專利名稱：一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條及試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于生物檢測領域，涉及一種醫用檢測耗材，具體涉及一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條及試劑盒。
背景技術：
呋喃妥因，別名呋喃坦丁，呋喃坦啶，硝呋妥因，硝基呋喃妥因，Furadantin,Furan, Furantoin, Macrodantin, Urantoin 英文 / 拉丁名稱，Nitrofurantion,屬于硝基呋喃類抗生素。硝基呋喃類藥物是一種廣譜性抗生素，具有很好的抗菌作用和藥動力的特性，因價格較低且效果好，而被廣泛應用，作為豬、禽類和水產促生長的添加劑。但長期研究證明，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實驗動物發生癌變和基因突變，因此此類藥物禁止在治療和飼料中使用。呋喃妥因在1995年被禁用。由于硝基呋喃類藥物在體內很快就能被代謝，而在組織中結合的代謝產物則能存留較長一段時間，所以在分析此類藥物的殘留時經常要分析其代謝后的產物，管理部門就以檢測代謝產物為手段達到檢測硝基呋喃類殘留的目的。呋喃妥因代謝物殘留常用的檢測方法主要有色/質聯用分析法(LC-MS)、高效液相色譜(HPLC)、酶聯免疫法等，LC-MS和HPLC具有高靈敏度高特異性的特點，但由于復雜的儀器設備、繁瑣的過程和大量的有機溶劑以及對檢驗人員的高技能要求，不適合現場和家庭使用。酶聯免疫分析法雖然靈敏度高，特異性強，對儀器設備要求不高，但檢測前、后都需要做必要的儀器清洗及保養工作，檢測時間長，并且要求本領域專業技術人員來操作。免疫膠體金技術(Immunogold labelling techique)是上世紀80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標記技術后發展起來的固相標記免疫測定技術。該技術主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。快速診斷試紙條是20世紀90年代以來在單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新型層析材料基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術，近年來發展迅速，在生物醫學領域特別是醫學檢驗中得到了廣泛應用。該技術主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標記試劑吸附在結合墊上，當待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體區域時，待測物金標試劑復合物與之發生特異性結合而被截留，膠體金標記聚集在檢測帶上，可通過目測得到直觀的顯色結果。而游離的標記物則越過檢測帶，從而達到與檢測物自動分離的目的。競爭抑制法可用于測定抗原或抗體，以測定抗原為例，其原理為標本中的受檢抗原和固相的包被抗原競爭與標記抗體結合，當標本中的受檢抗原的量大于等于試劑的閾值，則標記抗體則不會與固相的包被抗原結合；若標本中無受檢抗原，則標記抗體直接與固相的包被抗原結合。目前，將免疫競爭抑制法與膠體金檢測技術相結合來對呋喃妥因代謝物進行快速檢測，且具有高效、靈敏、特異、便捷、檢測范圍廣等特點的膠體金試紙條鮮有報道。[0009]
實用新型內容為解決上述領域的需求和空白，本實用新型旨在提供一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條及試劑盒，本實用新型試紙條采用競爭抑制法和免疫膠體金技術相結合快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物，用于動物源性食品的檢測；本實用新型試紙條操作簡單，拿來即用，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，以符號顯示結果，擺脫了對設備、儀器、人員及貯存和運輸環境的特殊要求，并且具有快速、簡便、靈敏、準確、特異的特點。一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，在高度方向上包括基板支撐層、反應試劑載體吸附層，所述反應試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上；所述反應試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設有樣品纖維墊，金標纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊；在所述樣品纖維墊、金標纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護膜層，所述纖·維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設有對照線C線、檢測線T線，所述對照線C線和檢測線T線相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，其特征在于，所述金標纖維墊上包被有膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗；所述對照線C線包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T線包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物。所述膠體金試紙條，其特征在于，在樣品纖維墊上對應的保護膜層上表面標有與所述檢測線T線平行的可視的MAX標志線。所述手持端吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述金標纖維墊的材料是吸附金標蛋白的玻璃纖維棉。所述保護膜層為膠帶。所述基板支撐層為不吸水的塑料基板。還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應試劑載體吸附層，所述外殼上表面對應于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設有加樣窗和視窗。一種快速檢測呋喃妥因代謝物的試劑盒，其特征在于包括上述任一膠體金試紙條和樣品稀釋用具。技術效果根據膠體金檢測的原理，將本實用新型的膠體金試紙條的粘液端浸入待測液中，或者在粘液端的樣品纖維層滴加待測液，待測液通過虹吸帶動待檢呋喃妥因代謝物及金標纖維墊中的膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體一起向硝酸纖維素膜方向擴散，并最終滲入手柄端吸水紙中，擴散過程中待檢呋喃妥因代謝物可與膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗相結合，進而封閉膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗上呋喃妥因代謝物結合點，阻止膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗與纖維素藥膜上偶聯呋喃妥因代謝物的載體蛋白的檢測線T相結合，檢測線不能顯色，而兔抗小鼠IgG多抗則可與膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體相結合，對照線C顯紅色，則為陽性，反之，待測液中無呋喃妥因代謝物則不能阻止膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗與纖維素藥膜上偶聯呋喃妥因代謝物的載體蛋白的檢測線T相結合，檢測線T顯紅色，同樣，兔抗小鼠IgG多抗也與膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗相結合，對照線C顯紅色，形成兩條紅色印記為陰性，如果纖維素藥膜上沒有顯示紅色標記，則表明試紙條生效。本實用新型的膠體金試紙條不同于現有的試紙條之處在于所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設有對照線C、檢測線T，所述對照線C和檢測線T相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，其特征在于，所述金標纖維墊上包被有膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體；所述對照線C包被有兔抗小鼠IgG，所述檢測線T包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物。本實用新型試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物，用于動物源性食品的檢測。本實用新型試紙條通過選定金標纖維墊、T線、C線和樣品纖維墊上的相應的生物包被試劑來實現對呋喃妥因代謝物的快速檢測，同時本實用新型試紙條兼顧檢測的靈敏度和特異性。本實用新型，優選在樣品纖維墊上對應的保護膜層上表面標有與所述檢測線T平行的可視的MAX標志線。用于提醒操作人員，操作時待測液不要超過標志線，以免引起假陽性。本實用新型，優選所述樣品纖維墊的材料是玻璃纖維棉，所述吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述纖維素藥膜的材料是硝酸纖維素膜，所述金標纖維墊的材料是吸附金標蛋白的玻璃纖維棉。這些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保證本實用新型檢測試紙條的檢測速度和準確性。本實用新型，優選保護膜層為膠帶，使試紙條免受污染，成本低且效果好。本實用新型，優選基板支撐層為不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撐材料吸收待測液從而影響水平方向的遷移。本實用新型，優選還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應試劑載體吸附層，所述外殼上表面對應于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設有加樣窗和視窗。便于攜帶和保存。本實用新型試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物，用于動物源性食品的檢測；本實用新型試紙條操作簡單，拿來即用，方便快捷，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，并且保證檢測的靈敏性、準確性和高效率。
圖I本實用新型試紙條的俯視圖；其中I-手持端，2-對照線C線，3-檢測線T線，4-MAX標志線,5-沾液端,6_纖維素藥膜，7-樣品纖維墊，8-手持端吸水材料墊，9-金標纖維墊13-膠帶邊緣線。圖2本實用新型試紙條的縱向剖面圖其中6-纖維素藥膜，7-樣品纖維墊，8-手持端吸水材料墊，9-金標纖維墊，10-手持端膠帶，11-箭頭膠帶，12-基板支撐層。
具體實施方式
提供下述實施例是為了更好地進一步理解本實用新型，并不局限于所述最佳實施方式，不對本實用新型的內容和保護范圍構成限制，任何人在本實用新型的啟示下或是將本實用新型與其他現有技術的特征進行組合而得出的任何與本實用新型相同或相近似的產品，均落在本實用新型的保護范圍之內。本實用新型旨在提供一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，本實用新型試紙條采用雙競爭抑制法原理以及膠體金技術快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物，用于動物源性食品中呋喃妥因代謝物的檢測；本實用新型試紙條操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，以符號顯示結果，擺脫了對設備、儀器、人員及貯存和運輸環境的特殊要求，并且具有快速、簡便、靈敏、準確、特異的特點。根據膠體金檢測的原理，將本實用新型的膠體金試紙條的粘液端浸入待測液中，或者在粘液端的樣品纖維層滴加待測液，待測液通過虹吸帶動待檢呋喃妥因代謝物及金標纖維墊中的膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體一起向硝酸纖維素膜方向擴散，并最終滲入手柄端吸水紙中，擴散過程中待檢呋喃妥因代謝物可與膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗相結合，進而封閉膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗上呋喃妥因代謝物結合點，阻止膠 體金標記的呋喃妥因代謝物單抗與纖維素藥膜上偶聯呋喃妥因代謝物的載體蛋白的檢測線T相結合，檢測線不能顯色，而兔抗小鼠IgG多抗則可與膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗相結合，對照線C顯紅色，則為陽性，反之，待測液中無呋喃妥因代謝物則不能阻止膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗與纖維素藥膜上偶聯呋喃妥因代謝物的載體蛋白的檢測線T相結合，檢測線T顯紅色，同樣，兔抗小鼠IgG多抗也與膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體相結合，對照線C顯紅色，形成兩條紅色印記為陰性，如果纖維素藥膜上沒有顯示紅色標記，則表明試紙條生效。本實用新型試紙條，在高度方向上包括基板支撐層12、反應試劑載體吸附層，所述反應試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層12上；所述反應試劑載體吸附層從沾液端5到手持端I依次設有樣品纖維墊7，金標纖維墊9，纖維素藥膜6，手持端吸水材料墊8 ;在所述樣品纖維墊7、金標纖維墊9和手持端吸水材料墊8上覆蓋有保護膜層。本實用新型的膠體金試紙條不同于現有的試紙條之處在于所述纖維素藥膜6上從手持端I到沾液端5依次設有對照線C線2、檢測線T線3，所述對照線C線2和檢測線T線3相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，其特征在于，所述金標纖維墊9上包被有膠體金標記的呋喃妥因代謝物抗體；所述對照線C-2包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T線3包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物。本實用新型，優選在樣品纖維墊7上對應的保護膜層上表面標有與所述檢測線T線3平行的可視的MAX標志線4。用于提醒操作人員，操作時待測液不要超過標志線4，以免引起假陽性。本實用新型，優選所述樣品纖維墊7的材料是玻璃纖維棉，所述手持端吸水材料墊8的材料是粗纖維吸水紙，所述纖維素藥膜6的材料是硝酸纖維素膜，所述金標纖維墊9的材料是吸附金標蛋白的玻璃纖維棉。這些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保證本實用新型檢測試紙條在檢測速度和準確性。本實用新型，優選保護膜層為膠帶，使試紙條免受污染，成本低且效果好。本實用新型，優選基板支撐層12為不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撐材料吸收待測液從而影響水平方向的遷移。[0042]本實用新型，優選還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應試劑載體吸附層，所述外殼上表面對應于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設有加樣窗和視窗。便于攜帶和保存。實驗例I.本實用新型試紙條的制備方法試紙條的制備程序如下步驟I.纖維素藥膜的包被I、將兔抗小鼠IgG多抗作為對照線C，呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物作為檢測線T，兩個試劑分別按照所需的濃度(范圍1.5-2mg/ml)，用20mM的PBS進行稀釋。2、將配制好的上述試劑，按照C、T線位置分別包被到硝酸纖維素膜上，然后干燥6 小時，溫度為30°C，濕度< 35%，從而制得纖維素藥膜。步驟2.金標纖維層的標記I、取40nm的膠體金溶液，按終濃度8-12 μ I/ml加入O. 2M K2CO3,加入一定濃度的呋喃妥因代謝物單抗，放置室溫反應15-30分鐘，然后按照濃度20 μ I/ml加入20%BSA的溶液，用于飽和游離的膠體金。最后lOOOOrpm，離心30分鐘，去除上清液中未結合的蛋白質。用等體積的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)復溶沉淀的膠體金標記原液。2、將上述膠體金標記原液按照10-20%濃度，用O. 5m硼酸溶液進行稀釋，從而配制成標記后的膠體金工作液。然后再將該工作液鋪于30*30cm玻璃纖維墊上,干燥6小時,溫度為30°C，濕度彡35%，從而制得金標墊。步驟3.試紙條的組裝I、將塑料板平放在操作臺上，貼上雙面膠帶。2、撕掉雙面膠帶襯紙，在距塑料板上端30mm處貼上已包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物和兔抗小鼠IgG多克隆抗體的硝酸纖維素膜。3、將粗纖維吸水紙壓硝酸纖維素膜上端2mm貼上，上端與塑料板上端取齊。4、將小無紡布壓硝酸纖維素膜下端O. 5mm處貼上。5、將金標墊取齊壓于小無紡布上面。6、將玻璃纖維墊壓于金標墊上約一半，下端距塑料板下端2mm處貼上。7、將大無紡布與金標墊上端取齊，下端與塑料板下端取齊貼上。8、將箭頭膠帶壓硝酸纖維素膜I. 5-2mm貼上。9、將手持端膠帶壓粗纖維吸水紙貼上。本實用新型一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條采用競爭抑制法原理和免疫膠體金技術相結合快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物。本實用新型試紙條操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，本實用新型以符號顯示結果，擺脫了對設備、儀器、人員及貯存和運輸環境的特殊要求，用于動物源性食品的檢測，并且具有快速、簡便、靈敏、準確、特異的特點。
權利要求1.一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，在高度方向上包括基板支撐層、反應試劑載體吸附層，所述反應試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上； 所述反應試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設有樣品纖維墊，金標纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊； 在所述樣品纖維墊、金標纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護膜層，所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設有對照線C線、檢測線T線，所述對照線C線和檢測線T線相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，所述金標纖維墊上包被有膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗；所述對照線C線包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T線包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物。
2.根據權利要求I所述快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，在樣品纖維墊上對應的保護膜層上表面標有與所述檢測線T線平行的可視的MAX標志線。
3.根據權利要求I所述快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣品纖維墊的材料是玻璃纖維棉，所述手持端吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述金標纖維墊的材料是吸附金標蛋白的玻璃纖維棉。
4.根據權利要求I所述快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，所述保護膜層為膠帶。
5.根據權利要求I所述快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，所述基板支撐層為不吸水的塑料基板。
6.根據權利要求1-5任一所述快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條，其特征在于，還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應試劑載體吸附層，所述外殼上表面對應于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設有加樣窗和視窗。
7.一種快速檢測呋喃妥因代謝物的試劑盒，其特征在于包括權利要求1-5任一所述膠體金試紙條和樣品稀釋用具。
8.一種快速檢測呋喃妥因代謝物的試劑盒，其特征在于包括權利要求6所述膠體金試紙條和樣品稀釋用具。
專利摘要本實用新型一種快速檢測呋喃妥因代謝物的膠體金試紙條及試劑盒，屬醫用檢測耗材，其特征在于，所述金標纖維墊上包被有膠體金標記的呋喃妥因代謝物單抗；所述對照線C線包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T線包被有呋喃妥因代謝物-牛血清蛋白BSA偶聯物，本實用新型試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術快速檢測食品中的呋喃妥因代謝物，本實用新型試紙條簡捷靈敏準確，用于動物源性食品的檢測。
文檔編號G01N33/558GK202710554SQ201220288728
公開日2013年1月30日 申請日期2012年6月15日 優先權日2012年6月15日
發明者張春山, 張永勝 申請人:北京博歐實德生物技術有限公司