專利名稱：生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法及檢測方法
技術領域：
本發明涉及乳制品檢測領域，特別涉及一種生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法及檢測方法。
背景技術：
優質生牛乳是乳業發展的基礎。生牛乳營養豐富，是天然的優良培養基，微生物可在適宜條件下快速生長，使生牛乳變質無法飲用、加工。細菌總數指標的測定是衡量生牛乳品質的重要指標，對乳制品的生產和質量監控有著重要的指導意義。目前在行業中被廣泛應用細菌總數測定方法包括標準平板計數法(SPC法)與流式細胞法，這兩種方法在實際應用中存在一定缺陷。
SPC法的主要缺陷包括①SPC法對牛乳收集現場條件的要求較高，國內的多數牛乳收集現場條件簡陋，無法進行SPC法操作 級SPC法操作繁瑣，需要操作人員具有一定的微生物實驗技能，這限制了 SPC法的推廣使用SPC法檢測結果滯后性強，無法在第一時間快速反映生牛乳的細菌總數指標。
流式細胞法的主要缺陷包括檢測成本高，每個樣品的檢測成本為5RMB左右，大量采樣將出現成本倒掛的問題。發明內容
本發明的目的在于克服現有的生牛乳細菌總數測定方法所具有的缺陷，從而提供一種快速、有效、方便的細菌總數測定試紙與測定方法。
為了實現上述目的，本發明提供了一種生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，包括
步驟I)、對濾紙進行干燥處理；
步驟2)、對干燥處理后的濾紙做第一次浸泡，在此次浸泡過程中所采用的浸泡液為表面活性劑與緩沖鹽的水溶液，該水溶液的PH值在6. 8-8. O之間，所述濾紙在該浸泡液中浸泡I 10分鐘；
步驟3)、烘干經過第一次浸泡的濾紙；
步驟4)、對烘干后的濾紙做第二次浸泡，此次浸泡過程中所采用的浸泡液為刃天青溶液與硫酸鈣溶液混合而成的反應液，所述刃天青溶液的質量百分比為O. 1 % 1%，所述硫酸鈣溶液的質量百分比為O. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液與硫酸鈣溶液之間的體積比為 1:1 10:1，浸泡時間為I 10分鐘；
步驟5)、對經過第二次浸泡后的濾紙再次烘干。
上述技術方案中，在所述的步驟2)中，所述表面活性劑采用非離子表面活性劑。
上述技術方案中，在所述的步驟2)中，所述緩沖鹽采用磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液或硼酸緩沖液。
上述技術方案中，在步驟3)中，所述烘干操作的烘干溫度為50 90°C，烘干時間在5_40min之間。
上述技術方案中，所述濾紙為中速濾紙。
本發明還提供了一種生牛乳細菌總數檢測試紙，
采用所述的制作方法制備而成。
本發明還提供了一種生牛乳細菌總數的檢測方法，包括
步驟A)、選取采用所述的制作方法制備而成的試紙；
步驟B)、將待檢測樣品滴到步驟A)所選取的試紙上；
步驟C)、待5分鐘后檢測試紙的顏色，若試紙顏色為藍色，則細菌總數 (^XlO4Cfumr1 ;若試紙顏色為紫色，則細菌總數為30-130X IO4CfumL-1 ;若試紙顏色為粉色，則細菌總數彡200 X IO4Cfumr1 ο
本發明的優點在于
快速、有效、方便的細菌總數測定方法對生牛乳初期的收集過程中對品質的控制有重要意義。
圖1是本發明的生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法的流程圖。
具體實施方式
現結合附圖對本發明作進一步的描述。
鑒于現有的用于生牛乳的細菌總數檢測方法所存在的不足，本發明通過試紙檢測的方法實現對生牛乳中細菌總數的檢測。
本發明的用于測定生牛乳細菌總數的試紙按如下步驟制作
步驟一、對濾紙進行干燥處理。
在后續的步驟中，需要將濾紙浸泡到藥液中，為保證浸泡藥液后試紙中的藥液濃度一致，需對濾紙中的水分進行去除。在本實施例中，所采用的干燥處理方法包括將濾紙在硫酸銅干燥皿中放置20-40min。在其他實施例中，也可采用其他類型的干燥方法，如熱風干燥、微波干燥、冷凍干燥等。
作為一種優選實現方式，在本實施例中所述濾紙為中速濾紙，在其他實施例中，也可采用其他類型的濾紙。
步驟二、對干燥處理后的濾紙做第一次浸泡，在此次浸泡過程中所采用的浸泡液為表面活性劑、緩沖鹽的水溶液，該水溶液的PH值的大小在6. 8-8. O之間，所述濾紙在該浸泡液中浸泡I 10分鐘。
在本實施例中，所述表面活性劑采用非離子表面活性劑,如Tween80或span 80; 所述緩沖鹽采用磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液或硼酸緩沖液。
步驟三、對經過第一次浸泡后的濾紙加以烘干。
本實施例中，所述烘干操作的烘干溫度為50 90°C，烘干時間在5_40min之間。
步驟四、對烘干后的濾紙做第二次浸泡，此次浸泡過程中所采用的浸泡液為刃天青溶液與硫酸鈣溶液混合而成的反應液，浸泡時間約I 10分鐘。
在本實施例中，所述刃天青溶液的質量百分比為O. 1% 1%，所述硫酸鈣溶液的質量百分比為O. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液與硫酸鈣溶液之間的體積比為1:1 10:1。
步驟五、對經過第二次浸泡后的濾紙再次烘干。
在本實施例中，所述烘干操作在4 10° C的溫度條件下通過自然風干干燥。
在得到經由上述步驟所生成的試紙后，建立試紙與待測樣品反應后的顏色與細菌總數之間的對應關系。
在一個實施例中，選取細菌總數彡200X104cfuml_l的樣品，用UHT乳以1:1、 1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:19 比例稀釋。將待測樣品混勻，取 O.1ml 滴在試紙上，于lmin、5min、10min記錄顏色變化，并應用標準平板計數法(SPC法)檢測樣品細菌總數。結果如下
表ISPC法與試紙法檢測結果
權利要求
1.一種生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，包括 步驟1)、對濾紙進行干燥處理； 步驟2)、對干燥處理后的濾紙做第一次浸泡，在此次浸泡過程中所采用的浸泡液為表面活性劑與緩沖鹽的水溶液，該水溶液的PH值在6. 8-8. O之間，所述濾紙在該浸泡液中浸泡1 10分鐘； 步驟3)、烘干經過第一次浸泡的濾紙； 步驟4)、對烘干后的濾紙做第二次浸泡，此次浸泡過程中所采用的浸泡液為刃天青溶液與硫酸鈣溶液混合而成的反應液，所述刃天青溶液的質量百分比為0. 1% 1%，所述硫酸鈣溶液的質量百分比為0. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液與硫酸鈣溶液之間的體積比為1:1 10:1，浸泡時間為I 10分鐘； 步驟5)、對經過第二次浸泡后的濾紙再次烘干。
2.根據權利要求1所述的生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，其特征在于，在所述的步驟2)中，所述表面活性劑采用非離子表面活性劑。
3.根據權利要求1所述的生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，其特征在于，在所述的步驟2)中，所述緩沖鹽采用磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液或硼酸緩沖液。
4.根據權利要求1所述的生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，其特征在于，在步驟3)中，所述烘干操作的烘干溫度為50 90°C，烘干時間在5-40min之間。
5.根據權利要求1所述的生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，其特征在于，所述濾紙為中速濾紙。
6.一種生牛乳細菌總數檢測試紙，其特征在于， 采用權利要求1-5之一的制作方法制備而成。
7.一種生牛乳細菌總數的檢測方法,包括 步驟A)、選取采用權利要求1-5之一的制作方法制備而成的試紙； 步驟B)、將待檢測樣品滴到步驟A)所選取的試紙上； 步驟C)、待5分鐘后檢測試紙的顏色，若試紙顏色為藍色，則細菌總數≤40*104cfumL ;若試紙顏色為紫色，則細菌總數為So-1SoXio4CfumL-1 ;若試紙顏色為粉色，則細菌總數≥200 X104Cfumr1 。
全文摘要
本發明涉及一種生牛乳細菌總數檢測試紙的制作方法，包括對濾紙進行干燥處理；對干燥處理后的濾紙做第一次浸泡，在此次浸泡過程中所采用的浸泡液為表面活性劑與緩沖鹽的水溶液，該水溶液的pH值在6.8-8.0之間，濾紙在該浸泡液中浸泡1～10分鐘；烘干經過第一次浸泡的濾紙；對烘干后的濾紙做第二次浸泡，此次浸泡過程中所采用的浸泡液為刃天青溶液與硫酸鈣溶液混合而成的反應液，刃天青溶液的質量百分比為0.1%～1%，硫酸鈣溶液的質量百分比為0.8%～3.8%，刃天青溶液與硫酸鈣溶液之間的體積比為1:1～10:1，浸泡時間為1～10分鐘；對經過第二次浸泡后的濾紙再次烘干。
文檔編號G01N21/78GK103048316SQ20121053240
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者富鑫 申請人:內蒙古伊利實業集團股份有限公司