專利名稱：一種流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于衛生機械設備領域，尤其涉及一種流動注射化·學發光霍亂弧菌檢測器，具體地說，是將樣品處理、加樣、反應和檢測直接集成在檢測器中，發揮一體化、多功能的優勢，該一體化裝置適用于樣品霍亂弧菌的在線檢測。
背景技術：
霍亂(cholera)是由霍亂弧菌引起的一種烈性腸道傳染病，以發病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是甲類傳染病之一，臨床上以劇烈無痛性瀉吐，米泔水樣便，嚴重脫水，肌肉痛性痙攣及周圍循環衰竭等為特征。嚴重者可因休克、尿毒癥或酸中毒而死亡。霍亂弧菌是腸道傳染病的監測病原，也是常見的水體污染病原。目前，有關霍亂弧菌的檢測多采用傳統的培養鑒定方法，操作復雜，檢測時間長，通常需要2 - 3天，甚至更長時間才能出結果，不能完全滿足公共衛生安全檢測的需要。因此開發研究一種簡便、快速、準確、靈敏、經濟的霍亂弧菌檢測新方法新技術具有極其廣闊的應用前景，對有效解決霍亂弧菌監測這一重要公共衛生問題，無疑具有極其重要的意義。免疫傳感器選擇性好、靈敏度高、操作簡便，與其它換能器相結合在近年來得到迅速發展。而化學發光(CL)分析技術以其靈敏度高、選擇性好、裝置簡單和檢測速度快等優點在臨床分析中引起廣泛重視。化學發光酶免疫測定法(CLEIA)將免疫分析法和化學發光法二者有機結合起來。是繼酶免疫測定(EIA)、放射免疫測定(RIA)之后發展起來的一種新型免疫標記測定技術，它集靈敏的化學發光分析和特異的免疫測定于一體，以其快速、敏感、特異等特性可與酶免疫測定和放射免疫測定相媲美，又以其試劑無毒、安全穩定、價廉易得而優于后兩者，是一種很有發展前途的生物學檢測技術。該技術將酶免疫的單克隆抗體的特異性和化學發光的敏感性以及酶促反應交融于一體，可用于體內微量物質的測定。這為檢測霍亂弧菌開辟了一條嶄新的思路。病原菌的在線檢測是衛生領域一個研究熱點。病原菌的在線檢測通過安全的操作程序和正確使用檢測設備和設施，可減少或消除實驗室工作人員、其他人員和外環境受到潛在有害病原體的危害，同時實現病原菌的在線檢測。
發明內容本實用新型的目的在于提供一種可用于在線檢測的流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器。可通過樣品前處理濾件裝置的設計達到對樣品進行過濾并對目標物進行濃縮的目的，并通過霍亂弧菌化學發光檢測反應管的空間設計，實現應用化學發光法對霍亂弧菌的檢測，并通過與流動注射泵、光學分析儀的連接，實現霍亂弧菌的流動在線檢測，從而提高霍亂弧菌監測和檢測的應急反應速度。本實用新型的目的是這樣實現的，所述的一種流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器，包括一個樣品前處理濾件、進樣管、蠕動泵、流動注射泵、霍亂弧菌發光檢測器、光電倍增管和電腦；前處理濾件包括前濾件和后濾件；其結構特點為在前濾件與后濾件之間安裝閥門；進樣管一端接在蠕動泵上，另一端與前濾件的進口相連接，前濾件的出口經閥門與后濾件的進口連接，在后濾件的過濾側設有兩個開口，一個過濾側開口為洗脫液進口，另一個過濾側開口為洗脫樣本的出口，洗脫液進口和洗脫樣本的出口分別設有洗脫液進口閥門和洗脫樣本的出口閥門；洗脫樣本的出口經洗脫樣本的出口閥門后與流動注射泵上的濃縮后樣本管相連接，在流動注射泵上設有連接洗液的進樣管口、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口和連接魯米諾底物的進樣管口 ；濃縮后樣本管、連接洗液的進樣管口、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口和連接魯米諾底物的進樣管口均連通到檢測進液管路上，檢測進液管路連接到霍亂弧菌發光檢測器；霍亂弧菌發光檢測器設置有加熱器件，溫控器件與加熱器件連接；在霍亂弧菌發光檢測器上設置有光電倍增管，光電倍增管連接電腦。 所述的霍亂弧菌發光檢測器包括聚甲基丙烯酸甲酯管和在聚甲基丙烯酸甲酯管上包被的兔抗霍亂弧菌抗體，所述的兔抗霍亂弧菌抗體用牛血清白蛋白封閉。所述的霍亂弧菌發光檢測器和后濾件的出口經廢液管路連接廢液缸。所述的前濾件采用孔徑5 μ m的前濾件和后濾件采用孔徑O. 2 μ m的后濾件。本實用新型的優點使用本實用新型的檢測器，可使檢測霍亂弧菌的樣品采集、處理和現場檢測在一個密閉的空間中進行，實現了霍亂弧菌的在線檢測，大大提高了樣品采集、處理和現場檢測的效率和安全性。本裝置平臺將樣品采集、樣品處理、霍亂弧菌檢測三部分集成為一體，具有在線化、操作安全簡便、經濟實用等特點。
圖I為本實用新型的結構示意圖。圖2為圖I中的霍亂弧菌發光檢測器的結構示意圖。圖3為圖2的霍亂弧菌發光檢測器中的兔抗霍亂弧菌抗體與霍亂弧菌和鼠抗霍亂弧菌抗體結合的結構示意圖。圖中1為樣品前處理濾件；2為前濾件；3為后濾件；4為閥門；5為濃縮后樣本管；6為連接洗液的進樣管口 ；7為連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口 ；8為連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口 ；9為連接魯米諾底物的進樣管口 ；10為檢測進液管路；11為霍亂弧菌發光檢測器；12為光電倍增管；13為加熱器件；14為溫控器件；15為電腦；16為流動注射泵；17為廢液管路；18為兔抗霍亂弧菌抗體；19為牛血清白蛋白；20為PMMA管；21為鼠抗霍亂弧菌抗體；22為霍亂弧菌，23為進樣管；24為蠕動泵。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型進行詳細說明如圖I、圖2和圖3所示，所述的流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器，包括一個樣品前處理濾件I、進樣管23、蠕動泵24、流動注射泵16、霍亂弧菌發光檢測器11、光電倍增管12和電腦15 ;前處理濾件I包括孔徑5 μ m的前濾件2和孔徑O. 2 μ m的后濾件3 ;其結構特點為在孔徑5 μ m的前濾件2與孔徑O. 2 μ m的后濾件3之間安裝閥門4 ;進樣管23 —端接在蠕動泵24上，另一端與孔徑5 μ m的前濾件2的進口相連接，孔徑5 μ m的前濾件2的出口經閥門4與孔徑O. 2 μ m的后濾件3的進口連接，其中孔徑O. 2 μ m的后濾件3除了具有孔徑5 μ m的前濾件2的進口和出口外，還在其過濾側設有兩個開口，一個過濾側開口為洗脫液進口 A，另一個過濾側開口為洗脫樣本的出口 B，洗脫液進口 A和洗脫樣本的出口B分別設有洗脫液進口閥門4A和洗脫樣本的出口閥門4B ;洗脫樣本的出口 B經洗脫樣本的出口閥門4B后與流動注射泵16上的濃縮后樣本管5相連接，在流動注射泵上還設有連接洗液的進樣管口 6、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口 7、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口 8和連接魯米諾底物的進樣管口 9 ;經濃縮后樣本管5進入的洗脫樣本、連接洗液的進樣管口 6進入的洗液、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口 7進入的鼠抗霍亂弧菌抗體、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口 8進入的辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG和連接魯米諾底物的進樣管口 9進入的魯米諾底物這些液體均匯集連接到檢測進液管路10而進入霍亂弧菌發光檢測器11，在霍亂弧菌發光檢測器11中反應后的廢液則經過廢液管路17排出；霍亂弧菌發光檢測器11為在PMMA管20上包被了兔抗霍亂弧菌抗體18，并用牛血清白蛋白19進行封閉，PMMA管即聚甲基丙烯酸甲酯管，簡稱PMMA管；在霍亂弧菌發光檢測器11外面設置有加熱器件13，加熱器件13為霍亂弧菌發光檢測器11提供必要的溫度環境，溫控器件14可對加熱器件13的溫度進行調節；在霍亂弧菌發光檢測器11上設置有光電倍增管12，光電倍增管12連接電腦15，光電倍增管12將霍亂弧菌發光檢測器11所產生的光信號傳輸到電腦15進行數據分析。本實用新型的制作如下包括以下4個步驟(I)首先構建霍亂弧菌發光檢測器11，在PMMA管20上包被了兔抗霍亂弧菌抗體18，并用牛血清白蛋白19進行封閉；(2)搭建樣品前處理濾件I，前處理濾件I包括孔徑5 μ m的前濾件2和孔徑O. 2 μ m的后濾件3，先將進樣管23 —端接在蠕動泵24上，另一端與孔徑5 μ m的前濾件2的過濾側進口相連接，再用管道將孔徑5 μ m的前濾件2的濾過側的出口與孔徑O. 2 μ m的后濾件3過濾側的中間的進口連接，可在靠近孔徑O. 2 μ m的后濾件3的過濾側中間的進口的前部地方安裝閥門4，并在孔徑O. 2 μ m的后濾件3過濾側設有兩個開口，一個過濾側開口為洗脫液進口 A，另一個過濾側開口為洗脫樣本的出口 B，洗脫液進口 A和洗脫樣本的出口 B分別設有洗脫液進口閥門4A和洗脫樣本的出口閥門4B ;孔徑O. 2 μ m的后濾件3的濾過側的出口流出的廢液以及霍 亂弧菌發光檢測器11的廢液均經廢液管路17流到廢液缸；(3)流動注射進樣平臺的搭建，用管道將洗脫樣本的出口 B與流動注射泵16上的濃縮后樣本管5相連接，再將流動注射泵上的檢測進液管路10連接到霍亂弧菌發光檢測器11，再分別將流動注射泵上其余的進樣管口(即連接洗液的進樣管口 6、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口 7、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口 8和連接魯米諾底物的進樣管口 9)分別連接洗液，鼠抗霍亂弧菌抗體，辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG，魯米諾底物；(4)光信號檢測平臺，在光信號檢測盒的底部放入加熱器件13，并將與加熱器件13相連接的溫控元件14安裝在光信號檢測盒外；再將霍亂弧菌發光檢測器11放置在加熱元件上且放置在光信號檢測盒內，再將光電倍增管12安裝在霍亂弧菌發光檢測器11上方，并將光電倍增管12與電腦15連接。實驗過程先將本實用新型的流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器按上述步驟組裝，打開電源和電腦15;將待檢測的樣品放入進樣管23中，打開閥門4，關閉洗脫液進口閥門4A和洗脫樣本的出口閥門4B ;開動蠕動泵24，樣品經孔徑5 μ m的前濾件2和孔徑
O.2 μ m的后濾件3過濾后，關閉閥門4 ;打開洗脫液進口閥門4A，加入洗脫液，孔徑5 μ m的前濾件2經震動洗脫后，打開洗脫樣本的出口閥門4B和流動注射泵16的開關，將經濾過處理的樣品泵至霍亂弧菌發光檢測器11，調節溫控元件14使加熱器件13的溫度維持在37°C，待樣品在霍亂弧菌發光檢測器11中反應I小時后，打開連接洗液的進樣管口 6的開關，將洗液泵至霍亂弧菌發光檢測器11中進行洗滌，洗滌3遍后，打開連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口 7的開關，將其泵至霍亂弧菌發光檢測器11中，反應I小時后，打開連接洗液的進樣管口 6的開關，將洗液泵至霍亂弧菌發光檢測器11中進行洗滌，洗滌3遍后，打開連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口 8的開關，將其泵至霍亂弧菌發光檢測器11中，反應I小時后，打開連接洗液的進樣管口 6的開關，將洗液泵至霍亂弧菌發光檢測器11中進行洗滌，洗滌3遍后，打開連接魯米諾底物的進樣管口 9的開關，將魯米諾底物泵至霍亂弧菌發光檢測器11中，光電倍增管12采集霍亂弧菌發光檢測器11的光信號，并在電腦15上分析處理光電倍增管12瞬時所采集的光信號。當樣品含有霍亂弧菌時，濾件I將樣品中的雜物去除，孔徑O. 2 μ m的后濾件3對霍亂弧菌起到濃縮的作用，洗脫下來的霍亂弧 菌22目的物與霍亂弧菌發光檢測器11中包被在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)管20上包被的兔抗霍亂弧菌抗體18結合后，依次與鼠抗霍亂弧菌抗體21、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG抗體反應結合，形成三明治免疫夾心結構，并由辣根過氧化物酶作用于魯米諾底物而產生光信號，并由光電倍增管12采集，然后通過電腦15對光電倍增管12采集的光信號進行分析處理，從而對樣品中是否含有霍亂弧菌及數量進行分析。
權利要求1.一種流動注射化學發光檢測霍亂弧菌的裝置，包括一個樣品前處理濾件(I)、進樣管、蠕動泵(24)、流動注射泵(16)、霍亂弧菌發光檢測器(11)、光電倍增管(12)和電腦；前處理濾件(I)包括前濾件(2)和后濾件(3);其特征在于在前濾件(2)與后濾件(3)之間安裝閥門(4);進樣管(23) —端接在蠕動泵(24)上，另一端與前濾件(2)的進口相連接，前濾件(2 )的出口經閥門(4)與后濾件(3 )的進口連接，在后濾件(3 )的過濾側設有兩個開口，一個過濾側開口為洗脫液進口(A)，另一個過濾側開口為洗脫樣本的出口(B)，洗脫液進口(A)和洗脫樣本的出口(B)分別設有洗脫液進口閥門(4A)和洗脫樣本的出口閥門(4B);洗脫樣本的出口(B)經洗脫樣本的出口閥門(4B)后與流動注射泵(16)上的濃縮后樣本管(5)相連接，在流動注射泵上設有連接洗液的進樣管口(6)、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口(7)、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口和連接魯米諾底物的進樣管口(9);濃縮后樣本管(5)、連接洗液的進樣管口(6)、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口(7)、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口(8)和連接魯米諾底物的進樣管口(9)均連通到檢測進液管路(10)上，檢測進液管路(10)連接到霍亂弧菌發光檢測器(11);霍亂弧菌發光檢測器(11)設置有加熱器件(13)，溫控器件(14)與加熱器件(13)連接；在霍亂弧菌發光檢測器(11)上設置有光電倍增管，光電倍增管(12 )連接電腦(15 )。
2.根據權利要求I所述的一種流動注射化學發光檢測霍亂弧菌的裝置，其特征在于霍亂弧菌發光檢測器(11)包括聚甲基丙烯酸甲酯管(20 )和在聚甲基丙烯酸甲酯管(20 )上包被的兔抗霍亂弧菌抗體(18)，所述的兔抗霍亂弧菌抗體(18)用牛血清白蛋白(19)封閉。
3.根據權利要求I或2所述的一種流動注射化學發光檢測霍亂弧菌的裝置，其特征在于霍亂弧菌發光檢測器(11)和后濾件(3)的出口經廢液管路(17)連接廢液缸。
4.根據權利要求I或2所述的一種流動注射化學發光檢測霍亂弧菌的裝置，其特征在于前濾件(2)采用孔徑5μηι的前濾件和后濾件(3)采用孔徑O. 2ym的后濾件。
專利摘要本實用新型公開一種流動注射化學發光霍亂弧菌檢測器，包括樣品前處理濾件、進樣管、蠕動泵、流動注射泵、霍亂弧菌發光檢測器、光電倍增管和電腦；在后濾件的過濾側設有兩個開口，一個過濾側開口為洗脫液進口，另一個過濾側開口為洗脫樣本的出口，濃縮后樣本管、連接洗液的進樣管口、連接鼠抗霍亂弧菌抗體的進樣管口、連接辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG的進樣管口和連接魯米諾底物的進樣管口均連通到檢測進液管路上，使樣品處理和霍亂弧菌檢測在一個流動的體系中進行，消除檢測過程中手工采集、樣品處理、加樣、檢測中的繁瑣步驟，大大提高樣品檢測的速度和安全性。具有在線化、操作安全簡便、經濟實用的特點，該裝置制作方法極易被推廣使用。
文檔編號G01N33/569GK202770838SQ20122046841
公開日2013年3月6日 申請日期2012年9月13日 優先權日2012年9月13日
發明者蔡怡珊, 肖武, 黃金寶, 劉愛林, 鄭暉, 周艷 申請人:福建國際旅行衛生保健中心