專利名稱：Abo血型反定型膠體金干試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及輸血醫學領域，尤其涉及一種ABO血型反定型膠體金干試劑盒。
背景技術：
ABO血型系統是根據紅細胞上A及B凝集原的不同，將血型分為O、A、B及AB血型。A型血紅細胞上含A抗原，血清中含抗B抗體出型血紅細胞上含B抗原，血清中含抗A抗體；0型血紅細胞上則沒有A及B抗原，血清中含抗A及抗B抗體；AB型血紅細胞上含A及B兩種抗原，血清中則不含抗A及抗B抗體。A抗原和抗A抗體，B抗原和抗B抗體會發生免疫結合反應，使紅細胞發生凝聚。ABO血型是由紅細胞表面抗原和血清中的抗體兩者共同決定的。利用標準的抗A、抗B抗體檢測紅細胞抗原，稱之為正定型；用標準的A及B抗原檢測血清中的抗體，稱之為反定型。正反定型同時檢測，才能正確判斷ABO血型。正確的血型鑒定是保證臨床輸血安全和搶救生命的重要工作，ABO血型檢測是常規的輸血前血型血清學檢測項目之一，為了保證正確的血型鑒定，衛生部在2000年發文(衛醫法[2000] 184號)明確規定:每位供血及受血的個體均要進行ABO血型正反定型。目前臨床實驗室最常用的ABO血型反定型的鑒定方法是血凝試驗和微柱凝膠試驗。血凝試驗中用到的標準A型、B型和O型紅細胞，保存期短，一般為2 8°C條件下保存3個月，且容易發生微生物污染及溶血現象。微柱凝膠法檢測時則需要特制的凝膠卡，同時需配備專用離心機，檢測成本較高。除以上兩種常用的方法之外，還有磁珠法。磁珠法在使用前，需進行試劑的復溶，復溶后的·試劑存放時間較短，一般7天內必須使用完，而且需要專門的磁化程控振蕩器。目前，反定型用紅細胞試劑存在有效期短、保存條件苛刻、質量不穩定等問題，容易導致血型鑒定出差錯，甚至出現嚴重輸血事故。所以急需一種使用方便、有效期長、準確性好、成本較低的檢測ABO血型反定型的試劑盒。
實用新型內容本實用新型所要解決的技術問題是，提供一種使用方便、有效期長、準確性好、成本較低的檢測ABO血型反定型的膠體金干試劑盒。為了解決上述問題，本實用新型提供了 ABO血型反定型膠體金干試劑盒，其特征在于，包括反應板和反應孔，反應孔上包被有干燥之后的紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，反應板上設置3N個反應孔,分為三橫排和N縱排,其中第一橫排標有字母A,所對應的孔為A反應孔，第二橫排標有字母B，所對應的孔為B反應孔，第三橫排標有字母0，所對應的孔為O反應孔，或者分為三縱排和N橫排，其中第一縱排標有字母A，所對應的孔為A反應孔，第二縱排標有字母B，所對應的孔為B反應孔，第三縱排標有字母0，所對應的孔為O反應孔，其中N=l，2，3,4……，反應孔為圓形結構，孔底光滑呈U型，反應孔上設置密封蓋，所述A反應孔包被有干燥之后的A紅細胞膜抗原金粒子與基礎液,所述B反應孔包被有干燥之后的B紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，所述O反應孔包被有干燥之后的O紅細胞膜抗原金粒子與基礎液。紅細胞膜抗原金粒子與基礎液均可以使用市售常規產品，可以通過購買獲得。反應板對產品測試性能有直接影響，如造成假陰、弱陽或假陽等現象，為了篩選到適合ABO血型反定型試劑盒(粒子法)的反應孔，本實用新型提出了反應孔尺寸的優選方案，所述反應孔的孔徑為13mm IOmm,優選為13mm ;孔深為1.5mm 3.0mm,優選為1.5mm。所述反應板的材質優選為PET、PVC或PS塑料。本實用新型的優點在于，本實用新型一種使用方便、有效期長、準確性好、成本較低的檢測ABO血型反定型的膠體金干試劑盒，解決了新鮮紅細胞保存期短的問題。試劑盒以干試劑盒形態存在，將液體干燥直接包被在反應孔，檢測時直接滴加血清或血漿樣本即可反應，結果容易觀察，有效期長，可以室溫保存。ABO血型反定型膠體金試劑一般在2-20°C條件下保存有效期不低于12個月，而且具有靈敏度高、使用方便、結果好判讀及成本較低等優點。
圖1為ABO血型反定型膠體金試劑盒的內部構造，其中I為反應孔，2為反應板。圖2為標號方式。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本實用新型。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。應理解，這些實施例僅用于說明本實用新型而不用于限制本實用新型的范圍。實施例1.ABO血型反定型膠體金干試劑盒ABO血型反定型膠體金試劑盒的內部構造如圖1所示，包括反應板2和反應孔1，反應孔I上包被有干燥之后的紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，反應板2上設置3N個反應孔，分為三橫排和N縱排，其中第一橫排標有字母A，所對應的孔為A反應孔，第二橫排標有字母B，所對應的孔為B反應孔，第三橫排標有字母0，所對應的孔為O反應孔，其中N=I，2，3,4……，反應孔為圓形結構，孔底光滑呈U型，所述A反應孔包被有干燥之后的A紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，所述B反應孔包被有干燥之后的B紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，所述O反應孔包被有干燥之后的O紅細胞膜抗原金粒子與基礎液。紅細胞膜抗原金粒子與基礎液均可以使用市售常規產品，可以通過購買獲得。實施例2.反應孔尺寸對干試劑盒性能的影響本公司產品ABO血型反定型膠體金干試劑盒(粒子法)的測試方法采用微量板法(U型板)，反應板對產品測試性能有直接影響，如造成假陰、弱陽或假陽等現象，為了篩選到適合本公司產品ABO血型反定型膠體金干試劑盒(粒子法)的反應孔，特進行此試驗。主要材料:(1)ABS材料的反定型孔板；(4)振蕩器(江蘇康健，編號:YH-DFX-003，型號:KJ_201BD)；(5)倍比稀釋的抗-A/B血型定型試劑(單克隆抗體)；[0025](6 ) EDTA.2K 抗凝血。方法步驟:方法:反定型試劑為ABO血型反定型干試劑(粒子法)，檢測方法均為微孔板振蕩法。步驟:1.在包被有ABO紅細胞膜血型抗原粒子的反應孔中加入一定量待測血清或倍比稀釋的單克隆抗體，手動使液體完全擴散于反應孔；2.反應板置于振蕩器振蕩數分鐘，判讀結果，記錄。實驗結果:結果好壞的判讀指標為凝集顆粒的形態，要求陽性反應的凝集顆粒集中在反應孔中心形成大凝集塊，陰性反應的反應孔中無肉眼可見細小凝集顆粒。具體標號見圖2，經過大量的臨床試驗最后確定的優選方案為A排的標有4的反應孔。用于篩選的反應孔的尺寸如圖2所 示，同一排的孔的上表面孔徑一致，即Da=13mm、Db=12mm、Dc=I 1mm、Dd=IOmm,同一列的孔的深度一致，即 d4=l.5mm、d3=2.0mm、d2=2.5mm、dl=3.0mm。因此優選方案A排的標有4的反應孔的孔徑為13mm,孔深為1.5mm。實施例3.ABO血型反定型膠體金干試劑盒的制備方法I)制備膠體金溶液由氯金酸在還原劑枸櫞酸鈉作用下，聚合成大小為40nm 60nm的金顆粒溶液。2)制備紅細胞膜血型抗原提取物紅細胞膜血型抗原提取物是采用低滲壓溶液法，分別破碎A型紅細胞、B型紅細胞和O型紅細胞，然后離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質即為紅細胞膜血型抗原提取物。低滲溶液為0.1%的CaCl2溶液，不僅可以降低成本，還可以保護膜抗原的完整性，防止膜抗原的不穩定性。3)標記將制備好的膠體金顆粒溶液調節pH至5.5，加入待標記紅細胞膜血型抗原提取物，反應5分鐘。可以使用NaOH、Na2CO3^ KOH 或者 K2CO3 調節 pH 至 5.5。4)離心3000r/min離心3分鐘，棄上清，沉淀即紅細胞膜抗原金粒子。5)復溶將紅細胞膜抗原金粒子復溶于基礎液。基礎液的配方如下:Trizma base3.9325g檸檬酸鈉2.86g濃鹽酸1.739ml酪蛋白5g聚乙烯吡咯烷酮 Ig蔗糖60g牛血清白蛋白5.0g[0054]疊氮鈉Ig超純水定容至1L。6)反應板親水處理:用親水處理液浸潰反應板，浸潰時間為IOmin,其中親水處理液配方如下:曲拉通X-100:1.0 5.0g,超純水定容至1L。7)分裝:將步驟(5)獲得的紅細胞膜抗原金粒子溶液分裝于對應的Α、Β、0反應孔中，每孔IOul。8)干燥保存:將步驟(7)獲得的反應板進行干燥處理，所述干燥為抽濕機抽干，將干燥后的包被有紅細胞膜抗原金粒子溶液的反應板和干燥劑封裝于鋁箔袋內保存。實施例4.ABO血型反定型膠體金干試劑盒的檢測結果I)半成品檢驗要求紅細胞膜抗原金粒子與相應的血型抗體產生陽性反應，即在反應板微孔中有凝集塊出現。而與不含有紅細胞膜抗原金粒子對應的血型抗體產生陰性反應，即在反應板微孔中有無凝集塊出現。2)保存實驗分裝后經半成品檢驗合格的試劑在2 8°C下保存12個月，保存期間，ABO血型反定型膠體金試劑具有以下檢測結果:( I)外觀試劑密封不漏液、無絮狀、不溶物或其它漂浮物質，干試劑盒的話包裝密封不漏氣，外觀平整，內容物整齊。(2)靈敏度用已注冊上市的抗A抗B血型正定型試劑和抗H試劑與本試劑相應抗原金粒子溶液反應，結果應達到表I所示標準。表IABO血型反定型膠體金試劑靈敏度檢測
權利要求1.ABO血型反定型膠體金干試劑盒，其特征在于，包括反應板和反應孔，反應孔上包被有干燥之后的紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，反應板上設置3N個反應孔，分為三橫排和N縱排，其中第一橫排標有字母A,所對應的孔為A反應孔,第二橫排標有字母B,所對應的孔為B反應孔，第三橫排標有字母0，所對應的孔為O反應孔，或者分為三縱排和N橫排，其中第一縱排標有字母A，所對應的孔為A反應孔，第二縱排標有字母B，所對應的孔為B反應孔，第三縱排標有字母0，所對應的孔為O反應孔，其中N=I，2，3,4……，反應孔為圓形結構，孔底光滑呈U型，反應孔上設置密封蓋，所述A反應孔包被有干燥之后的A紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，所述B反應孔包被有干燥之后的B紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，所述O反應孔包被有干燥之后的O紅細胞膜抗原金粒子與基礎液。
2.根據權利要求1所述的ABO血型反定型膠體金干試劑盒，其特征在于，所述反應孔的孔徑為13謹 ICtam,孔深為1.5mm 3.Ctam。
3.根據權利要求3所述的ABO血型反定型膠體金干試劑盒，其特征在于，所述反應孔的孔徑為13_，孔深為1.5_。
4.根據權利要求1所述的ABO血型反定型膠體金干試劑盒，其特征在于，所述反應板的材質為PET、PVC或PS 塑料。
專利摘要本實用新型公開了一種ABO血型反定型膠體金干試劑盒，包括反應板，紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，反應板上設置3N個反應孔，分別放置A紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，B紅細胞膜抗原金粒子與基礎液和O紅細胞膜抗原金粒子與基礎液，紅細胞膜抗原金粒子與基礎液干燥在反應孔上，反應孔為圓形結構，孔底光滑呈U型。本實用新型通過制備紅細胞膜血型抗原提取物，然后進行膠體金標記，解決了新鮮紅細胞保存期短的問題。試劑盒一般在2-20℃條件下保存有效期不低于12個月，而且具有靈敏度高、使用方便、結果好判讀及成本較低等優點。
文檔編號G01N33/80GK203101406SQ201220684848
公開日2013年7月31日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者胡晶高, 汪大明, 林永志, 張林華 申請人:英科新創(廈門)科技有限公司