專利名稱：桑椹配方顆粒的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種桑椹配方顆粒的檢測方法，屬于中藥質量檢測領域。
背景技術：
桑椹配方顆粒為桑科植物桑Morus allba L.的干燥果穗經加工制成的配方顆粒，味甘、酸，寒，歸心、肝、腎經，具有補血滋陰，生津潤燥之功效，主要用于眩暈耳鳴，心悸失目民，須發早白，津傷口渴，內熱消渴，血虛便秘等癥。中藥配方顆粒是以符合炮制規范的單味中藥飲片為原料，采用現代制藥工業的先進工藝和方法，經提取、濃縮、干燥、制粒制成一定規格供醫療機構臨床配方使用的制成品，是中藥飲片的一種補充形式，可供臨床醫生代替中藥飲片使用，變傳統中藥湯劑的大包飲 片用砂鍋合煎、過濾飲服等繁雜操作為規范化工業大生產、小包裝、水沖即服。與傳統中藥飲片相比，工業化批量生產的中藥配方顆粒，品質均一，依據質量標準檢測的結果(數據和圖譜)重現性好，既保持了原中藥飲片的藥性、藥味和藥效，又具有不需煎煮，療效確切，安全方便等優點，是傳統中藥飲片與時俱進的產物，是“源于飲片，高于飲片”的現代中藥湯齊U。中藥配方顆粒不僅用于中醫臨床配方，而且還可用作中成藥的原料藥品、用于保健食品、食品、日用化妝品、精細化工品、獸用藥品等方面。它將成為介于中藥飲片和中成藥之間的一個新興產業。與傳統的中藥煎劑相比，中藥配方顆粒具有免煎易服，易儲存，攜帶方便等優點。《中國藥典》2010年版一部收載了桑椹藥材品種，但并未收載薄層鑒別方法及含量測定方法，而中藥配方顆粒經過一系列工序的加工后已失去藥材的外形特征，只靠性狀鑒別已不適用于中藥配方顆粒，且不能滿足對其質量進行控制的目的。薄層色譜法操作簡單，方便，適用于中藥材及各種中藥制劑的定性鑒別，高效液相色譜法靈敏度高，適用于各種制劑的定量分析。本發明采用薄層色譜法對桑椹配方顆粒進行定性鑒別，同時采用高效液相色譜法對其中的黃酮類成分蘆丁進行含量測定，旨在建立一種桑椹配方顆粒的檢測方法，該方法可用于桑椹配方顆粒的質量控制，對保證產品質量的穩定性及臨床用藥的有效性與安全性具有重要意義。
發明內容
本發明的目的在于提供一種桑椹配方顆粒的檢測方法。實現上述目的的技術方案如下。一種桑椹配方顆粒的檢測方法，包括以下步驟(I)制備供試品溶液取桑椹配方顆粒的粉末lg，加乙醇29_31ml，回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，作為供試品溶液；(2)制備對照藥材溶液另取桑椹對照藥材2g，加水，煮沸，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇29_31ml，再回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，制成對照藥材溶液；(3)測定照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3 8 5的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視。在其中一個實施例中，還包括有照高效液相色譜法進行含量測定色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為18 82的乙腈-O. 4% (體積百分比)磷酸為流動相，DAD檢測器檢測，檢測波長360nm，柱溫25°C，流速lml/min ；
制備對照品溶液精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每Iml含蘆丁22. 0-22. 5ng的溶液，即得；制備供試品溶液取桑椹配方顆粒2. 35-2. 65g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理25-35分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定分別精密吸取對照品溶液4μ I、供試品溶液20μ 1，注入液相色譜儀，測定。本發明通過最優的參數組合，所述薄層色譜法方法簡單、準確，靈敏度高，精密度、穩定性好，采用HPLC法測定桑椹配方顆粒中蘆丁的含量，峰形好，分離度高，可作為桑椹配方顆粒的質量控制和考察工藝穩定性的有效技術手段，對提高產品質量具有重大意義。
圖I是本發明中桑椹配方顆粒TLC圖，其中，1-4是四批桑椹配方顆粒供試品，5是桑椹對照藥材；圖2是本發明中桑椹配方顆粒HPLC圖譜，其中，A為對照品，B為供試品，I為蘆丁。
具體實施例方式以下實施例中所述桑椹配方顆粒生產廠家為廣東一方制藥有限公司。實施例I :一、桑椹配方顆粒的薄層色譜鑒別(I)制備供試品溶液取桑椹配方顆粒的粉末lg，加乙醇30ml，回流提取40分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加乙酸乙酯-乙醇(體積比2 I)的混合溶液2ml使溶解，作為供試品溶液；(2)制備對照藥材溶液另取桑椹對照藥材2g,加水60ml,煮沸30分鐘,濾過,濾液蒸干，殘渣加乙醇30ml，回流提取40分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加乙酸乙酯-乙醇(體積比2 I)的混合溶液2ml使溶解，制成對照藥材溶液；(3)測定照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30 60°C)_三氯甲烷-乙酸乙酯(體積比3 8 5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% (體積百分比)硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的藍色熒光斑點。請參見圖1，為4批(四個批號分別為:11102206、11102207、11102208、11102209)桑椹配方顆粒的薄層色譜圖，采用該方法對桑椹配方顆粒進行薄層鑒別，所得斑點清晰，分離度好，Rf值適中，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的藍色熒光斑點，可用于對桑椹配方顆粒的定性鑒別。二、[含量測定]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；I、儀器與試藥(I)儀器Agilent 1200高效液相色譜儀，DAD檢測器，四元梯度泵，G2170AA數據
處理系統。(2)試藥乙腈為色譜純試劑(一級)，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。蘆丁對照品(批號100080-200707)購于中國藥品生物制品檢定所。2、實驗條件 (I)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax Extend C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)柱；流動相乙腈-0.4% (體積百分比)磷酸溶液(體積比為18 82);檢測波長360nm;柱溫25°C ;流速1. Oml/min。制備對照品溶液精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每Iml含蘆丁 22. 3ng的溶液，即得；制備供試品溶液取桑椹配方顆粒粉末2. 5042g,置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定分別精密吸取對照品溶液4 μ I、供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定。測定結果如下樣品含量測定結果(η = 2)
批號蘆丁含量(mg/g)-
111022070.07149請參見圖2。在該方法所述的色譜條件下，所得蘆丁的峰峰形好，分離度高，能將桑椹配方顆粒中蘆丁成分很好地檢測出來。3、方法學考察(I)線性范圍的考察分別精密吸取對照品溶液(每Iml含蘆丁 22. 3ng) 2 μ 1、3 μ 1、4 μ 1、5 μ 1、6 μ 1，注入液相色譜儀進行色譜測定(按上述方法進行，以下相同)，按上述色譜條件測定峰面積，并以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，得標準曲線。Y=L 24166709Χ+1. 1502136，r = O. 99981 ；表明蘆丁在44. 6-133. 8ng范圍內呈線性關系，結果見表I。表I蘆丁對照品測定結果
權利要求
1.一種桑椹配方顆粒的檢測方法，其特征在于，包括照薄層色譜法進行檢測，所述照薄層色譜法包括以下步驟 (1)制備供試品溶液 取桑椹配方顆粒的粉末lg，加乙醇29-31ml，回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，作為供試品溶液； (2)制備對照藥材溶液 取桑椹對照藥材2g，加水，煮沸，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇29-31ml，再回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，制成對照藥材溶液； (3)測定 照薄層色譜法，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3 8 5的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視。
2.根據權利要求I所述的桑椹配方顆粒的檢測方法，其特征在于，所述制備供試品溶液為 取桑椹配方顆粒的粉末lg，加乙醇30ml，回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 : I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液2ml使溶解，作為供試品溶液；所述制備對照藥材溶液為 另取桑椹對照藥材2g，加水58-62ml，煮沸，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇30ml，再回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液2ml使溶解，制成對照藥材溶液。
3.一種桑椹配方顆粒的檢測方法，其特征在于，包括有高效液相色譜進行測定 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為18 82的乙腈-O. 4%磷酸為流動相，DAD檢測器檢測，檢測波長360nm，柱溫25°C，流速lml/min ； 制備對照品溶液精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每Iml含蘆丁 22. 0-22. 5ng的溶液，即得； 制備供試品溶液取桑椹配方顆粒粉末2. 35-2. 65g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理25-35分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； 測定分別精密吸取對照品溶液4 μ I、供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定。
4.一種桑椹配方顆粒的檢測方法，其特征在于，包括薄層色譜法和高效液相色譜法進行檢測， 所述薄層色譜法包括以下步驟 (1)制備供試品溶液 取桑椹配方顆粒的粉末lg，加乙醇29-31ml，回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，作為供試品溶液； (2)制備對照藥材溶液 另取桑椹對照藥材2g，加水，煮沸，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇29-31ml，再回流提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加體積比為2 I的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液I. 9-2. Iml使溶解，制成對照藥材溶液； (3)測定 照薄層色譜法，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3 8 5的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視； 所述照高效液相色譜進行測定，包括以下步驟 (A)制備對照品溶液精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每Iml含蘆丁22. 0-22. 5ng的溶液，即得; (B)制備供試品溶液取桑椹配方顆粒粉末2.35-2. 65g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理25-35分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； (C)測定色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為18 82的乙腈-O. 4%磷酸為流動相，DAD檢測器檢測，檢測波長360nm，柱溫25°C，流速lml/min ;分別精密吸取對照品溶液4 μ I、供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定。
全文摘要
本發明公開了一種桑椹配方顆粒的檢測方法，包括薄層色譜法、高效液相色譜法進行檢測，所述薄層色譜法包括以下步驟制備供試品溶液；制備對照藥材溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液10μl、對照藥材溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3∶8∶5的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視。本發明的優點在于方法簡單、準確，靈敏度高，精密度、穩定性好，采用HPLC法測定桑椹配方顆粒中蘆丁的含量，峰形好，分離度高，可作為桑椹配方顆粒的質量控制和考察工藝穩定性的有效技術手段，對提高產品質量具有重大意義。
文檔編號G01N30/88GK102830198SQ201210303570
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月23日 優先權日2012年8月23日
發明者涂瑤生 申請人:涂瑤生