專利名稱：一種測定石斛生物堿含量的方法
技術領域：
本發明涉及分光光度比色法定量測定物質含量領域，具體涉及一種測定石斛生物堿含量的方法。
背景技術：
生物堿是一類存在于生物體內具有生理活性的含氮堿性有機物。植物生物堿是植物在長期的生態環境適應過程中為抵御動物、微生物、病毒及其它植物的攻擊而形成的一大類次生代謝產物。生物堿在醫藥、植物的生長、發育、共生和繁殖過程中具有重要意義。我國早在二三千年前就使用含生物堿的中草藥進行治療，在《神農本草經》就記載有多種含生物堿的中草藥，如上品的黃連、石斛。石斛生物堿是石斛藥材中最重要的活性成分之一，也是最早分離并進行結構確認的化合物。石斛生物堿的含量多以溴甲酚綠酸性染料比色法測定，這是一種間接萃取比色測定法。由于石斛屬植物生物堿含量一般比較低，目前常用的溴甲酚綠酸性染料比色法測定得出率較 低，且測定耗時較長。
發明內容
針對目前常用的溴甲酚綠酸性染料比色法測定石斛生物堿得出率低，且測定耗時長的問題，本發明的目的是提供一種測定石斛生物堿含量的改良方法，以提高石斛生物堿測定的靈敏度，并能快速分層，縮短測定時間。本發明實現發明目的采用如下技術方案:一種測定石斛生物堿含量的方法，以石斛干品為原料，包括以下步驟:( I)將石斛干品磨成粉末得物質A ；(2)取物質A0.2g，用10 15重量倍體積濃度為25_28%的濃氨水潤濕后于圓底燒瓶中密塞40 min，加氯仿10 mL，稱重，圓底燒瓶接入冷凝管，置80°C水浴中加熱回流2 h，冷卻后補充氯仿至原重，定性濾紙過濾，得續濾液B ；(3)將步驟(2)獲得的續濾液B加氯仿定容至10 mL，加入pH4.5的2M鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液5 mL和體積濃度0.04%溴甲酚綠溶液I mL，并添加體積比1:60的吐溫-80水溶液0.4 mL，在振蕩器上振搖3 min，靜置10 min，定性濾紙過濾氯仿層，得續濾液C ；(4)將步驟(3)獲得的續濾液C加0.01mol/L氫氧化鈉-無水乙醇溶液I mL，搖勻，于620nm波長處測定吸光度；生物堿含量計算公式如下:
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生物堿標品吸光度樣品重童本發明與已有技術相比，其有益效果體現在:本發明將待測石斛干品粉碎后，用堿性氯仿水浴回流提取生物堿，測定液中添加非離子表面活性劑吐溫-80，溴甲酚綠酸性染料比色法測定石斛生物堿含量。本發明在石斛生物堿測定體系中，添加適量的吐溫-80，主要是利用它對提取溶劑有促進滲透的作用以及對提取的有效成分產生增溶作用。在適宜PH條件下，石斛堿鹽的陽離子RH+與溴甲酚綠陰離子In—結合成的離子締合物RH+ -1n-定量被氯仿萃取，加入非離子表面活性劑吐溫_80，陰離子染料In—被增溶，改變了體系中各物質在兩相的分配，增加了溴甲酚綠-氯仿萃取率，提高了石斛生物堿測定的靈敏度，并能快速分層，縮短測定時間。該方法操作簡便，重現性好，測定結果穩定。
圖1是本發明測定方法流程示意圖。
具體實施例方式以下通過具體實施方式
對本發明做進一步的說明。實施例1取0.2g的石斛干品，磨成粉末，用10 15重量倍體積的濃氨水潤濕后于圓底燒瓶內密塞40 min，加氯仿10 mL，稱重，圓底燒瓶接入冷凝管，置80°C水浴鍋中加熱回流2 h，圓底燒瓶回流液冷卻至室溫后補充氯仿至原重(因加熱回流氯仿蒸發)，定性濾紙過濾，續濾液加氯仿定容至10 mL。濾液中加入pH4.5的0.2M鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(即苯二甲酸氫鉀和氫氧化鈉濃度勻為0.2M) 5 mL和體積濃度0.04%溴甲酚氯溶液I mL,并添加0.4 mL體積比1:60的吐溫-80水溶液(I體積的吐溫_80:60體積水)，在振蕩器上振搖3 min，靜置10 min，定性濾紙過濾氯仿層，續濾液加質量分數0.0lmol/L氫氧化鈉-無水乙醇溶液I mL,搖勻，以氯仿10 mL同樣操作做空白對照，于620nm波長處測定吸光度。整個測定方法步驟如圖1所示。試驗結果如表I所示。表I吐溫對石斛類原球莖生物堿含量測定的影響
權利要求
1.一種測定石斛生物堿含量的方法，其特征在于，以石斛干品為原料，包括以下步驟: (1)將石斛干品磨成粉末得物質A； (2)取物質A0.2g，用10 15重量倍體積濃度為25-28%的濃氨水潤濕后于圓底燒瓶中密塞40 min，加氯仿10 mL，稱重，圓底燒瓶接入冷凝管，置80°C水浴中加熱回流2 h，冷卻后補充氯仿至原重，定性濾紙過濾，得續濾液B ； (3)將步驟(2)獲得的續濾液B加氯仿定容至10mL，加入pH4.5的2M鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液5 mL和體積濃度0.04%溴甲酚綠溶液I mL，并添加體積比1:60的吐溫-80水溶液0.4 mL,在振蕩器上振搖3 min,靜置10 min,過濾氯仿層,得續濾液C ； (4)將步驟(3)獲得的續濾液C加0.01mol/L氫氧化鈉-無水乙醇溶液I mL，搖勻，于620nm波長處測定吸光度；生物堿含量計算公式如下:
全文摘要
本發明公開了一種測定石斛生物堿含量的方法，石斛干品粉碎后，用堿性氯仿水浴回流提取生物堿，測定液中添加非離子表面活性劑吐溫-80，溴甲酚綠酸性染料比色法測定石斛生物堿含量。本發明在石斛生物堿測定體系中，添加適量的吐溫-80，使溴甲酚綠-氯仿萃取效率提高，提高了石斛生物堿測定的靈敏度，并能快速分層，操作簡便，重現性好，測定結果穩定。
文檔編號G01N21/31GK103076294SQ201210591479
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月29日 優先權日2012年12月29日
發明者金青, 林毅, 蔡永萍, 宋程, 孫旭 申請人:安徽農業大學