專利名稱：淋球菌抗原檢測方法及檢測試劑盒和該試劑盒的制備方法
技術領域：
本發明涉及淋球菌抗原檢測方法，以及用于該方法的檢測試劑盒和該試劑盒的制備方法。
背景技術：
淋病是目前國內最為常見的性傳播疾病之一，其病原體為淋球菌，它是一種嚴重的人體寄生菌，存在于急、慢性尿道炎的膿 性分泌物及新生兒眼結膜分泌物中。在男性常表現為尿道炎，尿道口可出現黃色膿性分泌物，而女性感染者癥狀常常不明顯，但可以從尿道、陰道擴散到輸卵管，引起不育癥，新生兒經產道感染引起的眼結膜炎逐漸可涉及全眼，導致失明。感染淋球菌后，若不進行治療，可出現角膜穿孔導致失明，也可導致輸卵管狹窄、增厚、粘連、阻塞，從而引不孕或宮外孕，甚至通過血行將淋球菌播散到全身，出現較嚴重的全身感染，如淋球菌性敗血癥、關節炎、心內膜炎、腦膜炎等。因此，對淋病的早期診斷與治療十分重要。診斷男女病人淋病感染的方法，目前有幾種不同的方法1、培養法；2、免疫熒光法；3、合成酶鏈反應LCR檢測方法；4、聚合酶鏈反應PCR檢測方法。培養法是傳統的診斷方法，取女性子宮頸分泌物或男性尿道的標本接種到培養板上，然后進行48 72個小時培養；對菌落進行染色，以觀察菌落的形態和著色來判斷。培養法雖然靈敏度高，特異性強，但方法工作量大，培養時間長，要求專門的設施和專業人員操作，而且對環境要求高，需要特殊儀器，在實際臨床應用受到一定的限制。免疫熒光法和近來建立的合成酶鏈反應LCR和聚合酶鏈反應PCR檢測方法均要求專門設施和掌握技巧的技術人員進行實驗操作及判讀結果，檢測過程需要多步驟和數小時才能得出結果，而且需有相當大的測試標本數量才能達到可接受的成本效益比。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種檢測速度快、操作簡便，而且靈敏度高、特異性強的淋球菌抗原檢測方法。本發明還提供了一種用于檢測淋球菌抗原的檢測試劑盒。本發明還提供了一種用于制備所述檢測試劑盒的方法。本發明所述淋球菌抗原檢測方法所采用的技術方案是該方法包括以下步驟
a、將膠體金標記的淋球菌抗體載于玻璃纖維載體上，并在與所述淋球菌抗體的載體相連的檢測載體上包被有由所述淋球菌抗體制成的檢測線和由免疫球蛋白G形成的控制線；
b、取待測標本,所述待測標本裂解后滴于膠體金標記的淋球菌抗體的載體上,如有淋球菌抗體在所述檢測載體上形成所述檢測線和所述控制線，則為陽性，否則為陰性。所述淋球菌抗體為淋球菌單抗，或者為淋球菌多抗，或者為所述淋球菌單抗和所述淋球菌多抗的混合物。
本發明所述檢測試劑盒所采用的技術方案是所述檢測試劑盒包括盒體及設置在所述盒體上的淋球菌抗原金標檢測卡，所述盒體內存放有裂解液A和裂解液B，所述盒體上設置有與所述淋球菌抗原金標檢測卡相適配的加樣孔和觀察孔，將樣本滴于所述加樣孔，然后從所述觀察孔即可觀察檢測結果。所述淋球菌抗原金標檢測卡包括襯板，在所述襯板上從一個方向上依次設置有加樣端吸水紙、檢測層和吸水端吸水層，在所述檢測層與所述加樣端吸水紙之間搭接有淋球菌金標抗體層，所述淋球菌金標抗體層一端夾在所述加樣端吸水紙內，在所述檢測層上包被有檢測線和控制線。所述的檢測層由硝酸纖維素膜、設在所述硝酸纖維素膜上的由所述淋球菌抗體構成的所述檢測線和由免疫球蛋白G形成的所述控制線組成。所述裂解液A為樣品組織細胞分散劑溶液，所述裂解液B為淋球菌原生小體的胞液和胞質膜溶解液。所述裂解液A為PPA或膽酸。所述裂解液B為反應體系,其為BSA (牛血清白蛋白),或者為BSA-V (牛血清白蛋白-第五組份)，或者為BSA和BSA-V的組合。本發明用于制備所述檢測試劑盒的方法所采用的技術方案是首先制備所述金標抗體層、所述控制線的包被及所述檢測線的包被，然后在所述襯板上組合淋球菌抗原金標試紙條，制成所述淋球菌抗原金標檢測卡，再將所述淋球菌抗原金標檢測卡裝在所述盒體上，并在所述盒體內存放有裂解液A和裂解液B。所述金標抗體層的制備方法包括下述步驟
a、制備膠體金；
b、膠體金標記淋球菌抗體,在膠體金溶液中按O.6 1. Omg/ml加入淋球菌抗并攪拌； C、經攪拌后再在溶液中加入膠體金稀釋液和膠體金溶液的混合液；
d、將步驟c中的所述混合液經離心去掉上清液，得沉淀物；
e、將所述沉淀物按4 10mg/ml溶于緩沖液得金標抗體溶液，所述緩沖液中含有其重量的1% 10%的動物血清白蛋白和O. 01% O. 06%的疊氮鈉；
f、用玻璃纖維或無紡布浸取所述金標抗體溶液，所述金標抗體溶液開始滲出為止，然后將所述玻璃纖維或所述無紡布進行干燥從而形成金標抗體層。本發明的有益效果是由于所述淋球菌抗原檢測方法包括以下步驟a、將膠體金標記的淋球菌抗體載于玻璃纖維載體上，并在與所述淋球菌抗體的載體相連的檢測載體上包被有由所述淋球菌抗體制成的檢測線和由免疫球蛋白G形成的控制線；b、取待測標本，所述待測標本裂解后滴于膠體金標記的淋球菌抗體的載體上，如有淋球菌抗體在所述檢測載體上形成所述檢測線和所述控制線，則為陽性，否則為陰性，因此，本發明的所述淋球菌抗原檢測方法靈敏度高、特異性強，而且速度快、操作簡便，無需專門設施，適用于臨床檢測或普查等多種場合。由于所述檢測試劑盒包括盒體及設置在所述盒體上的淋球菌抗原金標檢測卡，所述盒體內存放有裂解液A和裂解液B，所述盒體上設置有與所述淋球菌抗原金標檢測卡相適配的加樣孔和觀察孔，將樣本滴于所述加樣孔，然后從所述觀察孔即可觀察檢測結果，檢測非常方便，因此，本發明的所述檢測試劑盒是結構簡單，而且一步就能實現檢測的檢測試劑盒。由于制備所述檢測試劑盒的方法為首先制備所述金標抗體層、所述控制線的包被及所述檢測線的包被，然后在所述襯板上組合淋球菌抗原金標試紙條，制成所述淋球菌抗原金標檢測卡，再將所述淋球菌抗原金標檢測卡裝在所述盒體上，操作簡單，并在所述盒體內存放有裂解液A和裂解液B，因此，所述制備所述檢測試劑盒的方法簡單、重復性好，而且用該方法制備的檢測試劑盒結構穩定，使用性能好。
圖1是所述檢測試劑盒的結構示意 圖2是所述淋球菌抗原金標檢測卡的結構示意圖。
具體實施方式
實施例一
在本實施例中，本發明所述淋球菌抗原檢測方法包括以下步驟
a、將膠體金標記的淋球菌抗體載于玻璃纖維載體上，并在與所述淋球菌抗體的載體相連的檢測載體上包被有由所述淋球菌抗體制成的檢測線和由免疫球蛋白G形成的控制線；
b、取待測標本，在本實施例中，所述待測標本為女性宮頸口分泌物和男性尿道標本，所述待測標本裂解后滴于膠體金標記的淋球菌抗體的載體上，如有淋球菌抗體在所述檢測載體上形成所述檢測線和所述控制線，則為陽性，否則為陰性。所述淋球菌抗體為淋球菌單抗,或者為淋球菌多抗，或者為所述淋球菌單抗和所述淋球菌多抗的混合物，在本實施例中，所述淋球菌多抗為兔或羊抗淋球菌抗體。所述淋球菌抗原檢測方法為一步法，其具有高度的種特異性、很少出現困擾臨床的假陰性、假陽性問題，具有高度的靈敏性，而且操作簡便，無需專門設施。如圖1和圖2所示，本發明所述檢測試劑盒所采用的技術方案是所述檢測試劑盒包括盒體I及設置在所述盒體I上的淋球菌抗原金標檢測卡2，所述盒體I內存放有裂解液A3和裂解液B4，所述盒體I上設置有與所述淋球菌抗原金標檢測卡2相適配的加樣孔11和觀察孔12，將樣本滴于所述加樣孔11，然后從所述觀察孔12即可觀察檢測結果。所述淋球菌抗原金標檢測卡2包括襯板21，在所述襯板21上從一個方向上依次設置有加樣端吸水紙22、檢測層23和吸水端吸水層24，在所述檢測層23與所述加樣端吸水紙22之間搭接有淋球菌金標抗體層25，所述淋球菌金標抗體層25 —端夾在所述加樣端吸水紙22內，在所述檢測層23上包被有檢測線231和控制線232，所述加樣端吸水紙22和所述吸水端吸水層24均由多層濾紙制成。在本實施例中，所述的檢測層23由硝酸纖維素膜及設在所述硝酸纖維素膜上的由淋球菌單抗或兔、羊抗淋球菌抗體多抗構成的所述檢測線231和由免疫球蛋白G形成的所述控制線232組成。所述的檢測層23的制備方法是將濃度為O. 6 1. 4mg/ml的淋球菌抗體中加入1% 3%的固定劑，再利用點膜機將所述淋球菌抗體點在硝酸纖維膜上，點膜后放入37 39°C的環境中烘干，再用O. 01摩爾PH值為7. 4含10%小牛血清的PBS緩沖液，在37°C下封閉30分鐘烘干。在本實施例中，取淋球菌單抗，調蛋白濃度至lmg/ml，加入劃膜稀釋液，用噴膜機在硝酸纖維膜中段噴所述檢測線231 ;再取兔或羊抗鼠IgG抗體調蛋白濃度至lmg/ml，加入劃膜稀釋液，用噴膜機在硝酸纖維膜的中段，距檢測線一段距離處噴所述控制線232，按O. 036ul/10cm設置噴膜量，抗體包被的膜烘干，醋酸纖維素膜可以替換所述硝酸纖維素膜。所述裂解液A3為樣品組織細胞分散劑溶液，所述裂解液B4為淋球菌原生小體的胞液和胞質膜溶解液，在本實施例中，所述裂解液A3為PPA或膽酸。所述裂解液B4為反應體系，其為BSA牛血清白蛋白，或者為BSA-V牛血清白蛋白-第五組份，或者為BSA和BSA-V的組合。所述檢測試劑盒檢測靈敏度高、檢測迅速、快捷、方便，很少出現假陰性和假陽性的問題，適于臨床或普查。本發明用于制備所述檢測試劑盒的方法所采用的技術方案是首先制備所述金標抗體層25、所述控制線232的包被及所述檢測線231的包被，然后在所述襯板21上組合淋球菌抗原金標試紙條，制成所述淋球菌抗原金標檢測卡2，再將所述淋球菌抗原金標檢測卡2裝在所述盒體I上,并在所述盒體I內存放有裂解液A3和裂解液B4。在所述襯板21的兩端分別粘貼加樣端吸水層22和吸水端吸水層24;在其中段粘貼包被抗體的所述檢測層23，在所述加樣端吸水層22與所述檢測層23的交接部位，夾貼所述金標抗體層25，所述金標抗體層25的4/5部分在所述加樣端吸水層22中間，所述金標抗體層25的1/5部分壓在硝酸纖維素膜的所述檢測層23上，然后按4. 1±0.1毫米的寬度規格切成條，再組裝成所述檢測卡2，所述加樣孔11正對所述加樣端吸水層22，所述觀察孔12正對纖維素膜的所述檢測層23.
所述金標抗體層25的制備方法包括下述步驟
a、制備膠體金,取Ig氯金酸溶于IOOOml雙蒸水中，加入15ml、濃度為1%的朽1檬酸三鈉，煮沸15分鐘；
b、膠體金標記淋球菌抗體，取IOOml膠體金溶液，用O.1摩爾的Boarx調PH值，使其PH值為8. 5，在IOOml膠體金溶液中加入4mg的淋球菌抗體，攪拌15分鐘；
C、在步驟b中得到的溶液中按10%的比例加入牛血清白蛋白，繼續攪拌5分鐘；
d、將步驟c中得到的溶液加入濃度為1%的NaCl溶液，經13000轉/分的轉速離心15分鐘，去掉上清液，得沉淀物；
e、將所述沉淀物按4 10mg/ml溶于緩沖液得金標抗體溶液，所述緩沖液中含有其重量的10%的牛血清白蛋白和O. 02%疊氮鈉；
f、用玻璃纖維或無紡布浸取所述金標抗體溶液，所述金標抗體溶液開始滲出為止，在37 °C的環境下放置2小時進行干燥而形成金標抗體層25。制備所述檢測試劑盒的方法簡便、穩定性、重復性好。實施例二
本實施例與實施例一不同之處在本實施例中，所述檢測線231由羊抗淋球菌抗體構成的，所述控制線232由兔抗羊IgG抗體形成的組成。實施例三
本實施例與實施例一及實施例二不同之處在本實施例中，所述檢測線231由兔抗淋球菌抗體構成的，所述控制線232由羊抗兔IgG抗體形成的組成。
本發明應用于淋球菌檢測領域。需要注意的是，上述僅以優選實施例對本發明進行了說明，并不能就此局限本發明的權利范圍，因此在不脫離本發明思想的情況下，凡運用本發明說明書和附圖部分的內容所進行的等效變化，均理同包含在本發明的權利要求范圍內。
權利要求
1.一種淋球菌抗原檢測方法，其特征在于其包括以下步驟 a、將膠體金標記的淋球菌抗體載于玻璃纖維載體上，并在與所述淋球菌抗體的載體相連的檢測載體上包被有由所述淋球菌抗體制成的檢測線和由免疫球蛋白G形成的控制線； b、取待測標本,所述待測標本裂解后滴于膠體金標記的淋球菌抗體的載體上,如有淋球菌抗體在所述檢測載體上形成所述檢測線和所述控制線，則為陽性，否則為陰性。
2.根據權利要求1所述的淋球菌抗原檢測方法，其特征在于所述淋球菌抗體為淋球菌單抗，或者為淋球菌多抗，或者為所述淋球菌單抗和所述淋球菌多抗的混合物。
3.一種用于如權利要求1所述的淋球菌抗原檢測方法的檢測試劑盒，其特征在于所述檢測試劑盒包括盒體(I)及設置在所述盒體(I)上的淋球菌抗原金標檢測卡(2)，所述盒體(I)內存放有裂解液A (3)和裂解液B (4)，所述盒體(I)上設置有與所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)相適配的加樣孔(11)和觀察孔(12)，將樣本滴于所述加樣孔(11)，然后從所述觀察孔(12)即可觀察檢測結果。
4.根據權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)包括襯板(21)，在所述襯板(21)上從一個方向上依次設置有加樣端吸水紙(22)、檢測層(23)和吸水端吸水層(24)，在所述檢測層(23)與所述加樣端吸水紙(22)之間搭接有淋球菌金標抗體層(25)，所述淋球菌金標抗體層(25) —端夾在所述加樣端吸水紙(22)內，在所述檢測層(23)上包被有檢測線(231)和控制線(232)。
5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于所述的檢測層(23)由硝酸纖維素膜、設在所述硝酸纖維素膜上的由所述淋球菌抗體構成的所述檢測線(231)和由免疫球蛋白G形成的所述控制線(232)組成。
6.根據權利要求3至5任一項所述的檢測試劑盒，其特征在于所述裂解液A(3)為樣品組織細胞分散劑溶液，所述裂解液B (4)為淋球菌原生小體的胞液和胞質膜溶解液。
7.根據權利要求3至5任一項所述的檢測試劑盒，其特征在于所述裂解液A(3)為PPA或膽酸。
8.根據權利要求3至5任一項所述的檢測試劑盒，其特征在于所述裂解液B(4)為反應體系，其為BSA，或者為BSA-V，或者為BSA和BSA-V的組合。
9.一種如權利要求4所述的檢測試劑盒的制備方法，其特征在于該方法為首先制備所述金標抗體層(25)、所述控制線(232)的包被及所述檢測線(231)的包被，然后在所述襯板(21)上組合淋球菌抗原金標試紙條，制成所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)，再將所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)裝在所述盒體(I)上，并在所述盒體(I)內存放有裂解液A (3)和裂解液B (4)。
10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于所述金標抗體層(25)的制備方法包括下述步驟 a、制備膠體金； b、膠體金標記淋球菌抗體,在膠體金溶液中按O.6 1. Omg/ml加入淋球菌抗并攪拌； C、經攪拌后再在溶液中加入膠體金稀釋液和膠體金溶液的混合液； d、將步驟c中的所述混合液經離心去掉上清液，得沉淀物； e、將所述沉淀物按4 10mg/ml溶于緩沖液得金標抗體溶液，所述緩沖液中含有其重量的1% 10%的動物血清白蛋白和O. 01% O. 06%的疊氮鈉； f、用玻璃纖維或無紡布浸取所述金標抗體溶液，所述金標抗體溶液開始滲出為止，然后將所述玻璃纖維或所述無紡布進行干燥從而形成金標抗體層(25)。
全文摘要
本發明公開了一種淋球菌抗原檢測方法，還公開了一種用于檢測淋球菌抗原的檢測試劑盒及制備該檢測試劑盒的方法。所述淋球菌抗原檢測方法包括以下步驟a、將膠體金標記的淋球菌抗體載于玻璃纖維載體上；b、取裂解后的待測標本滴于膠體金標記的淋球菌抗體的載體上。所述檢測試劑盒包括盒體(1)及淋球菌抗原金標檢測卡(2)，所述盒體(1)內存放有裂解液A(3)和裂解液B(4)，所述盒體(1)上設置有與所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)相適配的加樣孔(11)和觀察孔(12)。制備該檢測試劑盒的方法是先制成所述淋球菌抗原金標檢測卡(2)，然后再進行組裝。本發明應用于醫學領域。
文檔編號G01N33/571GK103018444SQ20121057831
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月27日 優先權日2012年12月27日
發明者孫宜峰, 郭華燕, 曾冰冰 申請人:珠海市銀科醫學工程有限公司