專利名稱：一種高效液相色譜法測定西瓜中瓜氨酸含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種瓜氨酸測定方法，具體涉及一種高效液相色譜法測定西瓜中瓜氨酸含量的方法。
背景技術：
瓜氨酸，英文名稱Citrulline，因其最初發現于西瓜汁而得名，是一種非蛋白質L-a -氨基酸，它具有肽鍵形成的能力，但不參與蛋白質的合成。瓜氨酸曾一度被人們認為是尿素循環的中間產物，然而，最近的研究表明，瓜氨酸能廣泛應用于醫藥、食品保健等各個方面，具有良好的藥理作用。瓜 氨酸可以使人的血管獲得松弛，用于增強男性性功能，以及治療性功能障礙。維護健康的肺功能，提高腦力清晰度，有幫助腦神經細胞具貯藏與調回訊息的功能。瓜氨酸的測定方法主要包括分光光度法、酶-比色法、柱前衍生-高效液相色譜法。分光光度法主要是利用瓜氨酸結構的某官能團反應生成有色物質比色測定，由于某些物質具有相似結構，此法特異性較差，易造成假陽性影響實驗結果；酶-比色法中，酶可以專一性酶解瓜氨酸，但酶制劑價格昂貴，限制了其在實際檢測中的應用；柱前衍生方法，瓜氨酸與特定試劑發生衍生反應后，依靠液相色譜實現與其他物質的分離，方法較為準確可靠。田瑤等(中藥新藥與臨床藥理，2012，23 (2) =180-183)公開了利用鄰苯二甲醛(OPA)作為柱前衍生試劑，反相高效液相色譜測定家兔關節微透析液中精氨酸和瓜氨酸的方法；劉放南等(腸外與腸內營養，2004，11 (2) :116-117)公開了將異硫氰酸苯酯(PITC)作為柱前衍生劑，反相高效液相色譜測定血清中瓜氨酸的方法。本發明建立了一種新的瓜氨酸測定方法，9-羥基咕噸作為柱前衍生劑，采用液相色譜-熒光檢測器檢測，本方法具有前處理簡單、基質干擾小、準確度高等特點，能夠滿足日常檢測工作的需要。
發明內容
本發明要解決的技術問題在于選擇合適的溶劑，提取西瓜中的瓜氨酸，采用9-羥基咕噸作為衍生劑，酸性條件下進行衍生，降低基質干擾，開發一種新的測定西瓜中瓜氨酸的方法。本發明所述的的技術問題可通過以下技術方案得以解決(I)準確稱取l_2g去皮去籽粉碎后的西瓜樣品于50mL離心管中，加無水乙醇至10mL，震蕩提取 20-30min ；(2)提取液在5000_8000r/min條件下離心3_5min,取上清液過0. 45 u m有機濾
膜，得濾液；(3)取上述濾液0.5-1.01^于1.511^進樣瓶中，加入0.0211101/1 9_羥基咕噸衍生劑50-200 uL,1. 5mol/L鹽酸25-100 u L,使得衍生反應比例按體積比為試樣提取液0.02mol/L 9-羥基咕噸1. 5mol/L鹽酸=10 2 1-20 2 1，混勻，室溫條件下避光反應20-30min ；(4)衍生后的樣液采用高效液相色譜法分離檢測，外標法定量，計算西瓜中瓜氨酸的含量。 優選高效液相色譜條件色譜柱以碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相乙腈+0. 02mol/L乙酸鈉水溶液(梯度洗脫，程序見表I)；流速1.OmL/min ；進樣量IOiiL ;柱溫35°C;激發波長213nm,發射波長308nm。表I液相色譜梯度洗脫條件
權利要求
1.一種高效液相色譜法測定西瓜中瓜氨酸含量的方法，其特征包括如下步驟 (1)取l_2g試樣于離心管中，加入有機溶劑，室溫振蕩提取20-30min，離心，取上清液過0. 45 濾膜，得濾液； (2)取上述濾液按比例加入0.02mol/L 9-羥基咕噸衍生劑和1. 5mol/L鹽酸，在酸性條件下衍生，室溫條件下避光反應20-30min ； (3)衍生后的樣液經高效液相色譜分離，熒光檢測器檢測，外標法定量。
2.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所述加入有機溶劑為無水乙醇。
3.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所用的0.02mol/L9-羥基咕噸衍生劑采用無水乙醇為溶劑配制。
4.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，衍生反應比例按體積比為試樣提取液0.02mol/L 9-羥基咕噸衍生劑1. 5mol/L 鹽酸為 10 2 1-20 : 2 :1。
全文摘要
本方法公開了一種高效液相色譜法測定西瓜中瓜氨酸含量的方法，包括以下步驟取粉碎后的西瓜樣品加入無水乙醇，振蕩提取，提取液離心后，取上清液經濾膜過濾，濾液中加入9-羥基呫噸衍生劑，在酸性條件下衍生，衍生產物經碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，熒光檢測器檢測，外標法定量。本方法具定量快速準確、基質干擾小、避免假陽性等特點。
文檔編號G01N30/02GK103063762SQ20121055872
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月21日 優先權日2012年12月21日
發明者宋薇 申請人:青島譜尼測試有限公司