專利名稱：一種化妝品中酚類雌激素的快速篩查方法
技術領域：
本發明涉及化妝品檢測領域，更具體地，涉及一種化妝品中酚類雌激素的快速篩
查方法。
背景技術：
雌激素被違規添加到各類功能性化妝品中，其長期使用會導致色素沉積，皮膚萎 縮變薄，使兒童性早熟，男性女性化，甚至引發多種癌癥，嚴重威脅人類健康，已被2007《化妝品衛生規范》規定為違禁物質，其檢測對于嚴格控制化妝品產品質量，確保化妝品使用安全，對政府實施衛生監督和保障人民身體健康意義重大。目前，化妝品中雌激素的檢測方法主要是高效液相色譜法，氣相色譜法-質譜連用法。尚缺少簡便快速的衛生化學檢驗方法用于現場快速篩查。使用化學顯色劑顯色法雖然快捷，但是由于化妝品中成分復雜，直接使用化學顯色劑進行顯色會出現假陽性反應。使用酚類雌激素的常用顯色劑重氮苯磺酸試液進行顯色時，化妝品中的酚類物質對其干擾較大。特別是化妝品中存在的防腐劑水楊酸，用重氮苯磺酸試液進行顯色時產生假陽性反應無法消除，需要進一步使用高效液相色譜進行確認。因此，這限制了化學顯色法在快速篩查化妝品中酚類雌激素的的應用。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術中使用化學顯色劑在快速篩查化妝品中酚類雌激素的不足，提供一種化妝品中酚類雌激素的快速篩查方法。本發明所要解決的上述技術問題通過以下技術方法予以實現
提供一種化妝品中酚類雌激素的快速篩查方法，包括如下步驟
51.向化妝品中加入飽和弱堿性溶液，充分振搖；再加入三氯甲烷，充分振搖；
52.吸取三氯甲烷層溶液，與顯色劑反應，根據顏色反應判斷化妝品中是否含有酚類雌激素。本發明利用水楊酸鈉和酚類雌激素在有機溶劑和水相中的溶解度不同，對兩者進行簡單的選擇性分離，水楊酸鈉主要分配于水相，而酚類雌激素難溶于水，主要分配于有機溶劑氯仿層。經過對化妝品基本成分的性質分析,本發明人選擇多種有機溶劑例如液體石蠟、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷作為提取劑，并經試驗綜合分析比較，總結三氯甲烷對實際樣品的提取和分離的效果好，可成功將酚類雌激素提取到有機溶劑氯仿層，并能順利開展后續顯色實驗。采用液體石蠟提取時分層效果不明顯；采用石油醚提取時可分層，但顯色反應效果較差；相比較而言，乙酸乙酯作溶劑，可實現充分提取，但后續的顯色反應結果需在Imin內做出快速判斷，如果Imin后溶液分層，溶液還會出現假陽性現象。而采用三氯甲烷則不會出現類似現象。
作為一種優選方案，SI中所述的飽和弱堿性溶液為飽和碳酸氫鈉。酚的酸性一般弱于羧酸和碳酸，大多數酚類物質不能與弱堿性物質碳酸氫鈉發生反應。水楊酸本身不溶于水，但水楊酸可以和碳酸氫鈉發生反應生成水楊酸鈉，故可利用該反應，而將水楊酸溶于碳酸氫鈉水溶液中；而絕大多數酚類化合物并不能很好溶解于碳酸氫鈉水溶液。選擇飽和碳酸氫鈉水溶液的原因是確保體系中的水楊酸能完全反應而進入水相，經之后的提取步驟后，避免顯色過程中因水楊酸所致的假陽性顯色現象。作為一種優選方案，SI中化妝品、飽和弱堿性溶液和三氯甲烷用量比為O. 5^1. 5g:1 3mL:1 3mL。·作為一種更優選方案，SI中化妝品、飽和弱堿性溶液和三氯甲烷用量比為0.8 L2g : 1.5 2.5mL:1. 5 2. 5mL。作為一種最優選方案，SI中化妝品、飽和弱堿性溶液和三氯甲烷用量比為Ig :2mL : 2mL。作為一種優選方案，所述的顯色劑反應，其反應方法為在三氯甲烷層溶液中加入NaOH溶液和顯色劑，振蕩；其中三氯甲烷層溶液、NaOH溶液和顯色劑的用量比為l 3mL :O. 5 1. 5mL: O. 5 1. 5mL ;所述 NaOH 溶液的濃度為 O. 5 1. 5 mol/L。作為一種更優選方案，其中三氯甲烷層溶液、NaOH溶液和顯色劑的用量比為廣2mL:0.8 1.2mL: O. 8 1. 2mL ;
作為一種最優選方案，所述的三氯甲烷層溶液、NaOH溶液和顯色劑的用量比為1. 5mL :1mL:1mL0
作為一種更優選方案，所述NaOH溶液的濃度為O. 8 1. 2 mol/L。作為一種最優選方案，所述NaOH溶液的濃度為lmol/L。作為一種優選方案，所述的顯色劑為重氮對硝基苯胺試液或重氮苯磺酸試液。作為一種優選方案，所述的重氮苯磺酸試液是通過常用的方法配制而成，所述的重氮對硝基苯胺試液為自己制備得到。作為一種最優選方案，所述的重氮對硝基苯胺試液通過如下方法制備得到
51.在對硝基苯胺中，加入6mol/L鹽酸，超聲溶解，得對硝基苯胺的鹽酸溶液；
52.將碎冰和亞硝酸鈉溶液混合，在攪拌下加入SI中所述的對硝基苯胺的鹽酸溶液；即得顯色劑試液；
其中，所述的對硝基苯胺、鹽酸、碎冰和亞硝酸鈉溶液的用量比為O. 5^1. 5g 2^4mL 2(T40g :4 8mL ;所述的亞硝酸鈉溶液的濃度為O. 5 1. 5 mo I · L-1。本發明提供一種優選方案，所述的對硝基苯胺、鹽酸、碎冰和亞硝酸鈉溶液的用量比為O. 8 1. 2g 2. 5 3. 5mL :25 35g :5. 5 7mL ;所述的亞硝酸鈉溶液的濃度為O. 8 1. 2mo I · L 1。作為一種最優選方案，所述的對硝基苯胺、鹽酸、碎冰和亞硝酸鈉溶液的用量比為0. 9g 3mL 30g :6. 5mL。作為一種最優選方案，所述的亞硝酸鈉溶液的濃度為I mol · L—1。作為一種最優選方案，在加入對硝基苯胺的鹽酸溶液后，繼續攪拌反應物I IOmin0
作為ー種更優選方案，在加入對硝基苯胺的鹽酸溶液后，繼續攪拌反應物:TSmin。作為ー種最優選方案，在加入對硝基苯胺的鹽酸溶液后，繼續攪拌反應物5min。作為ー種針對性較好的方案，所述的化妝品為粉狀、膏狀、啫喱、乳液或水狀化妝品，其顔色可為無色、透明、白色或淺黃色。應用本發明所述的快速篩查方法，如果最終顔色呈紅色，可以判定化妝品種含酚類雌激素；如果不顯色，則可判定化妝品中一定不含酚類雌激素。本發明的有益效果
(I)本發明提供了一種化妝品中酚類雌激素的篩查方法，其操作方法簡單，不需要使用分析儀器，只需將化妝品放入試管中進行樣品前處理后，加入堿液，然后顯色劑，根據其顏色變化，在幾分鐘內就可判斷化妝品中是否含有酚類雌激素，實現了化妝品中酚類 雌激素的快速篩查。與使用分析儀器相比，大大降低了篩查成本，對于操作人員也無需進行特殊培訓。因此，本發明特別適合基層衛生監瞀部門對化妝品進行執法檢查，可實現現場快速檢測,提高了執法效率，同時也降低執法成本。(2)本發明的專屬性好，化妝品中的基質(如白凡士林、硬脂醇等)，防腐劑(尼泊金酯類)、表面活性劑(卡波普、月桂醇硫酸鈉等)并不干擾顯色反應，抗氧化劑(維生素E)、保濕劑(丙ニ醇)、糖皮質激素類物質(ニ丙酸倍他米松、倍他米松磷酸鈉、丁酸氫化可的松、醋酸尼泊松等)也不具有顯色效果，故不干擾測定，避免了相關的假陽性顯色反應。尤其是化妝品中常見防腐劑水楊酸也不出現假陽性顯色反應。(3)本發明所述的快速篩查方法靈敏度高；各酚類雌激素的最低顯色含量分別為雌三醇0. 02mg/g、雌酮0. 008mg/g、炔雌醇0. 02mg/g、己烯雌酹0. 02mg/g、戍酸雌ニ醇
0.04mg/g、苯甲酸雌ニ醇顯色最低濃度約0. 02mg/go
具體實施例方式下面結合具體實施例來進ー步解釋本發明，但實施例對發明不做任何形式的限定。以下實施例中的顯色劑的配制方法1、重氮對硝基苯胺試液配制S1.在ー個50mL燒杯中放入0. 9g對硝基苯胺，再加入3mL 6mol/L鹽酸，超聲攪拌使溶解得對硝基苯胺的鹽酸溶液；S2.在另ー個50mL燒杯中將30g碎冰和6. 5mL Imol じ1亞硝酸鈉溶液相混合，在攪拌下倒入對硝基苯胺的鹽酸溶液中。繼續攪拌反應物5min，即得顯色劑試液。試液儲存于棕色瓶中。2、重氮苯磺酸試液的配制取對氨基苯磺酸1. 57g，加水SOmL與稀鹽酸(10質量％) IOmL,在水浴上加熱溶解后，放冷至15°C，緩慢加入Imol じ1亞硝酸鈉溶液6. 5mL,隨加隨攪拌，再加水稀釋至IOOmL,即得重氮苯磺酸試液，試液儲存于棕色瓶中。對比例I
化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸5mg/g) lg，不進行本樣品堿化、萃取等樣品前處理步驟即直接加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮對硝基苯胺試液lmL，震蕩，顯色為紅色，此為假陽性顯色。對比例2
化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) lg,不進行樣品堿化、萃取等樣品前處理步驟即直接加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，此為假陽性顯色。對比例3
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) lg,加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入こ酸こ酯2mL，充分振搖提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取こ酸こ酯層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮對硝基苯胺試液lmL，震蕩，Imin內觀察不產生顯色反應 ，避免了假陽性顯色，但放置Imin后溶液分層顯紅色，出現假陽性。實施例1
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) lg,加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮對硝基苯胺試液lmL，震蕩，不產生顯色反應，避免了假陽性顯色。放置5min后溶液仍不顯色。實施例2
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) lg,加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，不產生顯色反應，避免了假陽性顯色。放置IOmin后溶液仍不顯色。實施例3
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) 0. 5g，加入飽和碳酸氫鈉溶液3mL，充分振搖約反應lmin，之后加入三氯甲烷3mL，充分振搖提取約lmin，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約2mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮對硝基苯胺試液lmL，震蕩，不產生顯色反應，避免了假陽性顯色。放置20min后溶液仍不顯色。實施例4
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g)1. 5g,加入飽和碳酸氫鈉溶液1. 5mL,充分振搖約反應3min，之后加入三氯甲烷1. 5mL，充分振搖提取約3min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約lmL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液1. 5mL和重氮苯磺酸試液1. 5mL，震蕩，不產生顯色反應，避免了假陽性顯色。放置30min后溶液仍不顯色。實施例5
該化妝品可伶可俐(配方中含有水楊酸約5mg/g) 0. 5g，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應3min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖提取約3min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲燒層溶液約1. 5mL,轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，不產生顯色反應，避免了假陽性顯色。實施例6
在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. 02mg雌三醇，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷下層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。實施例7在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. OOSmg雌酮，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。實施例8
在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. 02mg炔雌醇，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。實施例9·
在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. 02mg己烯雌酚，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。實施例10
在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. 04mg戊酸雌ニ醇，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲燒層溶液約1. 5mL,轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。實施例11
在該化妝品可伶可俐Ig中加入0. 02mg苯甲酸雌ニ醇，加入飽和碳酸氫鈉溶液2mL，充分振搖約反應2min，之后加入三氯甲烷2mL，充分振搖約提取約2min，用刻度膠頭吸管吸取三氯甲烷層溶液約1. 5mL，轉移到試管中，加入濃度為lmol/L的NaOH溶液ImL和重氮苯磺酸試液lmL，震蕩，顯色為紅色，提示該模擬化妝品樣品中添加有酚類雌激素。
權利要求
1.一種化妝品中酚類雌激素的快速篩查方法，其特征在于，包括如下步驟51.向化妝品中加入飽和弱堿性溶液，充分振搖；再加入三氯甲烷，充分振搖；52.吸取三氯甲烷層溶液，與顯色劑反應，根據顏色反應判斷化妝品中是否含有酚類雌激素。
2.根據權利要求1所述的快速篩查方法，其特征在于，SI中所述的飽和弱堿性溶液為飽和碳酸氫鈉溶液。
3.根據權利要求1所述的快速篩查方法，其特征在于，SI中化妝品、飽和弱堿性溶液和三氯甲烷用量比為O. 5 1. 5g :1 3mL:1 3mL。
4.根據權利要求1所述的快速篩查方法，其特征在于，SI中化妝品、飽和碳酸氫鈉溶液和三氯甲烷用量比為O. 8 1. 2g : 1.5 2.5mL:1. 5 2. 5mL。
5.根據權利要求1所述的快速篩查方法，其特征在于，SI中化妝品、飽和弱堿性溶液和三氯甲烷用量比為Ig 2mL : 2mL。
6.根據權利要求1所述的快速篩查方法，其特征在于，所述的與顯色劑反應，其反應方法為在三氯甲烷層溶液中加入NaOH溶液和顯色劑，振蕩；其中三氯甲烷層溶液、NaOH溶液和顯色劑的用量比為f 3mL: O. 5 1. 5mL:O.5^1. 5mL ;所述 NaOH 溶液的濃度為 O. 5^1. 5 mol/L。
7.根據權利要求6所述的快速篩查方法，其特征在于，所述的三氯甲烷層溶液、NaOH溶液和顯色劑的用量比為1. 5mL :1mL: lmL。
8.根據權利要求7所述的快速篩查方法，其特征在于，所述NaOH溶液的濃度為O.8^1. 2 mol/L。
9.根據權利要求6所述的快速篩查方法，其特征在于，所述的顯色劑為重氮對硝基苯胺試液或重氮苯磺酸試液。
10.根據權利要求1至9任一項所述的快速篩查方法，其特征在于，所述的化妝品為粉狀、膏狀、啫喱、乳液或水狀。
全文摘要
本發明涉及化妝品檢測領域，公開了一種化妝品中酚類雌激素的快速篩查方法。該方法包括如下步驟S1.向化妝品中加入飽和弱堿性溶液，充分振搖；再加入三氯甲烷，充分振搖；S2.吸取三氯甲烷層溶液，與顯色劑反應，根據顏色反應判斷化妝品中是否含有酚類雌激素。本發明方法操作簡單，不需要使用分析儀器，特別適合基層衛生監督部門對化妝品進行執法檢查，可實現現場快速檢測，提高了執法效率，同時也降低執法成本。
文檔編號G01N21/78GK103018239SQ20121053837
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月13日 優先權日2012年12月13日
發明者潘育方, 翟海云, 余曉, 袁凱松, 招春華 申請人:廣東藥學院