例1。本實用新型試劑盒的性能指標檢測:(I)陰性參考品符合率:用10份該試劑陰性參考品檢測，檢測結果全部成陰性。(2)陽性參考品符合率:用10份該試劑陽性參考品檢測(包括強、中、弱)檢測，檢測結果全部成陽性。
(3)精密性:用I份精密性參考品做10個測試，CV值不高于10%。(4)臨床實驗結果:用本試劑盒檢測已確診的臨床樣本1000例(其中EHF陽性50例)，檢測結果顯示，陰性符合率100%，陽性符合率100%，總符合率100%。檢測實例:共檢測臨床血清樣本1000例(其中EHF陽性50例)，使用本實用新型方法進行檢測，其特異性和敏感性均為100%。表I本實用新型EHF試劑盒檢測結果與臨床診斷結果比較
權利要求1.一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，其特征在于:所述盒體內設有EHF酶標板、封板膜、EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶，所述盒體內部設有一個橫向隔斷，使所述盒體分成一個上部的用于容納所述EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶的空腔和一個底部的用于容納所述EHF酶標板的空腔；所述EHF酶標板上設有至少5個具有抗人IgM單抗層的透明反應孔。
2.如權利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標板上設有5 95個反應孔。
3.如權利要求2所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標板上設有48個反應孔。
4.如權利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標板包括板架和多個可拆卸安裝在所述板架上的反應板條，所述反應孔設置在所述反應板條上。
5.如權利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于:所述盒體上部的空腔設有還一個縱向隔斷，所述底物A溶液瓶和底物B溶液瓶放入其中的一個空腔，所述EHF酶結合物溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶放置于另一個空腔。
專利摘要本實用新型公開了一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，所述盒體內設有EHF酶標板、封板膜、EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶。本實用新型采用IgM捕獲ELISA法檢測EHF IgM抗體，以減少假陽性或假陰性現象對臨床診斷帶來的干擾，并且使該試劑盒能夠對流行性出血熱進行快速、準確的檢測，同時誤差小、檢測靈敏度高、對檢測設備要求低。
文檔編號G01N33/577GK203011926SQ20122072607
公開日2013年6月19日 申請日期2012年12月24日 優先權日2012年12月24日
發明者楊致亭, 楊愛香, 王春光, 沈孝功, 劉發新, 劉海波, 邱香廷, 宋玉翠 申請人:濰坊市康華生物技術有限公司