專利名稱：一種植物體內莽草酸含量檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物內莽草酸含量的測定新方法，尤其是莽草酸含量檢測試劑盒。
背景技術：
莽草酸[31 -(30，40，53)]-(3，4，5-三羥基-1-環已烯-1-羧酸)是自然界中存在的一種重要的有機酸，在生物的代謝途徑中，莽草酸代謝是其中的重要途徑之一，這種代謝方式存在于大量高等植物與微生物中。莽草酸代謝，就是以莽草酸為中間物質，在生物體內進一步合成分解，生成其它化合物，植物體中固定的碳大約20%來自于莽草酸途徑，莽草酸是植物代謝過程的中間產物。莽草酸過去是用來作為化工原料合成其它化學物質或化學制劑。然而目前瑞士羅氏公司利用莽草酸合成抗流感藥物磷酸奧司他韋(達菲)的原料。“達菲”是世界衛生組織推薦的防治高致病性禽流感藥物，也是目前唯一證實有效治療禽流感藥物。有關莽草酸的藥理作用，除了最受關注的抗禽流感病毒的作用外，還具有其它2個作用(1)抗菌、抗腫瘤作用；(2)對心血管系統的作用，即莽草酸具有抑制凝血系統而發揮抗血栓形成作用。從植物中提取莽草酸是目前獲取天然莽草酸的主要途徑之一。因此，對植物體內莽草酸含量的檢測可明確不同植物體內莽草酸含量的高低，從而為有目的選擇莽草酸含量較高的植物進行提取提供必要的理論依據。此外，農業生產中化學除草劑草甘膦的主要作用機理是抑制雜草體內莽草酸合成途徑的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)的活性，進而導致雜草體內莽草酸的積累。在明確除草劑草甘膦的作用原理和雜草對草甘膦抗藥性方面，也常常把檢測雜草體內莽草酸含量做為一項重要的生理指標。因此，利用莽草酸檢測試劑盒可以方便、快速檢測植物體內莽草酸的含量，在醫藥和農業生產中將具有重要的作用。
發明內容
目前莽草酸含量的測定大都采用高效液相色譜法，操作程序復雜，測定中所用藥品及儀器設備價格昂貴，因此檢測費用較高。在我們的科學研究中，經過大量的研究找到了以顯色反應為基本原理的莽草酸測定試劑，并研制成為測定試劑盒。試劑盒包含=(I)A劑莽草酸提取劑，為0. 25 M的HCl溶液；(2)B劑氧化劑，為0. 25%高碘酸與0. 25%偏高碘酸鉀混合液；(3)C劑顯色劑，為0.6 mo I L-1的NaOH和0. 22 mo I L-1的Na2SO3混合液；(4)D劑莽草酸標準液，是莽草酸標準樣品的鹽酸溶液。
具體實施例方式(I)樣品中莽草酸含量的測定把待測樣品0. 5g左右剪碎，放入5mL血清瓶中，然后向瓶中加入2 ml的A劑，蓋上瓶蓋后浸提90 min，期間每隔半小時晃動I次，成為待測浸提液。向96孔比色板的每個孔中加入IOOii L的B劑,然后加入25 u L待測浸提液，室溫下反應60 min后加入100 U L的C劑，然后用酶標儀在波長380 nm下測定吸光值，每個樣品重復測定3次。(2)標準曲線的配制:從D劑中分別取0，0.01，0. 1,1,5,10,50 U L，用A劑定容至I. O mL,然后在波長380 nm下測定吸光值。結果計算從標準曲線上查得每毫升提取液所含莽草酸的微克數。計算公式莽草酸含量(U g /g) =C V M—1 式中C一每毫升提取液含的莽草酸，單位為ii g/mL ；
V一提取液的總體積，單位為mL ；
M—樣品質量，單位為g ；
利用莽草酸含量檢測試劑盒可以實現莽草酸含量的快速測定，經過多年的研究和在科研中的應用表明在除草劑草甘膦處理抗性雜草后，采用莽草酸測定試劑盒與高效液相色譜法進行莽草酸含量測定比較，結果表明兩種測定方法所得結果無顯著差異(測定結果見表I )，證明莽草酸測定試劑盒可準確測定植物體內莽草酸含量，但與高效液相色譜法相比莽草酸測定試劑盒檢測費用低、方法更簡便、快速。表I莽草酸含量檢測方法對比
權利要求
1.莽草酸測定試劑盒，A劑莽草酸提取劑，為HCl溶液；B劑氧化劑，為高碘酸與偏高碘酸鉀混合液；C劑顯色劑，為NaOH和Na2SO3混合液；D劑莽草酸標準液，是莽草酸標準樣品的鹽酸溶液。
全文摘要
一種植物體內莽草酸含量檢測試劑盒包含(1)A劑莽草酸提取劑，為HCl溶液；(2)B劑氧化劑，為高碘酸與偏高碘酸鉀混合液；(3)C劑顯色劑，為NaOH和Na2SO3混合液；(4)D劑莽草酸標準液，是莽草酸標準樣品的鹽酸溶液。把待測樣品0.5g左右剪碎，放入5mL血清瓶中，然后向瓶中加入2ml的A劑，蓋上瓶蓋后浸提90min，期間每隔0.5小時晃動1次，成為待測浸提液。向96孔比色板的每個孔中加入100μL的B劑，然后加入25μL待測浸提液，室溫下反應60min后加入100μL的C劑，然后用酶標儀在波長380nm下測定吸光值。從D劑中分別取0，0.01，0.1，1，5，10，50μL，加入A劑定容至1.0mL，然后在波長380nm下測定吸光值。
文檔編號G01N1/28GK102980866SQ201210484219
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月26日 優先權日2012年11月26日
發明者丁偉, 程茁, 戴航宇, 劉燕 申請人:東北農業大學