專利名稱：一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法
一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法
技術領域：
本發明涉及一種室內質控物的配置方法，尤其涉及一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法。
背景技術：
腺病毒對呼吸道、胃腸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染。呼吸道感染呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時伴有發熱、寒戰、頭痛和肌肉痛等，包括以下4種不同的綜合征1.急性發熱性咽喉炎通常為嬰兒和兒童發病，由C組病毒引起，出現咳嗽，鼻塞、發熱和咽喉部潰瘍等癥狀，這些表現難以與其他病毒引起的輕型呼吸道感染鑒別。2.咽結膜熱(pharyngoconjunctival fever)癥狀與急性發熱性咽喉炎相似,但常同時發生結膜炎。咽結膜熱有暴發流行傾向，如游泳池結膜炎，多由B組腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般無后遺癥。3.急性呼吸道疾病(acute respiratory diseases, ARD)這一綜合征由咽炎、發熱、咳嗽和全身不適為特點，常在軍隊的新兵中流行，多因突然緊張、勞累、聚集等所致。此感染多由腺病毒4、7型引起，也可見于3型。4、腺病毒肺炎約占兒童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率為8% 10% ;肺炎也是新兵急性呼吸道疾病的一種嚴重表現。胃腸炎40型和41型腺病毒可引起嬰幼兒與年少(4歲以下)兒童的胃腸炎，致腹痛、腹瀉。C組腺病毒能引起某些嬰幼兒腸套疊。其他疾患腺病毒11、12型能引起兒童急性出血性膀胱炎，尿中出現病毒。37型可引起女性宮頸炎和男性尿道炎，常由性傳播感染。在免疫功能低下者可引起偶發或嚴重的病毒感染，尤其在器官移植病人中發生嚴重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多種血清型腺病毒，并能出現抗原性介于中間的雜合型毒株，而且常為致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的ElA蛋白可反式激活HIV的轉錄，加速HIV的復制。臨床發現37%的艾滋病患者病毒性腹瀉是由腺病毒所致。腺病毒抗原檢測是診斷該病的常用方法，其檢測方法有多種，其中金標法因其靈敏度、特異性與酶聯免疫法相當，省時、省力，不需特殊設備，故在臨床中被廣泛應用。目前，多數定量檢測(如谷丙轉氨酶活性測定等)已有商品化質控物，但腺病毒抗原檢測(金標定性法)沒有商品化質控物，如不自行配制就難以開展室內質控，為監測檢驗試劑的靈敏度，防止假陰性出現，定性試驗的陽性質控物一般采用弱陽性樣本，檢驗試劑靈敏度稍微下降即可通過使用該質控物反應出來，而高濃度質控物不利于監測試劑靈敏度，且使用的原材料多。
發明內容本發明的目的是提供一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，本發明是通過以下技術方案來實現的一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，包括如下步驟(I)質控物容器封閉處理將O. 5ml規格的離心管用O. 5%至2. O %的小牛血清白蛋白加滿，放置于4°C冰箱內，封閉24小時后，然后棄悼所述離心管管內液體，再將所述離心管放置于生物安全柜內自然涼干備用；(2)配制臨界質控物在收集到的腺病毒抗原陽性的糞便標本中加適量生理鹽水，充分混勻，移至20ml離心管內，用3000轉/分的轉速離心5分鐘，收集上清液置56°C滅活30分鐘，用倍比稀釋法以腺病毒抗原檢測出極弱陽性的稀釋度作為最大稀釋度，將離心管上清液用無菌生理鹽水稀釋至2倍最大稀釋度濃度，加蛋白穩定劑、疊氮鈉至終濃度分別為1. 0-10. 0g/L、0. 3-3. Og/L，再分裝至封閉后的O. 5ml塑料離心管內，每管50-500 μ I ；(3)質控物保存將分裝好的臨界值質控物保存于4°C至_20°C條件下。進一步地，所述離心管為塑料離心管。本發明的有益效果在于本發明的被測物濃度設計在臨界值水平，檢驗試劑靈敏度稍微下降即可通過使用該質控物反應出來，可監測相應試劑在流通、保存、使用過程中是否出現變質，臨界值質控物因被測物含量很低，容易在保存過程中降解和被塑料離心管壁吸附，本發明制備的腺病毒抗原臨界值質控物，因預先將一次性塑料離心管進行了封閉處理，并加入了防腐劑和蛋白穩定劑，通過低溫保存措施，有效期大于一年。
具體實施方式下面根據具體實施方式
對本發明做進一步描述實施例1 : 一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，包括如下步驟(I)質控物容器封閉處理將O. 5ml規格的離心管用O. 5%的小牛血清白蛋白加滿，放置于4°C冰箱內，封閉24小時后，然后棄悼所述離心管管內液體，再將所述離心管放置于生物安全柜內自然涼干備用；(2)配制臨界質控物在收集到的腺病毒抗原陽性的糞便標本中加適量生理鹽水，充分混勻，移至20ml離心管內，用3000轉/分的轉速離心5分鐘，收集上清液置56°C滅活30分鐘，用倍比稀釋法以腺病毒抗原檢測出極弱陽性的稀釋度作為最大稀釋度，將離心管上清液用無菌生理鹽水稀釋至2倍最大稀釋度濃度，加蛋白穩定劑、疊氮鈉至終濃度分別為1. 0g/L、0. 3g/L，分裝至封閉后的O. 5ml塑料離心管內，每管50 μ I ;(3)質控物保存將分裝好的臨界值質控物保存于4°C條件下。優選地，所述離心管為塑料離心管。本發明制備的腺病毒抗原臨界值質控物，用相應試劑進行檢測，結果全部為極弱陽性，與預期結果一致，可監測腺病毒抗原金標試劑的靈敏度。實施例2 —種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，包括如下步驟(I)質控物容器封閉處理將O. 5ml規格的離心管用2. 0%的小牛血清白蛋白加滿，放置于4°C冰箱內，封閉24小時后，然后棄悼所述離心管管內液體，再將所述離心管放置于生物安全柜內自然涼干備用；
(2)配制臨界質控物在收集到的腺病毒抗原陽性的糞便標本中加適量生理鹽水，充分混勻，移至20ml離心管內，用3000轉/分的轉速離心5分鐘，收集上清液置56°C滅活30分鐘，用倍比稀釋法以腺病毒抗原檢測出極弱陽性的稀釋度作為最大稀釋度，將離心管上清液用無菌生理鹽水稀釋至2倍最大稀釋度濃度，加蛋白穩定劑、疊氮鈉至終濃度分別為10. Og/L、3. Og/L,分裝至封閉后的O. 5ml塑料離心管，每管500 μ I ;(3)質控物保存將分裝好的臨界值質控物保存于_20°C條件下。優選地，所述離心管為塑料離心管。用本發明制備的腺病毒抗原臨界值質控物開展室內質控一年，確定因試劑靈敏度下降引起的失控次數有5次，及時地發現了試劑質量問題，保障了患者結果的準確性。根據上述說明書的揭示和教導，本發明所屬領域的技術人員還可以對上述實施方式進行適當的變更和修改。因此，本發明并不局限于上面揭示和描述的具體實施方式
，對本發明的一些修改和變更也應當落入本發明的權利要求的保護范圍內。此外，盡管本說明書中使用了一些特定的術 語，但這些術語只是為了方便說明，并不對本發明構成任何限制。
權利要求
1.一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，其特征在于包括如下步驟 (1)質控物容器封閉處理將O.5ml規格的離心管用O. 5%至2. 0%的小牛血清白蛋白加滿，放置于4°C冰箱內，封閉24小時后，然后棄悼所述離心管管內液體，再將所述離心管放置于生物安全柜內自然涼干備用； (2)配制臨界質控物在收集到的腺病毒抗原陽性的糞便標本中加適量生理鹽水，充分混勻，移至20ml離心管內，用3000轉/分的轉速離心5分鐘，收集上清液置56°C滅活30分鐘，用倍比稀釋法以腺病毒抗原檢測出極弱陽性的稀釋度作為最大稀釋度，將離心管上清液用無菌生理鹽水稀釋至2倍最大稀釋度濃度，加蛋白穩定劑、疊氮鈉至終濃度分別為1.0-10. Og/L,O. 3-3. Og/L，分裝至封閉后的O. 5ml塑料離心管內，每管50-500 μ I ； (3)質控物保存將分裝好的臨界值質控物保存于4°C至_20°C條件下。
2.根據權利要求1所述的腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，其特征在于所述離心管為塑料離心管。
全文摘要
本發明提供了一種腺病毒抗原臨界值質控物的配制方法，包括如下步驟(1)質控物容器封閉處理將0.5％至2.0％的小牛血清白蛋白加滿離心管，置4℃冰箱封閉24小時，棄悼管內液體，涼干備用；(2)配制臨界質控物在腺病毒抗原陽性的糞便標本中加生理鹽水，混勻，移至離心管，用3000轉/分的轉速離心5分鐘，滅活30分鐘，用以腺病毒抗原檢測出極弱陽性的稀釋度作為最大稀釋度，將離心管上清液稀釋至2倍最大稀釋度濃度，加蛋白穩定劑、疊氮鈉至終濃度分別為1.0-10.0g/L、0.3-3.0g/L，分裝至封閉后的0.5ml離心管，每管50-500μl；(3)質控物保存保存于4℃至-20℃條件下，本發明的有益效果在于制備簡單、可監測相應試劑在流通、保存、使用過程中是否出現變質，有效期長。
文檔編號G01N1/38GK103048443SQ20121056354
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月21日 優先權日2012年12月21日
發明者劉和錄, 竇宇紅, 杜紀坤, 華建江, 吳雄君, 徐志康, 丁華 申請人:劉和錄