專利名稱：：用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法
技術領域：
：本發明涉及油脂樣品的預處理方法，尤其涉及用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法。
背景技術：
：本發明涉及的油脂樣品的預處理方法是用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理。氯丙醇酯是油脂及含油脂食品在熱加工過程中形成的副產物，目前被認為是潛在的食品安全危害因子之一。目前文獻報道的用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法主要采用硅膠柱層析和固相萃取柱萃取兩類。Zelinkovdi采用娃膠柱層析的方法進行乳脂樣品的前處理(Haines,T.D.,etal.,DirectDeterminationofMCPDFattyAcidEstersandGlycidylFattyAcidEstersinVegetableOilsbyLC-TOFMS.JournaloftheAmericanOilChemistsSociety,2011.88(1):1-14.):200mg乳脂中加入7.26μg氘代3-氯丙醇ニ棕櫚酸酷(3-MCPD_d5-l，2-dipalmitate)內標物，用ImL正己燒溶解后上樣到330X20mm娃膠柱(silicagel60,70-230mesh；Merck,Darmstadt,Germany)，用石油醚(沸點4565°C):こ醚=955(v/v)混合溶劑500mL以4mL/min的速率洗脫，收集含有3-氯丙醇酯的組分，旋蒸后,用200μL四氫呋喃溶解,準備進行GC-MS分析。Moravcova從油脂樣品中分離3_氯丙醇ニ酯也采用了娃膠柱層析的方法(Moravcova,E.,etal.,NovelapproachestoanalysisofJ-chloropropane—l,2—diolestersinvegetableoils.AnalBiana丄Chem,2012.402(9)=2871-83.):稱量8±0.Img油樣于2mL小瓶中，用30yL氘代內標溶液(3-MCPD-d5-l,2-dipalmitate的こ酸こ酯溶液，濃度300ng/mL)溶解，然后上樣到裝填了I.8g硅膠(用正己烷こ醚=964，v/v混合溶劑溶脹)的180X4mm玻璃柱，用30mL正己燒こ醚=964,v/v混合溶劑洗脫,流速0.8mL/min,收集525mL的部分(含有3-氯丙醇ニ酯)，旋轉蒸發溶剤，用200μL甲醇重新溶解準備進行U-HPLC-MS和DART-MS分析。硅膠柱層析方法的不足之處是整個預處理的周期較長，且柱子的裝填效果直接影響樣品預處理的效果，樣品預處理結果的再現性受到很大影響。Moravcova采用了固相萃取柱萃取的方法從油脂樣品中分離3_氯丙醇單酯(Moravcova,E.,etal.,NovelapproachestoanalysisοιJ-cnloropropane-l,2-diolestersinvegetableoils.AnalBianalChem,2012.402(9):2871-83.)稱量100土Img油樣于2mL小瓶中，用50μL正己燒和60μL同位素標記的標準溶液(3-MCPD-d5-monopalmitate的こ酸こ酯溶液，濃度60ng/mL)溶解，上樣到已用2X2mL正己燒活化好的固相萃取柱(aminopropylSPEcartridge,500mg)上，真空條件下，先用8mL正己燒ニ氯甲燒こ醚=8910I(v/v/v)混合溶劑洗脫并棄去，接著用2mL正己烷こ酸こ酷=8515(v/v)混合溶劑洗脫并棄去，最后用IOmL正己烷こ酸こ酷=8515(v/v)混合溶劑洗脫并收集，旋轉蒸發，用250μL甲醇重新溶解準備進行分析。Hori也利用固相萃取柱對油脂樣品進行了前處理(Hori,K.,etal.,SimultaneousdeterminationofJ-MしPDiattyacidestersandglycido丄fattyacidestersinedibleoilsusingliquidchromatographytime-of-flightmassspectrometry.LffT-FoodScienceandTechnology,2012.48(2):204-208.):準確稱量IOmg油樣于螺旋蓋玻璃管中，加入2mLこ腈的正己烷飽和溶液、2mL正己烷的こ腈飽和溶液及20mL內標溶液，混合溶液振搖lmin，于3500Xg條件下離心lOmin，正己烷相上樣到用4mL正己烷平衡好的固相萃取柱(Sep-PakPlusSIcartridges,500mg),用4mL氯仿洗脫并收集；こ腈相上樣到用ImL甲醇、2mLこ腈平衡好的固相萃取柱(Sep-PakPlusC18cartridges,500mg),先后用2mLこ腈和2mLこ酸こ酯洗脫并收集，收集的正己烷相和こ腈相混合，并用氮氣吹干，用ImLこ腈溶解，準備進行LC/T0F-MS分析。固相萃取柱萃取方法的不足之處是固相萃取柱的價格較高，使得樣品預處理的成本増加，同時其對活化和洗脫過程中的流速有較高的要求，加上萃取柱本身易被污染，從而提高了對整個預處理過程的操作要求，操作過程中稍有不慎就會導致樣品預處理的結果不理想。本發明方法以有機溶劑除去油脂中的甘油三酯組分，然后采用高效液相色譜收集油脂中的氯丙醇酯組分，其中，色譜條件為使用C18色譜柱，分別以こ腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速lmL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為55。
發明內容本發明克服現有技術中的缺點，提供了ー種操作簡單、預處理結果重現性好、預處理成本低的用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法，在食品、醫藥、環境等許多分析領域有著較高的應用價值。為了解決上述技術的問題，本發明是通過以下技術方案實現的用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法，其特征在于，具體步驟為第一歩將油脂加熱到液體狀態，用有機溶劑去除甘油三酯；第二步測定當日用こ腈稀釋配制氯丙醇酯標準溶液，其濃度為Cs，用O.2μm孔徑過濾膜過濾得到標準溶液，高效液相色譜檢測得到氯丙醇酯的流出時間，色譜條件為使用C18色譜柱，分別以こ腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速lmL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為5:5;第三步將第一歩所得的有機溶劑相用O.2μπι孔徑過濾膜過濾，采用與第二步相同的色譜條件收集與氯丙醇酯標準品保留時間一致的組分，從而得到油脂樣品中的氯丙醇酷。所述第一歩中將油脂預處理除去甘三酯的具體步驟為在油脂樣本中加入2倍體積的こ腈，鏇潤振蕩30s,以轉速10000r/min離心IOmin,取上清。與現有技術相比，本發明的優點在于能夠通過簡單的方法對用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品進行預處理。具體實施例方式下面結合實施例來具體說明本發明。實施例I用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法第一歩將煎炸30h后的28度棕櫚油樣本加熱，使呈液體狀態，加入2倍體積的こ腈，鏇潤振蕩30s,以轉速10000r/min離心IOmin,取上清；第二歩用こ腈稀釋配制氯丙醇ニ油酸酯和氯丙醇單硬脂酸酯標準溶液，其濃度Cs均為O.156mg/mL，用O.2μm孔徑過濾膜過濾得到標準溶液，高效液相色譜檢測得到氯丙醇單硬脂酸酯的流出時間為2.74min，氯丙醇ニ油酸酯的流出時間為5.36min，色譜條件為使用C18色譜柱(4.6X150mm;5μm;SunFire;Waters,MadeinIreland),進樣量5μL，分別以こ腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速lmL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為5:5;第三步將第一歩所得的こ腈相溶液用O.2μπι孔徑過濾膜過濾得到樣品溶液，采用與第二步相同的色譜條件，收集流出時間在26min的組分，從而得到油脂樣品中的氯丙醇酯。實施例2另ー種用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法第一歩于添加3%氯化鈉、5%水于240°C加熱3h后的玉米油樣本中加入2倍體積的こ腈，鏇潤振蕩30s,以轉速10000r/min離心IOmin,取上清；第二步用こ腈稀釋配制氯丙醇ニ油酸酯和氯丙醇單硬脂酸酯標準溶液，其濃度Cs均為0.156mg/mL，用0.2μm孔徑過濾膜過濾得到標準溶液，高效液相色譜檢測得到氯丙醇單硬脂酸酯的流出時間為2.74min，氯丙醇ニ油酸酯的流出時間為5.36min，色譜條件為使用C18色譜柱(4.6X150mm;5μm;SunFire;Waters,MadeinIreland),進樣量5μL，分別以こ腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速lmL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為5:5;第三步將第一歩所得的こ腈相溶液用0.2μπι孔徑過濾膜過濾得到樣品溶液，采用與第二步相同的色譜條件，收集流出時間在26min的組分，從而得到油脂樣品中的氯丙醇酯。權利要求1.用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法，其特征在于，具體步驟為第一歩將油脂加熱到液體狀態，用有機溶劑去除甘油三酯；第二步測定當日用こ腈稀釋配制氯丙醇酯標準溶液，其濃度為Cs，用O.2μm孔徑過濾膜過濾得到標準溶液，高效液相色譜檢測得到氯丙醇酯的流出時間，色譜條件為使用C18色譜柱，分別以こ腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速lmL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為5:5;第三步將第一歩所得的有機溶劑相用O.2μπι孔徑過濾膜過濾，采用與第二步相同的色譜條件收集與氯丙醇酯標準品保留時間一致的組分，從而得到油脂樣品中的氯丙醇酷。2.如權利要求I所述的用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法，其特征在于，所述第一歩中將油脂預處理除去甘三酯的具體步驟為在油脂樣本中加入2倍體積的こ臆，鏇潤振蕩30s,以轉速10000r/min離心IOmin,取上清。全文摘要本發明提供了用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品預處理方法，其特征在于，具體步驟為取油脂除去甘油三酯后采用高效液相色譜收集油脂中的氯丙醇酯組分，其中，色譜條件為使用C18色譜柱，分別以乙腈和異丙醇為流動相A和流動相B，以流速1mL/min等度洗脫，蒸發光散射檢測器進行檢測，流動相A和流動相B的體積比為5∶5。本發明的優點在于能夠通過簡單的方法對用于檢測油脂中氯丙醇酯的樣品進行預處理。文檔編號G01N1/28GK102854042SQ201210324488公開日2013年1月2日申請日期2012年9月5日優先權日2012年9月5日發明者金青哲,周紅茹,王興國,楊嬌,周克茹,孫雪梅申請人:江南大學