專利名稱：一種偶氮甲酰胺(ada)的hplc檢測方法
技術領域：
本發明屬于食品添加劑的檢測領域，是利用高效液相色譜快速、準確地檢測面粉改良劑偶氮甲酰胺的方法。
背景技術：
偶氮甲酰胺(ADA)作為一種新型面團改良劑，可改善面團的物理操作性質及面制品組織結構，在國外已廣泛應用。在面粉熟化處理方面，能夠氧化小麥粉中的半胱氨酸，從而使面粉筋度增加，提高面團氣體保留量，增加烘焙制品的彈性和韌性，改善面團的可操作性和調理性。由于偶氮甲酰胺屬于堿性物質，如果在食品中超量使用，可能會對人體的腸胃和肝臟造成損害。ADA在高溫下分解產生氣體發泡，同時會生成有毒物質鹽酸氨基脲(SEM)。GB2760-2007中規定了 ADA在小麥粉中的最大使用量為45mg/kg。
雖然我國已規定偶氮甲酰胺在面粉中的最大使用量，但目前還未見有關于面粉中ADA檢測方法的報道，也無相關的檢測標準。
發明內容
本發明目的在于提供一種操作簡便、分析迅速的ADA的高效液相色譜(HPLC)檢測方法。本發明的技術方案如下(I)面粉樣品預處理將樣品用有機溶劑進行ADA的浸泡萃取，離心，取上清液氮吹濃縮至近干，并用20mM乙酸銨水溶液定容,用O. 45 μ m膜過濾,從而完成樣品的前處理；(2) HPIC 條件選用C18或ODS反相色譜柱，采用光電二極管陣列檢測器檢測檢測收波長為246nm;流動相體積比V (CH3OH) V (20mM乙酸銨水溶液)=15 85等度洗脫；流速v =
O.8mT,/mi η ；(3) ADA高效液相色譜檢測標準曲線的繪制準確稱取ADAO. 05g，用N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/LADA儲備液，用水分別稀釋成濃度分別為2、5、10、20、30、40mg/L的標準系列溶液，按照方案⑵的條件進行測定，以ADA濃度為橫坐標，特征峰峰面積為縱坐標繪制標準曲線，用于分析樣品中ADA的含量；(4)樣品的測定根據方案(I)中樣品預處理后，按方案(2)中檢測條件進行檢測，并利用方案(3)中得到的標準曲線計算樣品中ADA含量。本發明的優點與有益效果是采用本發明的HPLC法檢測面粉中ADA，并使用光電二極管陣列檢測器，可以根據掃描光譜對目標物進行進一步定性，方便快捷，靈敏度高，檢測限低，有利于ADA的快速檢測，可用于大規模樣品檢測，適于標準化。
圖I 為 ADA 標準品的 HPLC 圖譜；Hypersil 0DS2 色譜柱(5 μ mX4. 6mmX 150mm)，光電二極管陣列紫外檢測器，吸收波長為246nm，流動相體積比CH3OH 20mM乙酸銨水溶液為15 : 85等度洗脫，流速O. 8mL/min)圖2為ADA的標準曲線，橫坐標為ADA濃度，縱坐標為ADA色譜峰峰面積。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明，但本發明并不僅僅局限于下述實施例。實施例I準確稱取ADA 0.0500g，用DMF定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/L的ADA儲備液，置于4°C冰箱中保存。取一定量的1000mg/mL的ADA標準儲備液，用去離子水稀釋成濃度分別為2、5、10、20、30、40mg/L的標準系列溶液，利用HPLC進行測定，檢測波長為246nm，以峰面積(Y)對濃度X(mg/L)進行線性回歸，繪制標準曲線(圖2)，得標準曲線函數關系為Y = 113967Χ-24180，相關系數為R2 = 0. 9996，線性良好，可用于定量樣品中ADA的含量。實施例2選取配料表中表明添加ADA的面粉樣品，準確稱取面粉lg(精確到0. OOOlg)于50mL離心管中，加入IOmL丙酮，潤旋均勻，震蕩旋轉20min,離心,取上清液氮吹至近干,用2mL20mM乙酸銨水溶液定容。濃縮液過0. 45 μ m —次性微孔濾膜，濾液注入HPLC分析。對面粉做三個平行樣品，結果見表I。對平行樣I重復測定6次，分析結果見表2。通過分析知，平行樣品的相對標準偏差(RSD)為2. 44，重復測定實驗的相對標準偏差為
2.17%，重復性較好。表I面粉樣品中ADA的含量
權利要求
1.一種偶氮甲酰胺的高效液相色譜檢測方法，其特征在于包括如下步驟 (1)將樣品用有機溶劑進行偶氮甲酰胺(ADA)的浸泡萃取，離心，取上清液氮吹濃縮至近干，并用20mM乙酸銨水溶液定容,用O. 45 μ m膜過濾，從而完成樣品的前處理； (2)用高效液相色譜(HPLC)測定樣品中ADA:選用反相色譜柱，甲醇和20mM乙酸銨水溶液作為流動相，采用光電二極管陣列檢測器，設置檢測波長為246nm，掃描范圍為190_400nm ； (3)將步驟(I)所得的經過處理的樣品按步驟(2)設定的參數進行HPLC檢測。
2.根據權利要求I所述的ADA的HPLC檢測方法，其特征在于所述步驟(I)中萃取用的有機溶劑為丙酮。
3.根據權利要求I所述的ADA的HPLC檢測方法檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中所用反相色譜柱可為C18或ODS色譜柱。
4.根據權利要求I所述的ADA的HPLC檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中流動相的體積比為V(甲醇)V(20mM乙酸銨水溶液)=15 85。
全文摘要
本發明屬于面粉改良劑偶氮甲酰胺(ADA)的檢測領域。包括如下步驟用丙酮對面粉中的ADA進行浸泡萃取，離心，取上清液氮吹濃縮至近干，并用20mM乙酸銨水溶液定容，用0.45μm膜過濾；然后高效液相色譜儀檢測樣品中的ADA，選用C18或ODS反相色譜柱，光電二極管陣列檢測器，檢測波長為246nm，采用甲醇和20mM乙酸銨水溶液作為流動相對樣品進行檢測。本方法提供了一種檢測速度快，靈敏度高，檢測成本低的ADA測定方法。
文檔編號G01N30/89GK102841172SQ20121036364
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者李培, 袁麗紅, 丁洪流, 陳英, 張錦, 謝云飛, 姚衛蓉 申請人:蘇州市產品質量監督檢驗所, 江南大學